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门诊276例高危型人乳头瘤病毒阳性妇女的长期随访研究
目的：探讨门诊276例高危型人乳头瘤病毒( HR-HRV)阳性妇女的长期随访结果。方法病例选择于2010年2月至2012年2月医院妇科门诊行宫颈癌及癌前病变筛查异常的妇女985例,对定量HR-HPV DNA荧光定量结果阳性,TCT为阴性或宫颈病理检查正常的276例患者行长期随访观察。结果随访2年,276例HR-HPV阳性患者转阴率为68．47%,HR-HPV持续阳性率为31．52%；28例病理结果≥CINⅠ级,占10．14%；其中14例CINⅡ~Ⅲ患者接受手术治疗,治疗后病毒载量(14．36±3．52) RLU/CO显著低于治疗前(342．61±76．69) RLU/CO,差异有统计学意义( P<0．05)；术后12个月HR-HPV转阴率为85．71%。年龄≤35岁、个人性伴侣1~2个、无生殖道炎症、初病毒载量为1~99 RLU/CO患者HR-HPV清除率分别为88．98%、81．82%、60．33%、83．20%,显著高于年龄>36岁、个人性伴侣≥3个、生殖道炎症、初病毒载量为100~1000RLU/CO,差异有统计学意义(P<0．05)；非条件Logistic回归分析结果显示年龄、多个性伴侣、生殖道炎症、高病毒载量与HR-HPV清除率存在显著相关性。结论年龄、性伴侣个数、生殖道炎症、病毒载量与HR-HPV清除率存在显著相关性,临床定期随访,密切关注HR-HPV转阴情况,必要时给予干预治疗。
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聚乙二醇干扰素α-2a治疗慢性乙肝发生HBsAg/抗-HBs血清学转换1例
1 临床资料患者,女,14岁.因乙肝大三阳(HbsAg/HBeAg/抗-HBc均阳性),肝功能异常3年来我院就诊,查ALT342IU/L,AST 229IU/L,HBV-DNA 2.71E+06拷贝/ml(荧光定量PCR法),血常规正常,按照2000年病毒性肝炎防治方案诊断标准[1],确诊为HBeAg阳性慢性乙肝.
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荧光定量PCR法在孕晚期妇女生殖道B族链球菌带菌检出情况分析
目的:了解黔南地区孕晚期(孕35～37周)妇女生殖道中B族链球菌(GBS)的带茵情况.方法:2017年6月至2018年5月来黔南州中医院产科门诊就诊的孕晚期(孕35 ～ 37周)孕妇,取孕妇阴道分泌物送检,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测GBS,并对检测结果进行分析.结果:黔南地区孕晚期妇女生殖道GBS带茵检出率为2.3％ (23/1 026),且对所检查孕妇进行追踪,GBS阴性孕妇产后未出现孕妇及胎儿感染现象.结论:黔南地区晚孕期妇女GBS带菌率尚在健康人群带菌率的范围内,应加强对广大孕晚期孕妇的宣传,积极的加强GBS的检测,做到早预防、早治疗.
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荧光定量PCR早期诊断12例甲型副伤寒
伤寒、副伤寒沙门菌一直是贵州省肠道传染病中常见的病原菌之一,尤其近年来甲型副伤寒在我省散发及流行[1],其预后与治疗的早晚密切相关,对甲型副伤寒沙门菌的快速、准确检测是早期诊断和控制流行的重要手段.现在甲型副伤寒的临床表现越来越不典型,诊断需依赖实验室检查,但现存的实验室诊断方法不能满足临床的需要,目前分子生物学技术发展较快,本课题拟从细菌的基因水平着手,希望能建立一种早期、快速、特异性高、敏感性强、能较好地辅助临床早期诊断甲型副伤寒的实验室方法.
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淋巴结细针穿刺细胞学检查对淋巴结结核诊断的研究应用
结核病是严重危害人类健康的一种传染病.淋巴结结核在淋巴结肿大疾病中,仅次于慢性淋巴腺炎,居第二位,可单独存在或合并肺结核、肠结核.本组总结我们收集的100例淋巴腺结核针吸细胞学特点及分型诊断资料,现报告如下.1 临床资料收集我院门诊、住院结核性淋巴结炎100例,男38例,占38％,女62例,占62％,年龄2～65岁,平均32.2岁.诊断及分型标准,根据细胞学特征、抗酸染色结果及荧光定量PCR结果确定.选择淋巴结肿大的有意义部位,严格消毒,用一次性10 mL注射器左手固定肿物,右手持针,刺入皮下,在穿入肿大淋巴结内各部位,抽吸其细胞液,涂片,干燥后瑞氏染色(对部分干酪样坏死标本,做抗酸染色,经患者同意,21例标本做PCR检测),晾干后,先用低倍镜仔细查找特殊异常细胞,再用高倍镜、油镜观察细胞形态、结构特征,部分病例结合抗酸染色或荧光定量PCR检测结果做出诊断[1].
