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辛二酰苯胺异羟肟酸对人肝星状细胞增殖和凋亡的影响
目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人肝星状细胞系LX-2增殖及凋亡的影响及其可能机制.方法体外应用SAHA作用于LX-2细胞,倒置显微镜观察LX-2 细胞形态,MTT法检测细胞增殖;荧光显微镜及流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;Western blot检测α-SMA、Ⅰ型胶原、acH3K9、acH3K14和acH3K18蛋白表达.结果SAHA呈剂量依赖性显著抑制LX-2细胞增殖(P<0.05);SAHA对LX-2细胞凋亡具有呈时间依赖性的促进作用(P<0.05);SAHA处理LX-2细胞后,α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而acH3K9、acH3K14和acH3K18乙酰化修饰水平明显升高(P<0.01).结论SAHA抗肝纤维化的机制可能与下调α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白表达,上调组蛋白acH3K9、acH3K14和acH3K18乙酰化修饰水平有关.
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蛋白酶体抑制剂协同组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导T细胞淋巴瘤凋亡及其与蛋白聚集体关系的研究
本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替唑米(bortezomib)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对T淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78的协同诱导凋亡作用,以及两药联合对蛋白聚集体形成的影响.硼替唑米(10 nmot/L)单药或硼替唑米(10 nmol/L)联合SAHA(2 μmol/L)处理Jurkat和Hut78细胞.应用台盼蓝拒染法计数细胞生长抑制率;细胞涂片观察细胞形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡变化;透射电子显微镜观察细胞凋亡和聚集体形成的超微结构特征.研究结果表明,与对照组和单用硼替唑米组比较,两药合用能够显著抑制Jurkat和Hut78细胞生长,促进细胞凋亡.流式结果显示,两药合用组的Jurkat和Hub78细胞凋亡细胞比例分别为(41.8±4.7)%和(72.7±11.7)%,显著高于对照组[(3.6±1.3)%和(7.0±1.9)%]和单用硼替唑米组[(6.3 4±2.3)%和(18.7±9.2)%](p均<0.01).超微结构显示,单用硼替唑米组细胞内多为典型的聚集体结构,两药合用组细胞内聚集体密度降低,数量减少甚至消失,且凋亡细胞明显增多.结论:蛋白酶体抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制荆能有效诱导T淋巴瘤细胞凋亡,两药具有协同作用.硼替唑米促进聚集体形成,SAHA能破坏聚集体结构,是增强硼替唑米促凋亡效应的可能机制之一.
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全反式维A酸联合辛二酰苯胺异羟肟酸对乳腺癌MCF-7细胞的作用
目的 诱导和促使肿瘤细胞向正常细胞分化是一种新的肿瘤治疗方式,目前临床上诱导分化药物多应用于白血病的治疗,因此开展实体肿瘤方面的体外研究势在必行.本实验将全反式维A酸(ATRA)和辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)联合用于乳腺癌MCF-7细胞,探讨两药联合对细胞增殖的影响以及联合用药是否具备协同增效的作用.方法 培养人乳腺癌MCF-7细胞,待细胞进入对数生长期,加入一定浓度的ATRA和(或)SAHA,倒置显微镜下观察细胞形态变化、MTT比色法检测增殖抑制作用.吸光度值及抑制率比较采用重复测量资料的方差分析,采用LSD进行两两比较.结果 倒置显微镜下加药组形态发生改变,两药联合组较单药组明显,且随时间延长作用更加显著;24 h时间点A1、B1组吸光度值与对照组比较差异无统计学意义(P=0.092),48 h时间点B1组与对照组比较差异无统计学意义(P=1.243).72 h、96 h、120 h时间点各实验组吸光度均值均小于对照组(分组差异有统计学意义,F=320.648,P=0.000;不同时间点吸光度值差异也有统计学意义,F=219.245,P=0.000;分组与时间具有交互作用,F=117.962,P=0.000).单药组增殖抑制率较对照组升高,两药联合组高于单药组,差异有统计学意义(分组:F=462.792,P=0.000;不同时间点:F=315.024,P=0.000;交互作用:F=179.682,P=0.000);两药联合作用q值在A1+B1组、A2+B1组24 h、48 h时间点均大于1.15,表现为协同作用,其余q值均大于0.85小于1.15,表现为相加作用.结论 ATRA和SAHA单独或联合作用于乳腺癌MCF-7细胞均可抑制其增殖,两药联合具有协同作用.
