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乙型肝炎病毒载量与抗原抗体模式的关系
目的探讨乙型肝炎病毒载量与抗原抗体模式的关系,为乙型肝炎的诊治、预防提供科学依据. 方法用实时荧光定量聚合酶链反应和ELISA检测HBV DNA和抗原抗体,统计分析不同抗原抗体模式的HBV DNA量. 结果在HBsAg和HBeAg阳性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml者占87.3%,其中＞107/ml者占66.7%;在HBsAg阳性,抗-HBe阳性模式中,HBV DNA拷贝数＜103/ml者占74.5%,＞107/ml者占8.3%;在HBsAg阳性,抗-HBc阳性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml者占48.0%,＞107/ml者占29.1%.HBeAg阳性模式HBV 载量显著高于HBeAg阴性模式(P＜0.01).抗-HBe阴性模式HBV载量显著高于抗-HBe阳性模式(P＜0.01).在HBsAg阴性模式中,HBV DNA拷贝数＞103/ml占7.9%,1例拷贝数高达1.59×109/ml. 结论 HBeAg阳性模式HBV 载量显著高于HBeAg阴性模式,抗-HBe 阴性模式病毒载量显著高于抗-HBe阳性模式,HBeAg阳性模式中的少数人HBV载量很低,HBeAg阴性模式中少数人HBV载量很高,HBsAg阴性模式中少数人存在病毒复制,因此,对于一具体患者来说,根据抗原抗体模式,难以准确地判断病毒复制程度及其传染性的强弱.
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乙型肝炎病毒核酸定量检测与临床的关系
目的探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBV M)表现摸式、肝功能状态、肝内炎症的关系. 方法对219例排除甲、丙、丁和戊型肝炎病毒的混合与重叠感染患者中的39例HBsAg阳性的慢性乙型肝炎患者进行肝穿刺病理检查.HBV DNA定量采用荧光定量PCR分析系统,HBV M采用ELISA法. 结果血清HBV DNA水平与HBVM表现模式有关,HBsAg与HBeAg的存在影响HBV DNA水平变化.在HBsAg阳性患者中,HBV DNA水平与Scheuer分级无明显相关.血清谷丙转氨酶水平与HBV DNA水平无明显相关. 结论 HBeAg和HBV DNA有明显的相关,抗-HBe阳性者病毒未完全停止复制,只是复制水平降低,单抗HBs阳性,单抗HBc阳性、抗HBs阳性和抗HBc阳性未检出HBV DNA;肝内炎症活动程度与血清HBV DNA水平无明显关系.
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HBV DNA荧光定量PCR检测的临床意义
乙型肝炎病(HBV)毒核酸定量测定方法经过近几年的长足发展，迄今已有数种检测设备和商业化试剂盒面市，其中Roche公司新开发的Lightcycler荧光定量PCR仪和深圳匹基公司推出的HBV荧光定量PCR(FQ-PCR)检测法的临床应用鲜见报道。我们采用上述设备和试剂定量测定HBV DNA并探讨其临床意义。
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三种提取丙型肝炎病毒RNA方法的定量比较
目前用RT-PCR检测HCV尚缺乏稳定理想的RNA提取方法,不同方法效果相差极大.我们利用荧光定量RT-PCR技术准确定量、易于判断RNA提取效率的优点,建立了一种快速高效的血清RNA提取方法.
