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蛋白酶体抑制剂协同组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导T细胞淋巴瘤凋亡及其与蛋白聚集体关系的研究
本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替唑米(bortezomib)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对T淋巴瘤细胞株Jurkat和Hut78的协同诱导凋亡作用,以及两药联合对蛋白聚集体形成的影响.硼替唑米(10 nmot/L)单药或硼替唑米(10 nmol/L)联合SAHA(2 μmol/L)处理Jurkat和Hut78细胞.应用台盼蓝拒染法计数细胞生长抑制率;细胞涂片观察细胞形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡变化;透射电子显微镜观察细胞凋亡和聚集体形成的超微结构特征.研究结果表明,与对照组和单用硼替唑米组比较,两药合用能够显著抑制Jurkat和Hut78细胞生长,促进细胞凋亡.流式结果显示,两药合用组的Jurkat和Hub78细胞凋亡细胞比例分别为(41.8±4.7)%和(72.7±11.7)%,显著高于对照组[(3.6±1.3)%和(7.0±1.9)%]和单用硼替唑米组[(6.3 4±2.3)%和(18.7±9.2)%](p均<0.01).超微结构显示,单用硼替唑米组细胞内多为典型的聚集体结构,两药合用组细胞内聚集体密度降低,数量减少甚至消失,且凋亡细胞明显增多.结论:蛋白酶体抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制荆能有效诱导T淋巴瘤细胞凋亡,两药具有协同作用.硼替唑米促进聚集体形成,SAHA能破坏聚集体结构,是增强硼替唑米促凋亡效应的可能机制之一.
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蛋白聚集体在神经退行性疾病中的研究进展
错误折叠蛋白被认为是许多神经退行性疾病发病机制中的始动因素,易形成蛋白聚集物,干扰细胞正常的生理功能.因此,错误折叠蛋白及其聚集物的降解对于细胞的生存至关重要.目前,在蛋白降解通路中,除了已知的泛素-蛋白酶体系统这一重要通路外,蛋白聚集体通路也越来越受到研究者的重视.现就近年来蛋白聚集体在神经退行性疾病发病机制中的研究进展予以综述.
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蛋白聚集体形成研究进展
神经退行性疾病(neurodegenerative disorder)是由于神经元进行性变性死亡导致的以中枢神经系统损害为主的神经系统疾病.其中包括帕金森病、阿尔茨海默症、亨廷顿舞蹈病等.当错误折叠的蛋白超过分子伴侣的重新折叠和泛素-蛋白酶体系降解能力的时候,错误折叠的蛋白质可以通过被介导的动力蛋白马达逆向转运至微管组织中心周围形成蛋白聚集体.蛋白聚集体的形成被认为是细胞的一种防御反应,隔离有毒的错误折叠蛋白进而进行清除.蛋白聚集体通路的研究可为多种神经退变性疾病提供治疗靶点.
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人巨细胞病毒pUL76蛋白非保守C端与蛋白聚集体形成的研究
目的：通过分别构建人巨细胞病毒( HCMV) UL76基因编码蛋白的全长以及保守N端和非保守C端的真核表达质粒，探讨 pUL76引起核内蛋白聚集体形成的决定序列。方法根据GenBank中HCMV AD169(FJ527563.1)株基因序列设计分别用于扩增pUL76全长以及保守N端和非保守C端的引物，将3段序列分别构建至增强型绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1)中，经双酶切和测序验证重组质粒的正确构建。空载体和3种重组质粒分别瞬时转染人胚肺成纤维细胞( HELF )和人肝癌细胞( HepG-2)，经逆转录( RT-PCR)和Western blot法验证各段基因的正确表达，在荧光显微镜下观察转染不同重组质粒后细胞核内蛋白聚集体形成的状态。结果 pEGFP-N1空载体和pUL76保守N端均不能引起核内蛋白聚集体的形成，而pUL76及其非保守C端均能够引起核内蛋白聚集体的形成。结论 pUL76非保守C端是其引起核内蛋白聚集体形成所必须的。