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羧胺三唑与SAHA联合用药抑制Lewis肺癌细胞的体内外研究Δ
目的：研究羧胺三唑（CAI）与组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）联合用药对Lewis肺癌细胞的抑制作用，对比联合用药与单药使用的药效差异。方法采用SRB法检测体外培养的Lewis肺癌细胞系在单独使用CAI或SAHA以及联合用药时的细胞活力变化；建立C57小鼠Lewis肺癌细胞皮下移植瘤模型，随机分为4组：溶剂对照组、CAI组、SAHA组、CAI+SAHA联合治疗组，连续给药25天，观察各组小鼠体质量变化、肿瘤体积、肿瘤抑制率及动物死亡情况。结果 CAI分别和两种剂量的SAHA联合用药后，对Lewis肺癌细胞活力的抑制作用高于CAI组，细胞活力的抑制率分别达到46.09%±5.50%和54.43%±3.69%，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。动物实验显示，与对照组相比，CAI组、SAHA组以及联合治疗组均抑制小鼠皮下肿瘤生长，且联合治疗组的肿瘤体积小于其他3组；除对照组外，各药物治疗组动物死亡率均低于20%。结论 SAHA与CAI联合使用能显著抑制Lewis肺癌细胞活力，并在Lewis肺癌细胞荷瘤动物中显现抗瘤增效作用。
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SAHA对人卵巢癌SKOV3细胞转移潜能影响及其机制探讨
目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)体外对人卵巢癌SKOV3细胞转移潜能的影响,并探讨其可能机制.方法:体外应用SAHA作用于人卵巢癌SKOV3细胞,实验分为对照组、4 μmol/L SAHA组、8 μmol/L SAHA组和12μmol/L SAHA组,划痕实验检测SKOV3细胞迁移能力,Tran-swell侵袭实验检测SKOV3细胞侵袭能力.蛋白质印迹法检测SKOV3细胞内组蛋白H4乙酰化水平,实时定量PCR方法检测SKOV3细胞uPA和uPAR基因mRNA表达.结果:经SAHA作用48 h后,对照组以及4、8和12 μmol/L组细胞Ac-H4表达量分别为0.10±0.04、0.21±0.05、0.40±0.05和0.72±0.04,Ac-H4表达量随SAHA剂量浓度增加而增加,P＜0.001;各组细胞划痕愈合率分别为(68.27±2.98)％、(35.19±2.97)％、(18.82±2.96)％和(10.24±2.98)％,划痕愈合率随SAHA剂量浓度增加而降低,P＜0.001;各组细胞穿过Transwell滤膜的细胞数量分别为58.89±4.35、37.66±4.27、21.15±4.32和10.75±4.30,穿过Transwell滤膜的细胞数量随SAHA剂量浓度增加而减少,P＜0.001;各组细胞uPAmRNA表达分别为22.48±1.05、15.40±1.02、8.62±1.05和5.27±1.08,随着SAHA剂量浓度增加而降低,P＜0.001;各组细胞uPAR基因mRNA表达量分别为18.22±1.12、12.37±1.14、7.64±1.10和3.55±1.12,随SAHA剂量浓度增加而降低,P＜0.001.结论:SAHA可抑制人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力,提高组蛋白乙酰化水平,降低uPA和uPAR基因表达可能是其作用机制.
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辛二酰苯胺异羟肟酸抑制慢性髓系白血病细胞增殖的研究
目的 研究辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)通过对microRNAs的调控及抑制慢性髓系白血病K562细胞的增殖和诱导细胞凋亡的作用.方法 对照组细胞不作任何处理;低、中、高3个浓度实验组分别给予0.625,1.25和5μmol·L-的SAHA处理.用噻唑蓝(MTT)法测定细胞活力,计算半抑制浓度(IC50);用Western blot法检测聚ADP核糖聚合酶(PARP)水平,用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测Bcr-Abl基因转录水平.将筛选到的可能靶向Bcr-Abl的microRNA转染到K562细胞中,用MTT法和定量PCR分别检测K562细胞的活力和Bcr-AM基因的转录水平.结果 结果显示,低、中、高浓度实验组对K562细胞增殖抑制率分别为42.4％,56.3％和89.1％,IC50为1.24μmol·L-1;荧光定量PCR结果显示,高浓度实验组处理24和36 h后,Bcr-Abl的转录水平分别下调为69.7％和29.3％.Western blot结果显示,SAHA诱导K562细胞PARP蛋白发生特异性切割,说明SAHA诱导细胞发生凋亡;同时SAHA上调可能靶向于Bcr-Abl的2个microRNAs(miR-5195和miR-194)水平;向K562细胞转染miR-5195和miR-194能显著下调Bcr-Abl转录水平,并抑制K562细胞的增殖.结论 SAHA通过上调miR-5195和miR-194的表达水平,进一步下调Bcr-Abl的转录水平,进而抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡.
