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下调GINS2表达抑制HL60细胞周期调控因子
目的 观察下调GINS2的表达后对人白血病细胞系HL60周期调控因子的变化并探讨其机制.方法 脂质体介导并稳定转染干扰质粒的细胞为于扰组,转染阴性对照质粒的细胞为阴性对照组,只加入脂质体的细胞为空白对照组,未转染的HL60细胞为未处理组.集落形成实验测定细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期;3 H-TdR掺人实验检测细胞DNA合成;Western blot检测CDK1、cyclinB1等蛋白;RT-PCR检测ATM,CHK2,P53等mRNA水平;Western blot检测其蛋白水平.结果 和其他3组相比,干扰组细胞G2期细胞数明显增加、DNA合成受阻、增殖减慢.与G2期相关周期调控蛋白CDK1,cyclinB1的表达随时间变化而明显降低.和其他3组相比,干扰组细胞ATM,CHK2,P53转录水平和翻译水平显著上调.结论 下调GINS2表达后可抑制HL60细胞DNA复制并影响其G2期进程,机制可能与ATM,CHK2,P53等基因相关.
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己酮可可碱对(E)-(2')-脱氧-氟亚甲基胞苷的放射增敏和细胞周期的影响
目的观察己酮可可碱(PTX)在体外对(E)-(2')-脱氧-氟亚甲基胞苷(FMdC)的放射增敏作用和放射引起细胞周期再分布的影响.方法在人结肠癌细胞系WiDr进行克隆形成分析检测放射增敏效应.常规照射剂量2Gy时的放射增敏比(SERSF2)定义为2Gy时对照组存活分数(SF)和药物处理组SF之比.流式细胞仪应用于分析照射、FMdC和PTX对细胞周期分布的影响.结果照射前用30nmol/L FMdC处理WiDr细胞48h或照射后立即单用0.5～1.0mmol/L PTX 14d均能观察到各自的放射增敏作用.30nmol/L FMdC和0.25～1.0mmol/L PTX的SERSF2分别为1.09和1.02～1.24.30nmol/L FMdC和0.5mmol/L 或1.0mmol/L PTX联合应用时,SERSF2分别增加至1.50和1.66.PTX增强FMdC的放射敏感性.流式细胞仪分析表明,在非同步化WiDr细胞,放射引起G2期阻滞和剂量有关.G2+M期阻滞在照射后6h可检测到,12h达高峰.照射前应用30nmol/L FMdC能够使放射引起的G2+M期阻滞增多,但PTX能显著去除G2期阻滞.结论己酮可可碱增强FMdC放射增敏作用和G2期阻滞去除有关.
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电离辐射诱导G2期阻滞的机制
电离辐射损伤后，细胞通过若干关卡来调控细胞周期的进程，使细胞有时间进行DNA修复，确保染色体组的完整性和遗传稳定性，减少突变的发生。不同的电离辐射使不同细胞产生G_1、G_2和S期等不同时相的变化，但电离辐射后G_2期阻滞的现象十分普遍。近年来，对G_2期阻滞机制的研究多集中在Chk1、Chk2和p53上。
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己酮可可碱对人肝癌细胞株Hep3b的放射增敏作用
目的观察己酮可可碱(PTX)对人肝癌细胞株Hep3b的放射增敏作用.方法以Hep3b人肝癌细胞株为研究对象,应用MTT法检测PTX的药物毒性;应用克隆形成实验(colony forming assay)观察PTX对Hep3b细胞株的放射敏感性的影响;流式细胞仪(FCM)技术测定照射后Hep3b细胞株细胞周期的再分布并观察PTX能否去除放射引起的细胞周期阻滞.结果不同浓度的PTX作用于人肝癌Hep3b细胞株48 h后,其细胞毒性呈剂量依赖性,适浓度为2 mmol/L.PTX能明显降低放射后Hep3b细胞的克隆形成率,其放射增敏比为2.68±0.24(P＞0.05).FCM实验结果显示,照射明显导致Hep3b细胞株G2期阻滞,Hep3b细胞在照射后20 h G2/M期比例分别为86.8%和14.8%(P＜0.05),PTX能够去除放射引起的Hep3b细胞G2期阻滞.结论PTX对Hep3b细胞株有放射增敏作用,其作用机制可能与PTX去除放射引起的G2期阻滞有关.
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多西紫杉醇诱导人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549/CDDP凋亡的研究
目的 探讨凋亡在多西紫杉醇对人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549/CDDP作用中的地位及其机制.方法 应用透射电镜、流式细胞术、Annexin V/PI争免疫细胞化学等方法,观察多西紫杉醇对A549及A549/CDDP细胞形态学、细胞周期、凋亡以及Fas等蛋白表达的影响.结果 多西紫杉醇作用后,A549及A549/CDDP细胞内空泡明显增多,可见少数凋亡小体和脱落的不含细胞器成分的细胞质,后者还出现大量多微核化细胞.多西紫杉醇具有显著的G2期阻滞作用,可同时诱导细胞凋亡、坏死和胞质自切,并以后两者为主.Fas蛋白在多西紫杉醇作用后表达明显增强.结论 多西紫杉醇对A549及A549/CDDP细胞均具有显著的G2/M期阻滞作用,能同时诱导其凋亡、坏死和胞质自切,以后两者为主.Fas基因可能在多西紫杉醇抗肿瘤作用中具有重要作用.
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AKAP7γ介导蛋白激酶A在小鼠G2期卵母细胞发挥阻滞作用
目的:探讨小鼠卵母细胞G2期阻滞中,AKAP7γ是否是介导蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)锚定在Cdc25B底物蛋白处的A型激酶锚定蛋白(A-kinase anchoring proteins,AKAPs).方法:以PKA锚定阻断剂Ht31处理G2期阻滞的小鼠卵母细胞,观察Cdc25B-S321的磷酸化状态,以免疫共沉淀方法检测PKA RII-AKAP7γ-Cdc25B的相互作用.结果:在G2期阻滞的小鼠卵母细胞中,Ht31处理后Cdc25B-S321不能被PKA磷酸化,同时PKA RIl-AKAP7γ及AKAP7γ-Cdc25B存在相互作用.结论:在小鼠卵母细胞中,PKA通过AKAP7γ锚定在胞质中的Cdc25B底物蛋白处,磷酸化其321位丝氨酸,使卵母细胞减数分裂阻滞在G2期,PKA RII-AKAP7γ/Cdc25B通路在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中发挥重要作用.
关键词： 卵母细胞 G2期阻滞 蛋白激酶A(PKA) CDC25B AKAP7 -
蛋白激酶A/Cdc25B通路在小鼠卵母细胞G2期阻滞中作用的研究
目的:研究小鼠卵母细胞G2期阻滞中,蛋白激酶A(PKA)的候选底物及靶位点.方法:将野生型和突变型(S 321A)cdc25B克隆至pBluescriptSK载体中,体外转录成mRNA,显微注射到dbcAMP处理和未处理的卵母细胞中,观察减数分裂恢复情况.结果:在小鼠卵母细胞减数分裂过程中,Cdc25B能促进减数分裂的重新启动,其突变体(S321A)能完全解除PKA引起的G2期阻滞,完成减数分裂.结论:PKA通过Cdc2 5B的321位丝氨酸磷酸化修饰引起G2期阻滞,PKA/Cdc25B通路在小鼠卵母细胞减数分裂中发挥重要作用.
