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KDR反义寡核苷酸对人血管内皮细胞的作用
VEGF及其受体KDR在肿瘤血管生成中起重要作用.我们用KDR特异性反义寡核苷酸作用于人血管内皮细胞,以阻断VEGF的自分泌作用通路,观察对细胞增殖的影响、细胞超微结构的变化及检测细胞DNA含量,测定细胞分泌VEGF的能力,并检测作用后KDR mRNA和KDR蛋白的水平.结果发现未经处理的人血管内皮细胞能分泌一定量的VEGF,KDR ASODN能抑制人血管内皮细胞内KDR基因的表达,并显著抑制细胞的增殖,在一定剂量下还可诱导凋亡.结果说明KDR ASODN能显著抑制血管内皮细胞的增殖,VEGF受体KDR在人血管内皮细胞的增殖和凋亡的调控中起重要作用.
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VEGF及KDR在骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的:探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)与血管内皮细胞生长因子受体(KDR)结合,在骨肿瘤中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组化染色方法检测105例骨肿瘤组织的VEGF与KDR的表达,并对其中85例骨肉瘤主要临床资料、病理分级及临床相关参数进行比较,用x2检验进行统计学处理.结果:骨肉瘤中VEGF与KDR阳性表达率明显高于骨软骨瘤阳性表达率(P＜0.0001).VEGF与KDR阳性表达率在骨肉瘤临床分期中Ⅱb期、Ⅲ期明显高于Ⅰ期、Ⅱa期(P＜0.001),并随着病理分级恶性程度增高而显著增加(P＜0.01).且在软组织浸润和转移组中VEGF与KDR阳性表达率明显高于非浸润和非转移组(P＜0.005).结论:VEGF与KDR在骨肉瘤中不同程度异常表达与肿瘤的临床分期、病理分级和浸润、转移呈正相关,提示VEGF与KDR的高表达可能与骨肉瘤的发生发展有关,尤其与骨肉瘤的浸润转移密切相关.
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云南勐腊地区微小按蚊钠通道序列分析
微小按蚊Anopheles minimus是云南省勐腊地区的重要传疟媒介,DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂在该地区长期大量使用,研究微小按蚊与kdr抗性密切相关的para型钠通道基因对该地区选择合理的媒介控制方案预防和阻断疟疾的流行提供理依据.本文分别于2010和2011年9~10月在云南省勐腊县龙塘村和东方红村现场采集微小按蚊后,用分子学方法进行分型,根据GenBank发布的微小按蚊para钠通道IIS6段基因组DNA序列设计特异性引物,扩增现场采集的微小按蚊的该段基因,并测序对比.通过对415个个体的检测发现,1014位点编码的TTA氨基酸密码子没有突变,说明截止目前云南勐腊地区微小按蚊对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂抗性的kdr分子机制尚未出现,其击倒抗性较低,对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂仍然保持敏感.
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寡核苷酸探针法(PCR-ASO)检测家蝇kdr抗性相关的L1014F点突变
为检测家蝇对拟除虫菊酯击倒抗性kdr等位基因上的L1014F点突变,采用了寡核苷酸探针法(PCRAllele Specific Oligo nucleotide probe,PCR～ASO),用于检测该点突变.对L1014位的上下游DNA进行PCR扩增,并将纯化产物平行点样在带正电荷的尼龙膜上,用2条地高辛标记的特异性寡核苷酸探针,1条为敏感型,1条为突变型,与之杂交,根据显影的阳性信号判断待检样品的kdr等位基因型.该方法能区分敏感纯合子、抗性纯合子及杂合子,是检测家蝇kdr抗性的有用工具.
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贵阳市家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性现状与kdr(L1014F)等位基因频率分析
探讨贵阳市区家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性水平与kdr等位基因上的LI014F点突变频率相关性,为贵阳市科学合理使用卫生杀虫剂控制家蝇提供科学依据.本研究采用WHO推荐的微量点滴法进行抗性测定.结果显示贵阳市4城区家蝇对氯菊酯和高效氯氰菊酯的LD50分别为0.00620 ～ 0.013339μg/雌蝇、0.02298 ～0.03614 μg/雌蝇,抗性系数分别为3.35 ～7.56、7.38 ～11.62.采用特异性等位基因PCR法测定基因频率,结果显示4城区家蝇种群的L1014F点突变频率在29％ ～37％.相关性分析显示L1014F点突变等位基因频率与高效氯氰菊酯LD50值之间存在直线相关.研究结果表明贵阳市家蝇对氯菊酯、高效氯氰菊酯已经产生了抗药性,击倒抗性是其抗性机理之一.