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辛二酰苯胺异羟肟酸诱导人卵巢癌细胞OC3自噬作用
目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)是否诱导人卵巢癌细胞OC3发生自噬.方法 SAHA0.05,0.25,1.25,6.25和31.25 μmol· L-1处理OC3细胞24 h后,倒置显微镜吉姆萨和-瑞氏染色观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活;流式细胞术检测自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的表达;AO/EB双染色观察红色酸性自噬囊泡的出现;电镜直接观察自噬囊泡的结构.结果 不同浓度SAHA处理后,OC3细胞形态呈不规则梭形或多角形,细胞空泡化增多,折光性差.MTT结果表明,不同浓度SAHA处理对OC3细胞的存活具有明显的抑制作用,并存在时间和浓度效应关系,浓度相关系数分别为r12h=0.898,r24h=0.976和r48h=0.952(P＜0.05),SAHA 0.05,0.25,1.25,6.25和31.25lμmol·L-1时,时间相关系数分别为0.999,0.654,0.999,0.869和0.922(P＜0.05).SAHA与OC3细胞作用24 h后,AO/EB双染色可见红色酸性自噬囊泡出现;进一步电镜观察,可观察到自噬囊泡结构;流式细胞术检测结果表明,与正常对照组相比,SAHA 0.05,0.25,1.25,6.25和31.25 μmol·L-1处理OC3细胞24 h后,LC3B阳性细胞比率显著升高,分别为(1 9.4±2.4)％,(28.5±3.4)％,(34.6±3.9)％,(38.6±3.2)％和(61.8±1.0)％(P＜0.05).结论 SAHA可能通过诱导人卵巢癌细胞OC3发生自噬而杀伤肿瘤细胞.
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SAHA与妇科恶性肿瘤关系的研究进展
妇科恶性肿瘤是严重危害女性健康的疾病,目前非手术药物治疗主要为化疗,虽然有一定效果,但是传统的化疗药物存在普遍的耐药现象和严重的不良反应.妇科恶性肿瘤有效低毒的治疗新策略亟待探索.研究发现,组蛋白去乙酰化高表达与肿瘤发生密切相关,组蛋白去乙酰化酶抑制剂成为研发抗肿瘤新辅助治疗的热点.辛二酰苯胺异羟肟酸作为第一个被批准应用于临床的组蛋白去乙酰化酶抑制剂,受到越来越多的关注.
关键词： 辛二酰苯胺异羟肟酸 组蛋白去乙酰化酶抑制剂 妇科恶性肿瘤 -
辛二酰苯胺异羟肟酸对人卵巢癌细胞恶性表型的抑制作用
目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人卵巢癌细胞恶性表型的作用及其可能的分子作用机制.方法 (1)选取2组人卵巢癌细胞(SKOV3和SKOV3/DDP;HO8910和HO8910-PM)后,设置对照组和终浓度为1、3、5及7μmol/L SAHA组(SAHA 1~4组),采用CCK-8法分别检测SAHA对细胞增殖的影响.(2)设置对照组和SAHA 1、2组(2和5μmol/L),Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术分别检测SAHA对细胞凋亡及周期的影响.(3)RT-PCR和Western blot检测SAHA 1~4组表型相关蛋白的表达水平.结果 (1)随着SAHA浓度的增加,SKOV3细胞株SKOV3/DDP及HO8910细胞株48 h光密度(OD)值均呈逐渐降低趋势(均P<0.05).(2)48 h SAHA 1、SAHA 2组凋亡率高于对照组(均P<0.05);SAHA作用48 h,细胞周期发生阻滞,与对照组比较,SAHA 1组和SAHA 2组SKOV3和SKOV3/DDP细胞S期和G2/M期比例增高,HO8910和HO8910-PM细胞G0/G1期比例增高(P<0.05).(3)SAHA 1、2组CyclinB1和Cdc2(p34)的mRNA表达水平均低于对照组,Caspase-3、p21和p53的mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05);SAHA 1~4组Ac-Histone H3和Ac-Histone H4和p53蛋白的表达较对照组明显增强,CyclinB1、Cdc2 (p34)蛋白的表达减弱.结论 SAHA通过调节恶性表型相关蛋白Caspase-3、p53、CyclinB1和Cdc2(p34)的表达水平,促进组蛋白乙酰化,抑制卵巢癌细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡.
