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阿托伐他汀对LPS诱导的人血管内皮细胞表达TLR4的影响
[目的]通过研究阿托伐他汀对LPS诱导的人血管内皮细胞TLR4 mRNA和蛋白质表达的影响,探讨其抗炎机制.[方法]采用1640培养液培养人血管内皮细胞;TLR4诱导的人血管内皮细胞分为五组:空白组(A组)、LPS组(B组)、阿托伐他汀钙低浓度组(C组)、阿托伐他汀钙中浓度组(D组)和阿托伐他汀钙高浓度组(E组),每组9个副孔,采用RT-PCR方法观察各组TLR4mRNA表达情况;用Westen Blot方法检测TLR4蛋白表达情况.[结果]与空白组(A组)相比,LPS组(B组)TLR4mRNA和蛋白质表达显著增加;阿托伐他汀抑制LPS诱导的TLR4 mRNA和蛋白质表达均呈剂量依赖性;阿托伐他汀高浓度组(E组)LPS诱导TLR4 mRNA和蛋白质表达明显减少(P＜0.05).[结论]阿托伐他汀能够通过抑制TLR4信号转导通路,抑制TLR4表达起到抗炎作用,进而发挥延缓动脉粥样硬化进程作用.
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人脐动脉脱细胞支架的制备及其生物相容性
目的:制备脱细胞人脐动脉支架并检测其与内皮细胞的相容性.方法:实验于2005-11/2006-12在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成.实验材料:健康新生儿的新鲜脐带(产妇知情同意并自愿捐献).实验方法:①脱细胞脐动脉支架的制备:分离脐动脉放于离心管中,先用低渗后用等渗的十二烷基硫酸钠处理,再用核酸酶消化.脱细胞脐动脉支架作苏木精-伊红染色、Movat五色法染色及透射电镜观察.②支架与内皮细胞共培养:将脱细胞脐动脉支架切成小块,移入24孔培养板中.实验组每孔接种1.5 mL的脐静脉内皮细胞悬液,对照组未种细胞,只加1.5 mL的培养液,1周后进行扫描电镜观察.实验评估:①脱细胞脐动脉支架的形态.②血管内皮细胞在脱细胞脐动脉支架上黏附生长情况.结果:①脱细胞脐动脉支架的形态:光镜下对照组样品中观察到深蓝色的细胞核,实验组细胞结构被完全破坏,核破碎后被彻底清除,未见核碎片,血管壁纤维组织染成红色,呈整齐排列,组织结构未见明显的疏松;Movat五色法染色显示,脱细胞血管无红色的细胞质和黑色的细胞核,只见呈现整齐排列的波浪状黑色的弹性纤维,其间散布着蓝色的糖蛋白和网状纤维;透射电镜下观察到交错排列的胶原纤维和弹性纤维,有少量碎片存在,未见细胞样结构.②血管内皮细胞在脱细胞脐动脉支架上黏附生长情况:脐静脉内皮细胞种植于脱细胞脐动脉支架后,扫描电镜观察到可黏附生长并形成完整内膜层.结论:用十二烷基硫酸钠和核酸酶联合消化人脐动脉能够制备良好的脱细胞血管支架,并且对内皮细胞有良好的组织相容性.
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组织工程化类金刚石膜复合材料与人血管内皮细胞的相容性研究
目的:验证纳米相类金刚石薄膜复合材料与人血管内皮细胞相容性,为组织上程化机械瓣膜材料的构建提供依据.方法:利用脉冲激光沉积法在人工心脏机械瓣膜上沉积纳米相类金刚石薄膜,将人脐静脉血管内皮细胞与纳米相类金刚石薄膜复合材料体外复合培养.倒置显微镜及扫描电镜观察细胞在材料表面的生长、附着情况;MTT法检测细胞在材料上增殖情况;同时分别测定人脐静脉血管内皮细胞在类金刚石溥膜材料和空白对照组中一氧化氮及前列环素分泌水平,以评价其活性.结果:人脐静脉血管内皮细胞能在纳米相类金刚石薄膜复合材料上良好地黏附、增殖、生长.人脐静脉血管内皮细胞分泌一氧化氮和前列环素水平在类金刚石薄膜材料和空白对照组没有显著性差异(P>0.05),说明纳米相类金刚石薄膜材料对人脐静脉血管内皮细胞的活性没有影响.结论;纳米相类金刚石薄膜复合材料具有良好的细胞相容性,有可能作为组织工程化机械瓣膜材料.