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荧光定量PCR在诊断尖锐湿疣中的应用
尖锐湿疣是性病的一种,是常见的因感染人乳头瘤病毒(HPV)所致的疾病.HPV有多种血清型,主要有6、11、16、18、31、33、52b、58等血清型.我们使用荧光定量PCR法检测HPVDNA的载量[1],为尖锐湿疣的临床诊断和鉴别诊断在分子水平上提供了理想的方法.我们采集了本院性病门诊311例临床诊断为尖锐湿疣(CA)的患者疣体组织,进行HPV定量测定,来研究了解CA患者HPV病毒载量及分型与临床关系,结果报告如下.
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BCR-ABL融合基因核酸检测试剂的研发及临床应用
目的 研发同时检测多种BCR-ABL融合基因类型的试剂并建立相对应的荧光定量检测方法,同时进行临床标本检测.方法 检索GeneBank等生物信息数据库,获得BCR-ABL基因可能的融合亚型,对亚型之间的序列进行比对并设计BCR-ABL融合基因特异性引物,从而应用质粒建立新的荧光定量体系.收集武汉大学人民医院2014年1月1日～11月31日住院部确诊为初发白血病患者30例,其中慢性髓细胞白血病15例,急性淋巴细胞白血病15例,另同时收集体检中心健康对照20例.应用新建立体系、商品试剂盒及直接测序法进行BCR-ABL融合基因的检测.结果 新建荧光定量PCR体系准确度验证结果阳性符合率为100％,阴性符合率为100％;特异性验证结果各干扰项检测均为阴性;可检测11种融合基因类型.对BCR-ABL融合基因亚型e13a2,e14a2和e1a2的检测新方法阳性符合率为100％(10/10),阴性符合率为100％(5/5).对稀有融合基因亚型e19a2检测新方法检测阳性率100％(2/2),商品试剂盒检测阳性率为0％(0/2).新方法与直接测序法相比阳性符合率为100％(16/16),阴性符合率为100％(14/14).结论 以研发的BCR-ABL融合基因检测试剂而建立的荧光定量方法检测BCR-ABL融合基因与测序结果符合率为100％,是一种快速、可靠的检测方法,可应用于临床.
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荧光定量PCR法检测HBV-DNA室内质控物的制备及质控图的应用
目的 制备HBV-DNA荧光定量PCR检测室内质控物,建立室内质控管理体系,利用Excel表格进行质控图的绘制.方法 取单一浓度HBV-DNA阳性血清,稀释至一定浓度后,分装数管,-70℃保存.连续检测20次,计算均值、标准差和变异系数,绘制质控图,进行室内质控动态监测.结果 HBV-DNA室内质控均值的对数值为5.573,标准差为0.244,变异系数为4.4%,稳定性很好,有临床应用价值,质控图利用Excel表格标示出警告限和失控限,有利于动态监控.结论 荧光定量PCR方法进行HBV-DNA检测的质控物制备简单,稳定性良好,质控图操作方便,一目了然,适合临床实验室应用和推广.
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荧光定量PCR法测定HBV DNA的室内质控
临床基因诊断实验室,有着现代化的实验条件和具备一定的理论及实践基础的技术人员,在欧美发达国家,临床基因诊断技术有一整套的标准化措施,并受到严格的质量管理[1].目前,国内通过卫生部临检中心验收的临床基因诊断实验室,越来越多,虽然各实验室都在加强实验室管理,重视室内质量控制工作,但到目前,室内质控仍然未形成完整的质量控制体系或系统.我们在实际工作中,将生化、免疫的室内质控进行了组合,运用到临床基因诊断实验室的HBV DNA的室内质量控制,制定了一套较为完善的室内质量控制系统.