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辛二酰苯胺异羟肟酸对鼻咽癌细胞回复引导半胱氨酸丰富蛋白含kazal基元以及基质金属蛋白酶9表达与活性的影响
目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对鼻咽癌细胞回复引导半胱氨酸丰富蛋白含kazal基元(reversion-inducing-cysteine-rich protein with kazal motifs,RECK)以及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达与活性的影响.方法 体外培养鼻咽癌细胞系CNE-1,用0、0.1、1、5μmol/L SAHA处理后,采用蛋白质印迹法(Western blot)和Real-Time PCR(RT-PCR)分别检测RECK,MMP-9蛋白和mRNA表达;MTT法检测CNE-1细胞的增殖.同时采用明胶酶谱实验观察SAHA处理后MMP-9酶活性变化.结果 随着SAHA浓度的增加,RECK蛋白和mRNA的表达显著增高(P＜0.05);随着SAHA浓度的增加,MMP-9蛋白和mRNA的表达显著降低(P ＜0.05);CNE-1细胞随着SAHA浓度的增加,存活率逐渐降低(P＜0.05).明胶酶谱实验显示,随着SAHA浓度的增加,MMP-9酶活性逐渐降低.结论 SAHA可能通过上调RECK基因的表达,抑制MMP-9的表达与活性而发挥对CNE-1细胞生长抑制作用.
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辛二酰苯胺异羟肟酸对裸鼠人宫颈癌移植瘤的作用及其机制
目的：观察辛二酰苯胺异羟肟酸（ SAHA）对裸鼠人宫颈癌移植瘤生长的抑制作用，并对药物作用机制进行探讨。方法培养人宫颈癌SiHa细胞接种至20只裸鼠右下肢背侧根部皮下，15 d后将成瘤的18只裸鼠随机分3组：空白对照组、SAHA1组（25 mg/kg）、SAHA2组（50 mg/kg），每组6只。连续4 d腹腔注射药物，间歇7 d，再连续给药4 d，1次/d。观察各组裸鼠宫颈癌移植瘤的生长情况，计算抑瘤率。免疫组化分析及Western blot方法检测各组移植瘤中的Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果空白对照组抑廇率为0，SAHA1组为22．44％， SAHA2组为35．52％，2组比较差异有统计学意义（ P ＜0．05）。用药后，SAHA2组裸鼠体质量低于空白对照组及SAHA1组（ P ＜0．05）。SAHA1组与SAHA2组肿瘤体积均小于空白对照组，且SAHA2组小于SAHA1组（ P均＜0．05）。与空白对照组相比， SAHA1组与SAHA2组裸鼠肿瘤质量低，且SAHA2组低于SAHA1组，差异均有统计学意义（ P均＜0．05）；免疫组化及蛋白印迹法检测结果显示，与空白对照组比较，SAHA1组、SAHA2组Bax蛋白均明显升高，Bcl-2蛋白均明显降低（ P均＜0．05）。而SAHA2组较SAHA1组变化更明显，差异有统计学意义（ P均＜0．05）。结论 SAHA可以有效抑制人宫颈癌SiHa细胞裸鼠移植瘤的生长，Bax/Bcl-2相关的细胞凋亡是其抑癌机制之一。
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乳腺癌MCF-7细胞p21WAF1/CIP1启动子区雌激素受体α的高功能结合位点
目的 研究雌激素受体(ER)α募集于p21WAF1/CIP1启动子区调控其转录活性的具体作用位点,明确辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在调节p21WAF1/CIP1启动子功能中的分子机制.方法 将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol/L的SAHA 0.88 μL(SAHA组)、0.625 nmol/L的leptin 10 μL(leptin组)处理24 h,对照组在完全型RPMI-1640培养基中培养细胞.应用染色质免疫共沉淀技术将各组细胞裂解液与ERα抗体孵育,收集纯化结合ERα抗体的DNA片段,应用实时PCR法检测p21WAF1/CIP1启动子区从转录起始点到其上游(+ 2～-4 000 bp) f1 ～f10片段的DNA相对表达量并用2-△△Ct法分析.结果 对照组中,与ERα抗体结合的f1、f2、f8片段DNA相对表达量较f9片段高出2倍以上(P＜0.01).与对照组比较,SAHA及leptin组f1～f10片段与ERα抗体结合能力均降低,其中SAHA组f8片段DNA相对表达量达低值(P＜0.01),且明显低于leptin组(P＜0.01).SAHA组中以f8片段为对照,其他片段与ERα抗体结合能力均较其升高(P＜ 0.05或0.01).leptin组中以f8片段为对照,其他片段与ERα抗体结合能力均较其降低,除f1外均有统计学差异(P＜0.01).结论 乳腺癌细胞增殖过程中细胞增殖信号招募ERα至p21WAF1/CIP1启动子区,且p21WAF1/CIP1启动子区-2 800bp～-3 200 bp区域存在与ERα高度结合的靶功能区.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对卵巢癌SKOV3细胞的化疗增敏作用