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VEGF、KDR在卵巢癌组织中的表达及其与MVD的关系
目的:探讨VEGF、KDR在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达及其与微血管密度的关系.方法:用免疫组化技术检测卵巢上皮性肿瘤组织中VEGF、KDR表达并测定IOD值,在光镜下计数MVD.结果:VEGF和KDR的表达在卵巢良恶性肿瘤组织中有显著性差异.VEGF表达阳性的MVD值显著高于VEGF表达阴性者(P＜0.01);MVD与VEGF、KDR表达呈正相关(P<0.05),VEGF表达与KDR表达呈正相关(P<0.01)结论:VEGF、KDR和MVD均能反映卵巢上皮性肿瘤的良恶性和恶性进展程度,可作为衡量卵巢肿瘤良恶性及判断预后的重要参考指标.
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NM-3含药血清对体外胃癌细胞株SGC-7901生长和VEGF及其受体KDR、Flt-1表达的影响
目的:探讨NM-3含药血清对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用.方法:将SGC-7901胃癌细胞分成空白对照组、血清对照组、NM-3含药血清低、中、高剂量实验组共5组.在不同时间段以流式细胞仪检测细胞的凋亡率,分析细胞周期分布;应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1mRNA的表达.结果:NM-3含药血清3组随着时间的延长凋亡率增高,呈时间剂量依赖性,其高、中剂量组在6 h(16.80%±0.40%,25.20%±0.86%)、24 h(26.95%±3.25%,43.62%±3.53%)、72h(39.85%±4.10%,54.35%±5.42%)内的细胞早期凋亡率与空白,血清两个对照组相比有显著性差异(5.34%±0.28%,5.66%±0.72%;6.91%±1.06%,8.90%±0.86%:6.87%±1.24%,8.06%±0.78%;.P＜0.01).随着NM-3药物剂量的增加,G0/G1期细胞增多,而S期及G2/M期细胞则相应减少.细胞培养72 h后,NM-3含药血清高,中,低剂量组与两对照组比较可显著抑制VEGF及其受体KDR,Flt-1 mRNA的表达(P＜0.05).在72 h后细胞凋亡率,细胞周期以及胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1.mRNA的表达上,高剂量组与中低剂量组均有明显差异(P＜0.05).结论:NM-3含药血清可抑制胃癌组织的血管生长,并可诱导胃癌细胞凋亡.
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VEGF和NF-κB 在骨肉瘤中的表达及临床意义
目的 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)与血管内皮细胞生长因子受体(KDR)和核转录因子κB(NF-κB),在骨肿瘤中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化和原位杂交方法检测105例骨肿瘤组织的VEGF、KDR和NF-κB65的表达,并对其中85例骨肉瘤主要临床资料、病理分级及临床相关参数进行比较,用χ2检验进行统计学处理.结果 骨肉瘤VEGF、KDR和NF-κB65阳性表达率明显高于骨软骨瘤(P<0.01),骨肉瘤Ⅱb期、Ⅲ期明显高于Ⅰ期、Ⅱa期(P<0.01～0.05),随病理分级增高而显著增高(P<0.01).软组织浸润和转移组VEGF、KDR和NF-κB65阳性表达率明显高于非浸润和非转移组(P<0.01).结论 VEGF、KDR和NF-κB65在骨肉瘤中异常表达与肿瘤的临床分期、病理分级和浸润、转移呈正相关,提示VEGF、KDR和NF-κB65的高表达可能与骨肉瘤的发生发展有关,尤其与骨肉瘤的浸润转移密切相关.
