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尾加压素Ⅱ促进大鼠心肌胶原蛋白表达及乳鼠心肌成纤维细胞的增殖
目的 探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠心肌纤维化的影响.方法 腹主动脉缩窄术建立慢性压力超负荷大鼠心力衰竭模型,大鼠分为假手术组、造模4、8和12周组.利用Western blot分析心肌组织中UⅡ、G蛋白偶联受体(GPR14)、胶原Ⅰ(col-Ⅰ)、Ⅲ(col-Ⅲ)及蛋白激酶A(PKA)的表达.体外培养乳鼠成纤维细胞,分为对照组、UⅡ处理组、UⅡ+KT5720处理组及UⅡ+SB-611812组.镜下观察及CKK-8法检测细胞增殖.结果 模型组大鼠心肌组织中UⅡ、GPR14、eol-Ⅰ、col-Ⅲ蛋白及PKA的表达显著增加,且呈时间依赖性.UⅡ促进乳鼠成纤维细胞(CFs)的增殖(P＜0.05),而KT5720、SB-61 1812可抑制UⅡ对乳鼠成纤维细胞的促增殖作用.结论 UⅡ及其受体系统促进大鼠心肌纤维化的发生发展.
关键词： 尾加压素Ⅱ(UⅡ) 心肌纤维化 信号传导 蛋白激酶A(PKA) -
铝作用于cAMP-蛋白激酶A途径及对学习记忆的影响
铝是一种常见的金属元素,其神经毒性可能是影响学习记忆机制的因素之一.突触传递长时程增强(LTP)是研究学习记忆的一个可用电生理模型,cAMP蛋白激酶A(PKA)途径是神经元重要的信号传导通路,在学习记忆形成过程中起重要的作用.铝可以影响学习记忆机制中某些环节(如神经递质、钙离子浓度、蛋白激酶等),导致智力及认知能力的下降.该文根据近年来国内外在该领域的研究进展,从电生理学、生物化学等方面阐述了铝对学习记忆机制的影响及与cAMP/PKA途径的关系.
关键词： 铝 环状腺苷酸(cAMP) 蛋白激酶A(PKA) 学习记忆 -
益智宁对注意缺陷多动障碍动物模型SHR大鼠前额叶皮质DRD1-AC-cAMP-PKA-DARPP32信号通路的影响
目的:通过观察中药复方益智宁对注意缺陷多动障碍动物模型SHR大鼠前额叶皮质中腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)、多巴胺D1受体(dopamine receptor D1,DRD1)、多巴胺和环磷酸腺苷调节的磷酸化蛋白32(dopamine and cAMP regulated phosphoprotein of 32 kDa,DARPP32)的影响,探讨益智宁治疗ADHD的疗效机制.方法:将30只SHR大鼠随机分为益智宁组、生理盐水对照组、哌甲酯对照组,每组10只,益智宁组给予益智宁煎药液(14.4g·kg-1),哌甲酯组给予哌甲酯(0.0015 g·kg-1),生理盐水组给予生理盐水,每组均按12.5 mL/kg等容量灌胃给药.给药4周后,用ELISA法检测各组大鼠前额叶皮质组织中AC、cAMP的浓度,用RT-PCR和Western blot法检测大鼠前额叶皮质组织中PKA、DRD1、DARPP32的表达水平.结果:与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中的AC、cAMP含量均有显著升高(P＜0.05);与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中PKA蛋白表达及mRNA表达显著升高(P＜0.01),且益智宁组与哌甲酯组有显著差异(P＜0.05);与生理盐水组比较,哌甲酯组、益智宁组大鼠的前额叶皮质组织中DRD1、DARPP32蛋白表达及mRNA表达显著降低(P＜0.01),且益智宁组与哌甲酯组有显著差异(P＜0.05).结论:益智宁组可能通过激活SHR大鼠前额叶皮质AC-cAMP-PKA的信号通路,并通过下调DRD1、DARPP32的水平,负反馈调节脑内多巴胺的含量,从而发挥疗效.