目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)联合长春新碱(VCR)对卵巢癌SKOV3细胞的生物学作用,并阐明其作用机制.方法:选择人卵巢癌SKOV3细胞,分为对照组、SAHA组、VCR组和SAHA+VCR组.CCK-8法检测各组SKOV3细胞生存率,流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率、自噬率和细胞周期分布情况.结果:CCK-8检测,与对照组比较,SAHA组和VCR组SKOV3细胞生存率明显降低;与SAHA或VCR组比较,SAHA+VCR组SKOV3细胞生存率明显降低(P＜0.05).FCM检测,与对照组比较,SAHA和VCR组SKOV3细胞凋亡率、自噬率及G2/M期细胞百分率升高(P＜0.05);与SAHA或VCR组比较,SAHA+ VCR组SKOV3细胞凋亡率、自噬率及G2/M期百分率升高(P＜0.05).结论:SAHA可增强卵巢癌SKOV3细胞对VCR的敏感性,能够诱导SKOV3细胞凋亡与自噬,并促进G2/M期阻滞;SAHA和化疗药物联合应用可能是治疗卵巢癌的新策略.
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全反式维甲酸联合辛二酰苯胺异羟肟酸诱导MCF-7细胞凋亡
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)和辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)单独及联合应用时乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法:培养人乳腺癌MCF-7细胞,待细胞进入对数生长期,加入一定浓度的ATRA和(或)SAHA,采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况.结果:ATRA和SAHA单药及联合应用早期凋亡率均高于对照组,但24h时测得联合组早期凋亡率低于单药组,48h、72 h联合组早期凋亡率高于SAHA组却低于ATRA组,差异均有统计学意义(P＜0.05);联合组死亡细胞和晚期凋亡细胞率之和高于单药组及对照组,差异有统计学意义(P＜o.05).结论:ATRA和SAHA单独或联合作用于乳腺癌MCF-7细胞均可促进细胞凋亡,两药联合应用时诱导细胞凋亡作用更强.
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂抑制三阴性乳腺癌细胞增殖的实验研究
背景与目的:三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)是乳腺癌中的研究热点和治疗难点,目前尚无十分有效的靶向治疗药物.本研究旨在观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)对TNBC细胞增殖的影响,探讨针对组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)的治疗对TNBC治疗的可行性.方法:将HDACI辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)作用于TNBC细胞MDA-MB-468,用MTS比色法观察细胞生长情况；用流式细胞术(the flow cytometry,FCM)检测细胞周期分布、凋亡情况,以及P21、14-3-3 σ、Cyclin D1和Cyclin A2蛋白的表达状况,并进行统计分析；同时用Western blot检测以上4种蛋白的表达情况.结果:MTS比色法显示,MDA-MB-468在加入SAHA 24 h后出现细胞生长抑制并逐渐凋亡,于72 h达高峰；FCM检测显示,在加入SAHA 48 h后MDA-MB-468出现S期细胞比例下降,细胞内Cyclin A2蛋白的表达量下降,Cyclin D1、P21和14-3-3 σ蛋白的表达量上升,细胞凋亡率上升,与MDA-MB-468对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；Western blot检测结果显示,MDA-MB-468在SAHA加入48 h后Cyclin A2蛋白表达量下降,P21、14-3-3 σ及Cyclin D1蛋白表达量上升.结论:SAHA是TNBC细胞增殖的高效抑制剂并促进其凋亡,其抑制作用有一定的时效关系；抑癌基因表达产物P21、14-3-3 σ蛋白和周期素Cyclin D1、Cyclin A2参与了SAHA对细胞增殖周期的调控.