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自体移植脾组织VEGF、KDR表达与血管再生的实验研究
目的研究自体移植脾组织血管再生及VEGF、KDR表达规律,阐明VEGF、KDR对移植脾组织血管再生的调控作用,为脾脏外科临床及实验研究提供理论依据.方法健康Wistar大鼠70只,体重100～120 g,随机分为7组,每组10只中又设脾切除自体脾移植组5只,假手术组5只,分别于术后7,14,30,60,90,120,180 d进行:(1)自体移植脾组织病理学检测;(2)大鼠行主动脉插管灌注墨汁,光镜观测再生血管并采用图像分析测定其密度;(3)免疫组化抗VEGF、KDR抗体染色,图像分析定量,阐明其表达规律及与血管再生的关系.结果(1)自体脾组织移植术后7d即有血管从大网膜向脾组织内伸展,移植脾组织内血管密度逐渐增大,至术后180 d血管再生接近正常;(2)自体脾组织移植术后7 d、14 d,VEGF、KDR阳性染色细胞密度迅速升高,术后60 d达高峰,以后逐渐降低,至术后180 d VEGF、KDR阳性染色细胞密度趋向正常.结论自体脾组织大网膜内移植术是简便有效的脾移植方法;移植脾组织新生血管由大网膜再生而来;术后移植脾组织内VEGF、KDR表达量升高,促进血管形成,血管再生完成后恢复正常水平.
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宫颈癌KDR表达与血管生成和癌细胞增殖及侵袭转移的关系
目的研究KDR在早期宫颈癌的表达及其临床意义.方法采用免疫组织化学S-P法检测75例早期宫颈癌(ICC)、18例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和15例癌旁正常宫颈上皮(NCE)中KDR的表达,并检测其中微血管密度MVD(CD34标记)和癌细胞增殖标记指数(Ki-67标记),探讨早期宫颈癌KDR表达与肿瘤血管生成、癌细胞增殖、癌细胞侵袭转移等有关临床病理参数的关系.结果在宫颈癌中,KDR主要表达于癌细胞膜和(或)细胞浆;Ki-67主要表达于癌细胞核;CD34主要表达于癌巢间质血管内皮细胞.从NCE→CIN→ICC,KDR、Ki-67的阳性表达率和MVD均显著升高(P<0.05).KDR在宫颈癌中表达与MVD显著正相关(r=0.331,P<0.01),并与盆腔淋巴结转移、脉管浸润、组织学分级和Ki-67表达有关(P<0.05);而与年龄、FIGO分期、组织学类型和间质浸润无关(P>0.05).组织学分级为Ⅲ级、有盆腔淋巴结转移、脉管浸润及Ki-67高度表达者,其KDR阳性表达率分别显著高于组织学分级为≤Ⅱ级、无盆腔淋巴结转移、无脉管浸润及Ki-67≤中度表达者(P<0.05).结论 KDR可能在宫颈癌血管生成、癌细胞增殖、癌细胞侵袭转移中起重要作用.KDR过度表达,宫颈癌血管生成能力显著增强,癌细胞增殖活跃,更易发生侵袭转移,但并非惟一决定因素.检测宫颈癌中KDR表达对进一步了解宫颈癌生物学行为和判断其预后具有一定的临床应用价值.
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脑胶质瘤患者血管内皮生长因子及其受体Flt和KDR表达的临床意义
目的 探讨脑胶质瘤患者血清血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt-1和KDR水平变化,为评价脑胶质瘤治疗效果,判断预后寻找一种科学的生物学标志物.方法 收集治疗前后脑胶质瘤患者、脑转移癌患者和健康对照者血清,进行VEGF,Flt-1和KDR水平的检测,SPSS11.5统计软件包对数据进行t检验和相关分析.结果 治疗前脑胶质瘤和脑转移瘤患者血清VEGF水平明显高于健康对照组;脑胶质瘤患者组和脑转移瘤患者组血清Flt-1水平明显高于健康对照组;脑胶质瘤患者组血清KDR水平明显高于健康对照组;治疗后缓解的脑胶质瘤患者组VEGF和Flt-1水平明显低于治疗前,差异均有统计学意义.VEGF与Flt-1和KDR有显著的相关性.结论 脑胶质瘤患者血清中VEGF及其受体的检测,可作为脑胶质瘤辅助诊断、治疗效果监测和预后判断的重要生物学指标.
