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不同Aβ多肽与佐剂组合免疫小鼠对Th1/Th2平衡的调节作用
目的 观察野生型和突变型Aβ40及Aβ42与不同佐剂组合对T淋巴细胞亚型的不同刺激和调节作用,以探讨降低AB免疫毒性反应的可能途径.方法 BALB/c小鼠随机分组:铝(Al)佐剂对照组、Aβ42+福氏佐剂(CFA)组、Aβ42+A1组、Ap40+A1组、Aβ40(E22A)+A1组,每组8只.经初次免疫和3次加强免疫,检测抗体效价,培养脾淋巴细胞,分别用各自抗原刺激,48 h后用双抗夹心ELISA试剂盒检测培养液中IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-4的含量.72 h后用CCK-8法检测脾淋巴细胞特异性增殖反应.结果 经Aβ免疫的4个试验组血清中均有特异性抗Aβ的抗体产生.脾淋巴细胞经各自抗原刺激后,均出现脾淋巴细胞特异性增殖反应.细胞培养上清中细胞因子检测结果显示,Aβ42+CFA组分泌的代表Th1型的细胞因子含理量高,A1340(E22A)+A1组则有显著降低(P<0.01).其中Aβ40及突变型+A1组与Aβ42+A1组相比,分泌的Th1型细胞因子也有明显降低(P<0.05).结论 Aβ40(E22A)+A1组对T细胞的毒性作用低,在机体的免疫反应中可能具有更好的安全性.
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Aβ通过Ash1l上调H3K4二甲基化水平抑制BDNF表达并介导海马神经元损伤
目的 在Aβ处理海马神经元后,观测H3K4甲基化水平的变化,以及BDNF表达和神经元死亡的改变.方法 在Aβ处理后,用蛋白免疫印迹以及染色质免疫共沉淀方法检测神经元中总H3K4甲基化水平和BDNF启动子H3K4甲基化水平.在siRNA敲减Ash1l后,通过荧光定量PCR和酶联免疫吸附的方法检测BDNF表达.同时,使用MTT实验检测敲减Ash1l后Aβ诱导海马神经元损伤的改变.结果 在Aβ处理海马神经元后,BDNF启动子和总H3K4甲基化水平均显著上升,而敲减Ash1l可以阻止这一现象.另外,在敲减Ash1l后,Aβ诱导的BDNF表达下调被抑制,同时海马神经元损伤也得到缓解.结论 Ash1l蛋白被发现可以在Aβ多肽下游调节BDNF启动子区的H3K4Me2水平,通过抑制BDNF的表达促进神经元的死亡.
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阿尔采末病Aβ多肽基因的高效表达及纯化研究
目的通过对Aβ多肽基因进行重组克隆,构建质粒和高效表达的菌株,并研究表达产物快速高效的纯化回收方法.方法采用IMPACT-TWIN 表达系统构建Intein-Aβ重组基因表达质粒,将该质粒转化至BL21(DE3),筛选高效表达菌株;表达产物经Chitin Beads亲和层析柱分离纯化;SDS-PAGE电泳,毛细管区带电泳及免疫印迹法等鉴定.结果重组的Intein-Aβ基因在BL21中获得高效表达,筛选出稳定高效表达的BL21(DE3)细胞株;融合蛋白表达量可达全菌蛋白的60%;表达产物经Chitin Beads亲和层析纯化后,其纯度可达98%以上,并具有与Aβ多肽相同的分子量及免疫学活性.结论 Aβ多肽基因在IMPACT-TWIN系统中可获得高效表达,利用Chitin Beads亲和层析方法可将表达的Aβ多肽进行快速、简便、无酶化的高效分离纯化.
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脑脊液中高浓度锌诱导的大鼠阿尔茨海默病样行为及病理学变化
目的研究脑脊液锌浓度增高诱发的大鼠阿尔茨海默病(AD)样行为学、病理学特征性改变.方法注射氯化锌溶液(ZnCl2)到大鼠脑室,用Morri's水迷宫测试行为学;用流式细胞仪测定凋亡细胞;用免疫细胞化学染色法显示β淀粉样蛋白(Aβ)的表达;透射电镜下观察超微病理改变.结果锌处理大鼠有严重的行为损害;凋亡细胞增加;大脑皮层及海马区有散在黄褐色的Aβ免疫染色斑块;电镜下可见核溶解和微管紊乱等超微病理变化.结论大鼠脑脊液中锌浓度的增高会导致类似人类AD的智力和病理学特征性改变.