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辛二酰苯胺异羟肟酸对结肠癌HCT116和SW480细胞增殖、周期和凋亡的影响
目的:研究辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对结肠癌细胞系HCT116和SW480增殖、周期和凋亡的影响,并对其分子作用机制进行初步探讨.方法:将不同浓度SAHA分别处理结肠癌HCT116和SW480细胞后,MTT法检测SAHA对HCT116和SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测HCT116和SW480细胞周期和细胞凋亡率,罗丹明(rhodamine) 123和二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测HCT116和SW480细胞线粒体跨膜电位(Aψm)和活性氧(ROS)水平,Real-time PCR和Western blotting法检测乙酰化组蛋白3(Ac-H3)、p21、CyclinD1、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白的表达水平.结果:SAHA作用于HCT116和SW480细胞48 h后,细胞增殖被抑制、细胞周期G1期比率升高、凋亡率升高(均P＜0.05),线粒体跨膜电位显著下降、细胞内ROS产生增多(均P＜0.05).与对照组比较,SAHA处理组p21和Bax mRNA增多、Cyclin D1和Bcl-2 mRNA表达量减少(均P＜0.05),相关蛋白Ac-H3、p21和Bax增多,CyclinD1和Bcl-2减少(均P＜0.05).结论:SAHA抑制结肠癌HCT116和SW480细胞增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其机可能与调节p21、CyclinD1和Bcl-2家族基因的表达、促进组蛋白乙酰化有关.
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辛二酰苯胺异羟肟酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响
目的：探讨辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞，给予不同浓度（2.5、5.0和7.5μmol/L）SAHA处理12~72h，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖；加入SAHA（5.0和7.5μmol/L）处理SMMC-7721细胞24h或48h，使用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化；采用RT-PCR法检测p53、bcl-2及bax基因mRNA水平；采用分光光度法检测Caspase-3蛋白表达。结果经5.0μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时，细胞增殖率较对照下降了25.8%和28.8%，经7.5μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时，下降了30.6%和48.6%；经5.0μmol/L或7.5μmol/L SAHA处理细胞24 h后，S期细胞从对照水平（24.33±0.17）%分别显著上升至（32.08±0.160）%和（33.96±0.20）%，（P=0.00），早期凋亡率均由（0.19±0.04）%显著上升至（1.67±0.59）%和（8.92±0.94）%，（P=0.03），而在48h后，S期细胞由（24.33±1.18）%分别显著上升至（32.25±0.53）%和（34.61±0.08）%，早期凋亡率由（0.19±0.04）%分别显著上升至（14.49±2.26）%和（26.23±0.55）%，（P=0.00）；SAHA能够上调p53、bax基因mRNA水平，下调bcl-2基因mRNA水平；经5.0μmol/L和7.5μmol/L SAHA处理细胞24h后，Caspase-3蛋白活性由对照水平（0.41±0.07）分别上升至（0.81±0.02），（P=0.01）和（1.09±0.21），（P=0.00），而在处理48 h后，Caspase-3蛋白活性由对照水平分别上升至（1.43±0.23）和（2.01±0.01），（P均=0.00）。结论 SAHA通过影响p53、bcl-2及bax凋亡相关基因水平及Caspase-3蛋白的活性，对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用。
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HDAC1在调控乳腺癌MCF-7细胞p21WAF1/CIP1转录过程中与ERα的协同作用
目的 研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)、雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)共同募集于p21WAF1/CIP1启动子特定区域,调控其转录活性的具体作用位点,同时明确辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)及瘦素(Leptin)在调节p21WAF1/CIP1启动子功能中的作用机制.方法 将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20 μmol·L-1 0.88 μL SAHA (SAHA组)、0.625 nmol·L-1 10 μL Leptin(Leptin组)处理24 h,对照组(Basal组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中.各组细胞裂解液先后与HDAC1抗体及ERα抗体进行染色质免疫共沉淀(chromatin-immunoprecipitation, ChIP)孵育,收集纯化结合HDAC1及ERα抗体的DNA片段,应用Real-time PCR法检测p21WAF1/CIP1 启动子区从转录起始位点(transcription start site, TSS)到其上游(+2~-4 000 bp) f1~f10片段的DNA相对表达量,并用2-△△CT法分析.结果 Basal组中,HDAC1、ERα抗体在p21WAF1/CIP1启动子区f1、f8片段有高亲和力.SAHA 组中,HDAC1、ERα抗体与p21WAF1/CIP1启动子区f1、f8片段结合量明显低于对照组,而在Leptin组两片段与HDAC1、ERα抗体结合量明显高于对照组.结论 乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,细胞增殖信号可招募HDAC1、ERα至p21WAF1/CIP1启动子区.该启动子区上游0~-400 bp,-2 800~-3 200 bp DNA片段是与HDAC1、ERα共同作用的靶功能区.