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血管内皮细胞生长因子受体2 shRNA对白血病鼠微血管生成抑制的研究
目的 研究慢病毒载体携带的血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)基因短发夹RNA(Lenti6/shVEGFR2)对VEGFR2表达的特异抑制及对HL60人白血病细胞所诱导血管生成的作用.方法 2005年10月至2006年2月,中山大学附属第二医院儿科选择6周龄、体重25～30g的雄性NOD/SCID小鼠15只,分成3组,实验采用双盲法.将pU6/sh VEGFR2入门克隆与pLenti6/BLOCK-iTTM-DEST载体发生LR重组反应.用HL60人白血病细胞评价Lenti6/sh VEGFR2对血管生成的作用.通过检测骨微血管密度评估Lenti6/sh VEGFR2感染HL60细胞后对VEGFR2活性的特异抑制作用.结果 建立了表达VEGFR2基因小发夹RNA的慢病毒载体(knti6/shVEGFR2).在静脉异体移植的HL60白血病小鼠中,Lenti6/shVEGFR2感染显著抑制了血管生成(P＜0.05).结论 慢病毒介导的VEGFR2 RNA干扰有可能成为通过抑制病理性血管生成治疗白血病的有效方法.
关键词： 血管生成 人血管内皮细胞 白血病 shRNA 血管内皮细胞生长因子受体 -
镁离子与锌离子对人血管内皮细胞和平滑肌细胞迁移功能的影响
目的 探讨镁离子与锌离子对人血管内皮细胞以及平滑肌细胞功能的影响.方法 本研究通过体外培养人血管内皮细胞和平滑肌细胞,利用氯化镁,氯化锌溶液模拟可降解镁合金心血管支架在体内降解后镁离子,锌离子对人血管内皮细胞和平滑肌细胞迁移功能的影响.将平滑肌细胞,血管内皮细胞分别分为对照组、氯化镁组、氯化锌组3组,将他们分别与对照组进行比较,统计出细胞迁移个数,并进行统计学分析.结果 在12.5 mmol/L氯化镁浓度处理下,血管内皮细胞的细胞迁移个数为(120.00±12.14),高于对照组血管内皮细胞的细胞迁移个数(94.80±9.50)(P<0.05);在100 μmol/L的氯化锌浓度处理下,血管内皮细胞的细胞迁移个数为(113.20±10.83),高于对照组血管内皮细胞的细胞迁移个数(94.80±9.50)(P<0.05).在12.5 mmol/L 氯化镁浓度处理下,平滑肌细胞的细胞迁移个数为(33.78±8.05),低于对照组平滑肌细胞的细胞迁移个数(40.39±6.60)(P<0.05);在100 μmol/L的氯化锌浓度处理下,平滑肌细胞的细胞迁移个数为(20.36±7.02),低于对照组平滑肌细胞的细胞迁移个数(40.39±6.60)(P<0.05).结论 镁离子与锌离子可以促进人血管内皮的迁移功能,抑制平滑肌的迁移.
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糖基化终产物对人血管内皮细胞基质金属蛋白酶-2表达和活性的影响
目的 探讨糖基化终产物(AGEs)对人血管内皮细胞ECV304基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达和活性的影响.方法 应用AGEs作用ECV304细胞后,采用RT-PCR法及明胶酶图分析方法分析MMP-2表达和活性与AGEs浓度和时间的关系.结果 RT-PCR结果显示,AGEs能够诱导ECV304细胞表达MMP-2,其诱导表达具有浓度和时间依赖性(P＜0.01).明胶酶图分析显示,MMP-2降解明胶的活性与AGEs具有浓度依赖性.结论 AGEs能够促进ECV304细胞MMP-2的表达和活性,推测AGEs调控MMP-2表达和活性可能在血管壁内皮细胞影响动脉粥样硬化的进展中发挥一定的作用.
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血管紧张肽-(1-7)对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞钙离子动员的影响
目的 探讨血管紧张肽-(1-7)[Ang-(1-7)]对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞内钙离子动员的影响.方法 原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)以Fluo-3/AM进行负载,再分别以Ang-(1-7)、ox-LDL和A-779进行单独或联合刺激.以激光共聚焦显微镜动态扫描细胞,每隔10 s扫描1次,每组扫描6～10个细胞,实时记录荧光强度变化,取其均值.结果 单个内皮细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的基础值在100 s内保持稳定.加入ox-LDL(50 mg/L)后,使内皮细胞内[Ca2+]i迅速而短暂地增加,在50 s内升高6.4倍,300 s左右恢复至基础水平(P＜0.01).Ang-(1-7)和A-779对基础状态下的内皮细胞内[Ca2+]i水平无明显影响,但Ang-(1-7)使ox-LDL诱导的细胞内[Ca2+]i的增幅下降60%(P＜0.05),A-779可阻断Ang-(1-7)的作用(P＜0.05).结论 Ang-(1-7)对ox-LDL诱导的脐静脉内皮细胞钙离子动员具有显著的抑制作用,此作用是通过其特异性受体实现的.