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HBV cccDNA荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用
目的:评估一个新设计的HBV cccDNA荧光定量PCR检测方法.方法:以肝穿组织为检测标本,采用LightcycleTM探针,通过一对特殊引物,使HBVcccDNA可以扩增而病毒基因组不能扩增;同时利用一种依赖于ATP的特异性DNase提高反应的特异性,以此实现对cccDNA的检测.结果:成功建立了HBV cccDNA荧光定量PCR的检测方法,线性范围为2.5×101～2.69×109拷贝/ml.对5个病例的肝穿样本进行分析,其中3例为乙肝感染患者,并均接受抗病毒治疗达1年,另2例为乙肝阴性患者.检测结果如下:1)2例乙肝阴性患者的肝组织检测结果cccDNA及tDNA皆为阴性.2)接受拉米夫定治疗1年的病人tDNA为7.10×103拷贝/ml,cccDNA为2.64×103拷贝/ml;接受恩替卡韦治疗1年的病人tDNA为1.00×105拷贝/ml,cc-cDNA为4.04×103拷贝/ml;第3例病人接受拉米夫定治疗前tDNA为6.62×103拷贝/ml,cccDNA为3.03×102拷贝/ml,拉米夫定治疗1年后tDNA为5.19 × 103拷贝/ml,cccDNA为1.51×102拷贝/ml.结论:本研究结果显示,所建立的HBVcccDNA荧光定量PCR方法具有良好的线性范围,灵敏度、特异性及准确性均达到预期目标,而且检测所需样本量少,只需约1mg肝穿组织.可作为临床监测抗病毒治疗效果的有效手段和开展HBV复制调控研究的重要工具.
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HBV标志物定量与病毒载量关系探讨
目的 研究乙型肝炎病毒各血清标志物含量与HBV-DNA含量的关系.方法 采用时间分辨免疫荧光分析法(TRIFA)和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别测定1 486例乙肝患者血清中乙型肝炎病毒抗原抗体定量和病毒含量.结果 不同HBV标志物阳性模式的HBsAg定量存在显著差异,相同模式的HBsAg定量也差异极大.HBeAg(+)模式的HBV-DNA显著高于HBeAb(+)模式及HBeAg(-)HBeAb(-)模式(P＜0.01),而后两者间无显著差异(P＞0.05).HBsAg、HBeAg含量与HBV DNA正相关(r值分别为0.383、0.635,P=0.01),HBeAb含量与HBV DNA负相关(r=-0.563,P=0.01).HBsAg定量与HBeAg定量正相关(r=0.466,P=0.01),与HBeAb定量负相关(r=-0.524,P=0.01).结论 HBV标志物定量之间及与HBV DNA含量间存在一定相关性,但个体差异极大.全面了解HBV标志物含量及HBV DNA定量可更准确判断病毒复制、状态,为临床决策提供可靠依据.
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荧光定量PCR检测常见3种性病病原体结果分析
目的了解近2年来本地区人群中泌尿生殖系统感染性疾病病原体的情况,为病原学调查及临床诊治提供依据.方法统计分析两年来我室采用荧光定量PCR方法进行的有关性病病原体检测结果.结果淋病球菌(neisseria gonorrhoeae,NG),沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT),解脲支原体(ureaplasma urealyticum ,UU)的阳性检出率分别为12.87%,5.84%,2.41%.结论本地区常见的3种性病病原体中,NG发病率高,其次为CT,UU感染率低;20～45岁是好发NG、CT、UU 3种性病的年龄,女性多于男性,提示应加强对此类疾病宣传预防和诊治工作.
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荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中Tb DNA诊断肺结核的临床价值
肺结核是呼吸科常见疾病,发病率近年有增高趋势.目前肺结核诊断方法主要是临床表现、X线或CT、细菌涂片及培养、聚合酶链反应(PCR)等.但由于肺结核临床表现及胸部影像学表现复杂多变、涂片阳性率低,培养存在时间长、聚合酶链反应(PCR)假阳性率高等原因,因此寻找有效的肺结核的确诊方法仍是目前一个重要的课题.荧光定量PCR(FQ-PCR)是一种新的核酸定量技术.我院在2003年3月～2005年5月间对106例因咳嗽、咳痰、胸痛、发热、胸片或CT异常住院治疗患者BALF行荧光定量PCR结核菌检测,本文探讨该方法诊断肺结核的临床应用价值.
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荧光定量PCR检测柯萨奇病毒的结果分析
病毒性心肌炎(VMC)的发病,以肠道病毒所致者为多见.由于病毒学研究工作的进展,确诊患病者有增多的趋势,尤其是柯萨奇B组病毒(CBV)感染者.2年来,我们应用FQ-PCR检测VMC患者血清CBV-RNA,发现与临床VMC相关,现报道如下.