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乳腺癌MCF-7细胞p21 WAF1/CIP1启动子区HDAC1高功能结合位点的研究
目的 研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)募集于p21WAF1/CIP1启动子区调控其转录活性的特异性结合位点.方法 将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L-10.88μL SAHA(S组)、0.625 nmol·L-110μL Leptin(L组)处理24 h,对照组(B组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中.各组细胞裂解液与HDAC1抗体孵育,收集纯化结合HDAC1抗体的DNA片段,应用Real-time PCR法检测p21 WAF1/CIP1启动子区从TSS到其上游(+2~-4000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCT法分析.结果 B组中,HDAC1抗体在p21WAF1/CIP1启动子区f1、f8片段有高亲和力,f8片段达高.S组中,HDAC1抗体与p21 WAF1/CIP1启动子区f1~f10片段结合量明显低于对照组,f8片段达低,而在L组此片段与HDAC1抗体结合量达大值.结论 乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,HDAC1可被招募至p21 WAF1/CIP1启动子区,该启动子区上游-2800 bp至-3200 bp DNA片段是与HDAC1高度结合的靶功能区.
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鞘内注射SAHA对M型瞬时受体电位通道2介导小鼠慢性炎性痛的影响
目的 探讨鞘内注射辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对M型瞬时受体电位通道2(TRPM2)介导小鼠慢性炎性痛的影响.方法 将雄性野生型(WT)小鼠和TRPM2-/-小鼠各32只,按随机对照原则分为8组:WT对照组(WT CON组)、WT溶媒组(WT DMSO组)、WT炎性痛组(WT CFA组)、WT炎性痛+SAHA组(WT SAHA组)、TRPM2-/-对照组(TRPM2-/-CON组)、TRPM2-溶媒组(TRPM2-/-DM-SO组)、TRPM2-/-炎性痛组(TRPM2-/-CFA组)、TR-PM2-/-炎性痛+SAHA组(TRPM2-/-SAHA组),每组8只.采用完全弗氏佐剂(CFA)40μl于小鼠左后肢足底皮下注射建立慢性炎性痛模型,WT和TRPM2-/-的SAHA组于造模后3～9d行为学测试后鞘内注射50 mg/kg的SAHA,WTCON组、WT CFA组、TRPM2-/-CON组、TRPM2-/-CFA组4组注射等量生理盐水.WT和TRPM2-/-的DMSO组鞘内注射与SAHA等体积的DMSO.分别测定小鼠的机械刺激伤害感受阈、辐射热刺激伤害感受阈及足爪的肿胀度.结果 TRPM2-/-小鼠在未造模前表现出正常的疼痛行为学反应,与WT小鼠差异无统计学意义.WT和TRPM2-/-小鼠鞘内注射DMSO,其疼痛行为学指标与未注射前差异无统计学意义.WTCFA组的机械刺激伤害感受阈值和热刺激伤害感受阈值均明显低于WT CON组(P ＜0.001),WT SAHA组在给予SAHA干预后,各种疼痛阈值显著升高,与WTCFA组比较差异有统计学意义(P ＜0.001);TRPM2-/-CFA组机械刺激伤害感受阈值和辐射热刺激伤害感受阈值均明显高于WT CFA组,与TRPM2-/-SAHA组比较差异无统计学意义.WT CFA组足爪肿胀度造模后明显升高,与WTCON组、WT SAHA组比较均差异有统计学意义(P＜0.001);TRPM2-/-CFA组足爪肿胀度明显低于WT CFA组(P ＜0.001),与TRPM2-/-SAHA比较差异无统计学意义.结论 TRPM2参与小鼠慢性炎性痛的发生发展,鞘内注射SAHA可能改善TRPM2介导的慢性炎性痛.