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uPA和KDR在髓母细胞瘤中的表达及意义
目的研究尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator, uPA) 和KDR (vascular endothelia growth factor receptor-2)在髓母细胞瘤中的表达及临床意义.方法应用免疫组化LSAB法检测50例髓母细胞瘤中uPA和KDR的表达,结合临床随访,使用Cox回归统计分析和 Spearman相关分析.结果 uPA和KDR 的染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞.Cox 回归分析显示uPA和KDR是影响生存时间的独立的预后因子,它与预后存在高度负相关关系.Spearman相关分析显示uPA和KDR存在正相关关系.结论 uPA和KDR可能是预测髓母细胞瘤预后的独立的预后因子.uPA和KDR两者存在正相关关系.
关键词： 髓母细胞瘤 尿激酶型纤溶酶原激活剂 KDR 免疫组织化学 预后 -
血管内皮生长因子受体KDR在大肠癌发展中的研究
目的 探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体KDR和大肠癌间质新生血管与大肠癌预后的关系.方法 应用免疫组化方法监测86例大肠癌组织VEGF及KDR蛋白表达和微血管密度(Microvessel density,MVD),分析VEGF、KDR和MVD及其与大肠癌Dukes分期、淋巴结转移的关系.结果 VEGF及KDR阳性者MVD值显著高于阴性者(P＜0.01),VEGF、KDR表达和MVD与大肠癌Dukes分期(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.01)密切相关.结论 KDR及VEGF与大肠癌的血管生成密切相关;对大肠癌的复发和转移有促进作用.KDR、VEGF和MVD可作为反映大肠癌生物学行为的客观指标.
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抗VEGF抗体及抗KDR抗体对人胃癌生长的抑制作用
目的:观察抗VEGF及抗KDR抗体对胃癌生长和转移的抑制作用.方法:1)将不同浓度的抗VEGF及抗KDR抗体分别加入胃癌BGC-823细胞,培养5天后测细胞活性(MTT法).2)采用原位种植裸鼠模型,观察抗VEGF抗体及抗KDR抗体的作用.实验分为4组:对照组,抗VEGF组,抗KDR组及抗VEGF+抗KDR组.自肿瘤种植后第7天起,经腹腔注射连续给药8周,每周2次,第10周末处死裸鼠,测定肿瘤重量和肝转移状况,计数微血管密度.结果:1)抗VEGF抗体和抗KDR抗体浓度由高至低对BGC-823细胞生长的抑制作用减弱.2)抗VEGF抗体和抗KDR抗体对原位肿瘤生长有明显抑制作用,两者合用时作用更明显;对照组肝转移率80.0%,而抗VEGF组、抗KDR组和二者合用组分别为16.7%、25.0%、0,与对照组相比其它3组的微血管密度(MVD)明显为低.结论:通过中和VEGF抗体和封闭KDR受体抑制血管形成,可能为胃癌的治疗提供一个新的途径.
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VEGF、KDR和结核菌L型感染在前列腺癌中的表达及临床意义
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR-2(KDR)和结核菌L型感染在前列腺肿瘤中的表达及临床相关性研究.方法 应用免疫组化、原位杂交和抗酸染色等方法检测了65例前列腺癌(carcinoma of prostate,PCa)和30例良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)中的VEGF、KDR蛋白及mRNA的表达,以及结核菌L型的检出率.并对前列腺肿瘤主要临床资料和病理分级参数进行比较,用χ2检验进行统计学处理.结果 VEGF、KDR蛋白及mRNA阳性表达和结核菌L型检出率前列腺癌明显高于前列腺增生(P<0.001～0.05).VEGF、KDR蛋白及mRNA阳性表达以及结核菌L型检出阳性率与前列腺癌的临床分期、病理分级差异有显著性(P<0.01～0.05).结论 VEGF及KDR蛋白及mRNA在前列腺肿瘤中有不同程度的异常表达,可能与结核菌L型感染有协同致瘤作用.提示2种基因均可作为判断前列腺癌生物学行为及患者预后参考指标.结核菌L型感染可能与前列腺癌的发生发展可能有一定关系,因此研究结核菌L型感染与前列腺癌的关系,具有重要的临床应用价值.