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HBsAg检测中S/CO值的临床意义
乙型肝炎表面抗原 ( HBsAg),检测方法仍以酶联免疫法 ( ELISA法 ) 为多 . 在其检验报告单中有 S/ CO值一项 , 对于它的临床意义说法不一 . 本室用荧光定量 PCR技术 ( FQ- PCR) 检测 HBV.DNA含量作比较 , 说明 S/ CO值在临床实践中可以作为 HBsAg含量的初步判断指标 .
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FQ-PCR技术检测438例HBV DNA结果分析
荧光定量PCR(FQ-PCR)技术是近年发展起来的基因检测技术,现已在临床检验工作中得到广泛的应用,我院开展此项新技术以来,共检测HBVDNA438例,现报道如下.
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饮食服务从业人员血清乙型肝炎病毒水平分析
乙型肝炎病毒 (HBV)感染者可有多种不同的血清学标志模式,在病毒复制、传染性方面表现各异 [1].我们应用荧光定量 PCR技术测定饮食服务从业人员血清 HBV DNA含量,以分析该人群 HBV病毒携带水平.
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荧光定量PCR检测HBV DNA
目的:探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBV M)表现模式的关系.方法:对1207例慢性乙型肝炎患者进行血清HBV DNA荧光定量PCR分析,HBV M检测采用ELISA法.结果:血清HBV DNA水平与HBVM表现模式有关,HBsAg与HBeAg的存在影响HBV DNA水平变化.结论:HBeAg和HBV DNA有明显的相关,抗-HBe、抗HBc阳性者病毒未完全停止复制,只是复制水平降低.
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虫草菌粉对肺纤维化大鼠肺TGFβ1及其信号通路分子mRNA表达的影响
目的:观察虫草菌粉对肺纤维化大鼠肺转化生长因子beta1(TGFβ1,)及其信号通路分子mRNA表达的影响,以探讨虫草菌粉调控肺纤维化胶原代谢失衡的机制及作用靶点.方法:取健康SD大鼠60只,随机分为生理盐水组(NS)、肺纤维化组(BLM)及虫草组(CSP),每组再分成两亚组,每亚组10只,通过复制肺纤维化大鼠模型,并予虫草菌粉灌胃干预,于14天及28天取大鼠肺组织,运用组织芯片结合图像分析技术,通过苏木素-伊红(HE)及胶原纤维染色以判断肺炎症及纤维化程度和对肺内胶原蛋白定量,以免疫组化检测Ⅰ型胶原蛋白含量及原位杂交技术对转化生长因子βⅡ型受体(TGFβR Ⅱ)及smad4的mRNA表达进行定位定量分析,用实时荧光定量RT-PCR技术检测TGFβ1mRNA的表达.结果:虫革菌粉在两时相皆有抑制TGFβ1 mRNA表达上调之作用(与内参校正值分别从0.0219±0.0110和0.0170±0.0157降至0.0083±0.0024和0.0062±0.0051,P＜0.05),而对TGFβⅡR及smad4mRNA的表达上调无明显影响(P＞0.05).结论:虫草菌粉具有抑制胶原纤维过度沉积的作用,其机制可能为抑制TGF-β1mRNA表达的上调,从而干扰TGF-β-smad,信号通路对靶基因的激活而实现的.
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一种提高基因芯片检测中杂交信号强度的简单方法
目的改进PCR产物与固定探针杂交效率,提高信噪比,以提高基因芯片检测的灵敏度.方法以淋球菌隐蔽型质粒pJD1的基因芯片检测为例,在荧光素标记引物的PCR产物中加入不同浓度的Taq酶抑制剂EDTA及位于固定探针所在位点的两翼的荧光素标记探针,一起变性后再进行常规杂交、冲洗.结果加入EDTA和荧光素标记探针使基因芯片检测的荧光强度能提高6倍以上.结论加入EDTA和荧光素标记探针是一种提高基因芯片检测的效率的简单而有效的方法.