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二肽酰肽酶-4抑制剂通过PKA/NF-κB信号通路调节LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应的实验研究
目的 探讨二肽酰肽酶-4(DPP-4)竞争性抑制剂沙格列汀对LPS诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)炎症反应的调节作用及相关的分子机制.方法 将RAW264.7细胞分为4组,分别为对照组(Control组)、LPS组、LPS+沙格列汀(LPS+SAX组)和LPS+沙格列汀+PKA抑制剂H-89组(LPS+ SAX+ H-89组).在干预6小时后使用qPCR法和western blot法对细胞ICAM-1 mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并采用western blot法对细胞PKA和NF-κB p65活化水平进行分析.结果 与Control组相比较,在LPS干预6小时后RAW264.7细胞ICAM-1 mRNA和蛋白的表达水平及NF-κB p65活化水平均明显上升,而PKA活化水平明显降低,差异均有统计学意义(P均＜0.05);但LPS组较LPS+ SAX组ICAM-1表达和NF-κB p65活化水平的增加更明显,而PKA活化下降更加明显,差异均有统计学意义(P均＜0.05).同时发现在LPS诱导状态下沙格列汀对于ICAM-1表达和NF-κB p65活化水平的抑制作用和PKA活化水平的促进作用可被PKA抑制剂H-89显著拮抗,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 本研究显示DPP-4抑制剂可以通过调控PKA/NF-κB信号通路下调LPS诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的炎症反应,为DPP-4抑制剂应用于炎症性疾病的治疗奠定了初步的理论基础.
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Rab13-蛋白激酶A途径调节体外培养支持细胞屏障通透性的研究
目的:研究Rab13蛋白在支持细胞(SC)屏障功能调节中的作用.方法:体外分离培养大鼠睾丸SC,Western blotting检测Rab13的表达,免疫共沉淀检测Rab13与蛋白激酶A(PKA)催化亚基间的相互作用;睾酮处理建立SC体外屏障增强模型,Western blotting和放射自显影法分别检测Rab 13的表达及PKA活性变化,并通过跨上皮电阻(TER)检测PKA活性对SC屏障功能的影响;小干扰RNA(siRNA)干扰Rab13表达,检测其对PKA活性及SC屏障功能的影响.结果:Rab13的表达随SC屏障的建立逐渐降低,且与PKA催化亚基间存在相互作用;睾酮处理可使Rab13的表达下降而PKA活性升高;Rab13 siRNA干扰可导致PKA活性升高,且SC屏障功能增强;抑制PKA活性可以拮抗睾酮或Rab13 siRNA对屏障功能的增强作用.结论:Rab13可通过调节PKA活性参与调节SC屏障通透性.
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AKAP7γ介导蛋白激酶A在小鼠G2期卵母细胞发挥阻滞作用
目的:探讨小鼠卵母细胞G2期阻滞中,AKAP7γ是否是介导蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)锚定在Cdc25B底物蛋白处的A型激酶锚定蛋白(A-kinase anchoring proteins,AKAPs).方法:以PKA锚定阻断剂Ht31处理G2期阻滞的小鼠卵母细胞,观察Cdc25B-S321的磷酸化状态,以免疫共沉淀方法检测PKA RII-AKAP7γ-Cdc25B的相互作用.结果:在G2期阻滞的小鼠卵母细胞中,Ht31处理后Cdc25B-S321不能被PKA磷酸化,同时PKA RIl-AKAP7γ及AKAP7γ-Cdc25B存在相互作用.结论:在小鼠卵母细胞中,PKA通过AKAP7γ锚定在胞质中的Cdc25B底物蛋白处,磷酸化其321位丝氨酸,使卵母细胞减数分裂阻滞在G2期,PKA RII-AKAP7γ/Cdc25B通路在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中发挥重要作用.
关键词： 卵母细胞 G2期阻滞 蛋白激酶A(PKA) CDC25B AKAP7 -
CDC25B蛋白S149/S321位点突变对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响
目的:研究小鼠CDC25B蛋白S149位点对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响及S149位点与S321位点的关系.方法:构建pBSK-CDC25B-S 149A和pBSK-CDC25B-S149A/S321A突变体,体外转录成mRNA;采用小鼠超排卵技术取G1期受精卵,显微注射CDC25B-WT-mRNA和突变CDC25B-S149A-mRNA、CDC25B-S 149A/S321A-mRNA,观察其对受精卵发育、M期促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr 15磷酸化状态的影响.结果:CDC25B-S149A-mRNA注射组受精卵卵裂率明显高于CDC25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前1h达到高峰；而联合突变体CDC25B-S149A/S321A-mRNA注射组卵裂率又显著高于CDC25B-S149A-mRNA注射组.结论:在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,蛋白激酶A(PKA)对小鼠CDC25B蛋白S149位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式,并且S149位点与S321位点可能具有协同作用.