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采用荧光定量RT-PCR法检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道
目的 建立用SYBR Green荧光染料检测超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN4)的实时定量RT-PCR方法.方法 提取窦房结细胞的总RNA,反转录成cDNA后,应用RT-PCR法检测HCN4的表达,通过琼脂糖凝胶回收PCR产物并构建重组质粒,用梯度稀释的质粒模板建立荧光定量RT-PCR法检测HCN4的标准曲线,并检测心脏组织中HCN4的表达水平.结果 成功构建了质粒重组子,并建立用SYBR Green荧光染料在RNA水平检测HCN4通道的标准曲线,相关系数为0.997重复6次实验组内和组间变异系数均<1.0%.心脏组织中窦房结HCN4表达量高,心室表达量低.结论 基于SYBR Green荧光染料建立的定量RT-PCR体系敏感性高,线性范同广,重复性好,可快速准确地检测HCN4的表达.
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丙型肝炎病毒感染的不同人群HCV RNA定量研究
目的 了解丙型肝炎病毒感染的不同人群血清HCV RNA水平，比较 定性和定量PCR结果，探讨 HCV含量与血清ALT的相关性. 方法 采用荧光定量PCR和逆转录巢式定性PC R同时检测136例 丙型肝炎病毒感染者血清HCV RNA，并测定定量PCR (+)者血清ALT. 用相关系数分析HCV RNA 含量与血 清ALT的关系. 结果 定性PCR阳性率为80.88%，定量PCR阳性率为77.94%. 两者相对符合率 为94.12%. 定量PCR (+)血清(106例)HCV RNA含量在107.04～1010.96拷贝 *L-1. 无症状献血员HCV RNA含量显著低于慢性丙型肝炎、肝硬变和肝细胞癌患者( P<0.05)，肝细胞癌患者血清A LT水平显著低于慢性丙型肝炎(P<0.05). HCV RNA滴度与血清ALT呈正相关(r=0.61, P<0.01). 结论 定性和定量检测结果有很好的一致性. 病毒复制水 平上升在肝损伤和肝病进展中可能起重要作用.
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血清乙肝病毒抗体与HBV-DNA关系的临床分析
由于分子生物学技术的迅猛发展,人们对乙肝病毒(HBV)相关抗体,尤其是抗-HBs的临床意义有了新的认识.就此本院肠道门诊收集122例HBV相关抗体阳性血清,应用全自动荧光定量PCR仪来检测血清HBV-DNA(拷贝/mL)与相关抗体间的关系.分析如下:
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诺如病毒检测技术研究
诺如病毒是非细菌性腹泻暴发的主要病原之一,对相关检测技术的研究十分必要.本文通过引物、探针、染料的选择,结合适用范围、灵敏度、特异性、重复性的评估对常规反转录-聚合酶链反应、荧光定量RT-PCR、反转录-环介导等温扩增、基因芯片、酶联免疫吸附测定和荧光微球检测条快速检测诺如病毒的技术进行了综述.着重关注了食品和水中诺如病毒检测的病毒富集技术,并提出平衡准确灵敏与简便高效对诺如病毒检测技术的研究具有重要意义.
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喉乳头状瘤组织中HPV16、18病毒的检测
目的 检测喉乳头状瘤组织人乳头状瘤病毒(HPV) DNA含量,探讨HPV感染与喉乳头状瘤的关联性和喉乳头状瘤发病的分子生物学机制.方法 应用荧光探针标记引物的定量聚合酶链反应技术对35例喉乳头状瘤组织、20例声带息肉组织中HPV16、18 DNA的含量进行检测.结果 35例喉乳头状瘤组织中HPV16 DNA阳性25例,其DNA模板平均拷贝数为4.89× 105 (1.2× 103～2.41× 107),HPV18DNA阳性8例,其DNA模板平均拷贝数为1.54×104 (1.09×103 ～5.36×105),其中HPV16、18 DNA均为阳性4例；HPV18 DNA阳性而HPV16 DNA阴性3例；HPV16 DNA阳性而HPV18 DNA阴性18例,其DNA模板平均拷贝数为2.83× 106 (1.2×103～2.41×107).20例声带息肉组织HPV16、18 DNA均阴性.二者具有显著性差异(P＜0.01).结论 HPV16、18感染是喉乳头状瘤致病的重要因素,HPV16 DNA含量与喉乳头状瘤的发生有一定的相关性,荧光定量PCR技术对检测HPV16、18的感染和喉乳头状瘤早期诊断是一种有效方法.