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核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用比较
目的 了解山东地区献血者的乙肝病毒感染状况并为今后开展常规核酸检测技术(NAT)检测提供实验依据.方法 使用ELISA和NAT检测法筛选无偿献血者血液样本11334份,应用实时荧光定量PCR仪检测样本的HBV DNA含量.结果 在11334份血液样本中发现HBsAg EIA和NAT同时阳性的样本237份,HBsAg EIA阴性但NAT阳性的样本7份和HBsAg EIA阳性但NAT阴性的样本23份.结论 核酸检测能够提高HBV的检测灵敏度,荧光定量PCR仪可以应用于献血者的大规模筛选.
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昆明地区无偿献血者弓形虫感染的研究
弓形虫(又称弓形体,toxoplasma gondii,TOX)病的人群感染极为普遍,在我国的平均感染率在5%左右,并呈逐年上升趋势.有报道弓形虫可经输血、器官移植传播[1],弓形虫被卫生部列为可经输血传播的病原体.如何尽可能避免输血感染弓形虫病是医疗卫生事业中的一项重大课题,为了解用ELISA及荧光定量PCR(FQ-PCR)对弓形虫检测的相关性,笔者对昆明地区无偿献血者血样进行了ELISA检测,并对所有TOX-IgM或IgG阳性及200份随机选取的TOX-IgM和IgG阴性的血样用FQ-PCR进行检测,旨在为安全输血提供可靠的实验室依据.
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结合于红细胞表面单链短核苷酸提取方法学建立研究
目的 建立用于红细胞消减SELEX筛选的单链短核苷酸的提取方法.方法 使用高灵敏度的硅烷磁珠法提取结合于红细胞表面的单链短核苷酸,并采用实时荧光定量PCR法对其进行定量检测.同时以常用的酚氯仿提取法为对照,评价硅烷磁珠提取法的优劣.结果 硅烷磁珠法提取结合于红细胞表面的单链短核苷酸的拷贝数为(4.79±0.13)×10m/μL,而常用的酚氯仿法为(3.61±0.14)×1010/μL.两者相比统计学差异显著(t=17.825,P＜0.05).结论 与酚氯仿提取法相比,硅烷磁珠法提取ssDNA的灵敏度更高,可获得更多的结合于红细胞表面的单链短核苷酸.
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RhD mRNA剪接体实时荧光定量方法的建立
目的 建立RhD mRNA剪接体实时荧光定量技术,了解不同个体中RhD mRNA剪接体的含量与表达水平.方法 制备本实验室SYBR Green荧光染料定量检测RhD mRNA剪接体的标准曲线,设计RhD mRNA剪接体的引物,提取随机选择的150例血液样品中的mRNA,反转录为cDNA,并以cDNA为模板进行PCR扩增,扩增时加入荧光基团,利用荧光信号实时监控整个PCR进程,后通过标准曲线来计算RhD mRNA各剪接体的表达量.结果 根据荧光定量的峰值读数,以2nd Derivative Max计算方法,计算出所测样本的理论值、实测值,两个重复孔的平均值作为所检测样本RhD mRNA剪接体的表达量.结论 此方法可以准确定量不同个体RhD mRNA剪接体的拷贝数,为RHD血型基因的研究与抗原表达的研究提供依据.
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荧光定量PCR检测HBV-DNA
目的探讨血清HBV-DNA水平与HBV标志物(HBVM)表现模式的关系.方法对1223例慢性乙型肝炎患者进行血HBV-DNA荧光定量PCR分析,HBVM检测采用ELISA法.结果血清HBV-DNA水平与HBV M表现模式有关,HbsAg与HbeAg的存在影响HBV-DNA水平变化.结论HbeAg水平与HBV-DNA有明显的相关,抗-Hbc、抗HBc阳性者病毒未完全停止复制,只是复制水平降低.