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隔药灸对子宫内膜异位症大鼠模型治疗作用及机制研究
目的:研究隔药灸治疗子宫内膜异位症大鼠模型的疗效及机制.方法:构建子宫内膜异位症大鼠模型并随机分为治疗组、孕三烯酮组、模型组和假手术组.经治疗后,采集大鼠病灶标本,观察隔药灸对大鼠异位子宫内膜体积的抑制作用,计算抑制率;RT-PCR法检测各组大鼠异位子宫内膜的KDR和PTGS2mRNA表达.结果:经隔药灸治疗后大鼠模型的异位子宫内膜体积较模型组明显缩小;治疗组大鼠模型的异位子宫内膜PTGS2和KDRmRNA表达均明显低于模型组.结论:隔药灸能明显抑制大鼠模型异位子宫内膜的发展,并且这种治疗作用可能与抑制KDR和PTGS2表达,从而调控异位子宫内膜血管生成有关.
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KDR mRNA在卵巢上皮性浆液性肿瘤中的表达及临床意义
目的:检测上皮性卵巢浆液性肿瘤中KDR mRNA的表达及其临床意义.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增KDR基因,以β-actin基因作为内对照,结合凝胶图像扫描,以KDR/β-actin作为KDR相对表达量进行分析.分析卵巢上皮性浆液性肿瘤70例.结果:卵巢浆液性癌及卵巢交界性浆液性瘤中KDR mRNA的表达高于卵巢良性浆液性瘤及正常卵巢.在卵巢浆液性癌中,KDR mRNA的表达与FIGO分期、腹腔细胞学检查结果、有无淋巴结转移、有无盆腔粘连有关.结论:KDR在卵巢癌的发生、发展及转移中起重要的作用.
关键词： 卵巢肿瘤 KDR 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) -
KDR及其在妇产科的研究现状
目前,被鉴定和克隆的与肿瘤血管生成有关的因子有30多种,其中血管内皮生长因子(VEGF)是重要的血管生成因子,通过与其特异受体结合发挥作用,成为近年来研究的热点.随着研究的不断深人,特异受体中的KDR引起学者们极大的关注.本文重点对近年来KDR在体内分布、结构研究、调控机制、胞内信号转导途径和在妇产科领域等方面的研究进展作一综述.
关键词： 血管生成因子 血管内皮生长因子受体 KDR -
西妥昔单抗联合塞来昔布对肺腺癌细胞KDR和AQP1表达的影响
目的：探讨表皮生长因子受体（EGFR）单克隆抗体西妥昔单抗联合环氧合酶（COX-2）抑制剂塞来昔布对肺腺癌 A549细胞株凋亡和KDR、AQP1表达的影响。方法 A549细胞培养于RPMI-1640培养液中，实验分为正常对照组、西妥昔单抗1 nmol/L组、塞来昔布25μmol/L组、西妥昔单抗1 nmol/L＋塞来昔布25μmol/L组。药物干预细胞48 h后，采用四甲基偶氮唑盐（ MTT）比色法测定细胞抑制率；采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化；用transwell小室法检测药物处理前后细胞侵袭力的变化。采用RT-PCR、Western印迹检测 KDR、AQP1基因和蛋白的表达情况。结果西妥昔单抗和塞来昔布对A549细胞增殖有明显的抑制作用，两制剂联合作用时抑制作用更强（ P＜0.01）。西妥昔单抗和塞来昔布均可诱导细胞凋亡，联合作用后细胞凋亡率更高（P＜0.01）；联合用药与单独用药相比，可使细胞发生明显的G1期阻滞（P＜0.01），进一步下调了 KDR、AQP1基因和蛋白的表达（ P＜0.05）。结论西妥昔单抗和塞来昔布联合应用具有协同作用，可进一步抑制细胞的生长和迁移，下调了KDR、AQP1基因和蛋白的表达提示两药联合使用临床肺癌治疗可能具有很大的潜力。
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血管内皮生长因子受体-2(KDR)在鼻咽癌细胞系(CNE-2)中表达的研究
目的了解KDR是否特异性表达于鼻咽癌组织微血管,为研究特异性杀伤鼻咽癌微血管的自杀基因治疗系统提供启动子.方法通过以人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为对照组,采用细胞免疫组化染色方法鉴定细胞系CNE-2的KDR表达.结果结果显示KDR在HUVEC细胞系中表达,而鼻咽癌细胞系CNE-2中不表达KDR.结论 KDR可作为启动子用应用于特异性杀伤鼻咽癌微血管的自杀基因治疗系统的研究.