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血液病毒筛查中血清学和核酸检测方法应用评估
对献血者血样进行HBsAg、抗HCV和抗HIV-1/2血清学筛查可预防和控制输血相关传染病,但抗体检测对处于病毒感染"窗口期"的献血者不易检出,使得输血传染病不能完全避免.美、日和欧洲的一些国家已陆续将核酸检测(NAT)纳入献血者的常规筛查,输血感染传染病的危险性有所降低,但在我国这三种病毒的流行病学特征与国外不尽相同,照搬国外检测模式存在效益与成本的问题.目前我国大规模血液病毒筛查模式为:采用血清学方法对血液中HB-sAg,抗HCV和抗HIV-1/2抗体进行两遍酶联检测,近年来部分血站开始对酶联检测阴性的血样再做荧光定量核酸检测.本文将对血液病毒筛查中的血清学和核酸检测两种方法对比的研究进展作一综述,探讨适用于我国血液病毒筛查的检测模式.
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乙肝指标在急、慢性肝炎中临床意义的差异
本文用荧光定量PCR方法检测血清中的乙型肝炎病毒(HBV)DNA[1],以研究乙肝指标在急、慢性肝炎中临床意义的差异.
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罗式荧光定量lightcycler PCR仪检修
我院购买的罗式荧光定量lightcycler PCR仪至今已三年多了,该仪器具有检测速度快,检测线性范围宽等特点.
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柯萨奇病毒A组16型中和抗体假病毒荧光定量检测方法的建立及初步应用
目的 建立一种简单、快速、高通量的检测柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)中和抗体假病毒荧光定量检测方法(pseudovirus luciferase assay,PVLA).方法 首先构建CV-A16核衣壳蛋白表达子及插入萤火虫荧光素酶报告基因的肠道病毒71型(EV-A71)复制子,再顺次转染293T细胞,互补包装得到CV-A16假病毒.通过条件优化并使用CV-A16国家中和抗体标准品,建立CV-A16中和抗体定量检测方法(PVLA).用该方法检测15份CV-A16病毒免疫小鼠血清,并与传统CPE法的检测结果进行统计学分析,比较两种方法检测结果的一致性.结果 得到CV-A16假病毒,建立了CV-A16假病毒中和抗体检测方法,该方法检测CV A16中和抗体滴度的结果与传统CPE法的检测结果高度一致(相关系数r2为0.91).结论 CV-A16假病毒中和抗体检测方法可作为CPE法的替代方法,用于CV-A16中和抗体的快速检测.
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免疫磁珠富集与荧光定量PCR技术联合检测丙型肝炎病毒
建立一种免疫磁珠与荧光定量PCR技术联合检测丙型肝炎病毒的方法.将丙型肝炎病毒抗体与羧基修饰磁珠偶联,制备出特异性丙型肝炎病毒免疫磁珠,并检测活化磁珠富集病毒的效率.结果表明1 mg免疫磁珠与75μg丙型肝炎病毒单克隆抗体偶联时,具有高抗体偶联量,该偶联后的磁珠富集丙型肝炎病毒的效率是94.50%;同时检测出丙型肝炎病毒高拷贝和低拷贝样品的重复性良好.本研究探索的免疫磁珠与荧光定量PCR技术的结合具有灵敏性高、特异性强、简便快捷以及可信度高的优点,为丙型肝炎病毒检验与评价提供了有利的技术支持.
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宁夏吴忠青铜峡市2015-2017年手足口病原学监测结果分析
目的:分析青铜峡市地区肠道病原病原学特征情况,并对手足口病预防以及后期治疗提供依据.方法:资料选取青铜峡市2015年1月～2017年12月,三年278例手足口病患者粪便,实施荧光定量RT-PCR方式测定,并对肠道病毒柯萨奇病毒A16型(CoxA16)、肠道病毒71型(EV71)、其他肠道病毒进行检测.结果:278例粪便病毒共检测出手足口病病原学阳性标本178份,占64.0％,而肠道EV71阳性检测率为22.3％,肠道CoxA16阳性检测率为24.1％,其他肠道病毒总检测率为17.6％,三年间,EV71、CoxA16病毒阳性率呈现规律性波浪起伏,并且交替出现.178例阳性患者中,男童106例,约占59.6％,女童72例,约占40.4％,男性阳性率显著高于女性,差异有意义(P<0.05).结论:加强对肠道病原菌EV71和CoxA16监控,能够进一步确定本地病原谱构成,同时,由于学龄前儿童易感染,需要加强春末夏初手足口病防治工作.