关键词： 血管紧张肽-(1-7) 氧化低密度脂蛋白 人血管内皮细胞 钙离子 -
重组腺病毒载体Ad5-hVEGF165-EGFP的构建与鉴定
目的：人血管内皮生长因子（的hVEGF165）为靶基因，增强型绿色荧光蛋白（ EGFP ）基因构建体的复制缺陷型腺病毒载体，为基因治疗牙周进一步再生奠定了基础。方法质粒的pDC316-的VEGF165为模板， PCR扩增基因片段进行消化，获得的hVEGF165用于连接到含有绿色荧光蛋白标记基因重组质粒的消化方法的pDC316-MCMV-EGFP质粒载体， PCR鉴定和双酶切证实成功构建重组质粒；使用ADMAX包装系统，改造的质粒共转染用质粒骨架293包装细胞系和重组病毒的扩增；扩增病毒的离子交换纯化； TCID50测定病毒粒子和效价的数目；的荧光的荧光显微镜重组腺病毒表达。结果 PCR鉴定，酶切分析和测序证实成功构建人VEGF基因的携带绿色荧光蛋白标记（的hVEGF165）重组质粒的pDC316-的hVEGF165-MCMV-EGFP和同源重组腺病毒Ad5的-的hVEGF165-EGFP的成功。扩增和纯化后，腺病毒颗粒的数量测量5.4×1011 VP/mL，约2.0，为1.8×1010CCID50/mL的滴度OD260/OD280值。结论成功构建携带hVEGF165基因重组腺病毒载体Ad5-hVEGF165-EGFP并获得高滴度病毒颗粒，为hVEGF165基因功能研究以及细胞移植、基因治疗提供有效的工具。
关键词： 人血管内皮细胞 基因治疗 牙周组织再生 5型复制缺陷型腺病毒 -
hVEGF基因修饰的组织工程化复合物修复牙周组织缺损的实验研究
目的 探讨hVEGF165基因修饰的BMSCs在SD大鼠急性牙周缺损模型中对牙周组织再生的作用.方法 人工构建SD大鼠急性牙周缺损模型.设以下6组(36只SD大鼠,n=6):空白对照(A组);单纯e-PTFE膜(B组);BME+e-PTFE膜(C组);BMSCs+BME+e-PTFE膜(D组);空转BMSCs+BME+e-PTFE膜(E组);hVEGF165基因修饰的BMSCs+BME+e-PTFE膜(F组).分别将转染hVEGF165基因的BMSCs与未转染的BMSCs接种于胶原膜BME-10X后,按各分组植入人工牙周缺损内,并以空白胶原膜和空载体为对照.4周后取材作病理切片,HE染色观察牙周组织再生情况,测量新生牙槽骨面积、新生牙骨质面积以及新生牙周膜宽度,结果进行统计学分析.结果 各组均可见不同程度的牙周组织再生,A组、B组和C组三组新生牙槽骨面积(NB)、新生牙骨质面积(NC)和新生牙周膜宽度(NP)均无明显差别(P＞0.05);与A组相比,D组、E组、F组的NB、NC均有显著增加(P＜0.05);与E组相比,转染有hVEGF165基因组(F组)的NB、NC和NP均有显著增加(P＜0.05).结论 hVEGF165基因转染BMSCs与胶原膜复合物可促进大鼠牙周组织再生.
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睾酮对人血管内皮细胞tPA、PAI-1基因表达的影响
目的:观察睾酮对人血管内皮细胞(HUVEC)纤溶酶原激活物(tPA)及其抑制物1(PAI-1)表达的影响.方法:将体外培养的HUVEC分别与4个浓度睾酮组(3、30、3×103、3×104 nmol/L)及单纯培养液对照组作用48h,RT-PCR法观察各组tPA、PAI-1 mRNA表达水平.结果:生理浓度睾酮组(3和30 nmol/L)tPA mRNA水平明显高于对照组,PAI-1 mRNA水平均明显低于对照组(P均＜0.05).3×104 nmol/L睾酮组tPA、PAI-1 mRNA水平均明显降低(P＜0.05).结论:生理浓度睾酮通过促进tPA表达,抑制PAI-1合成,增强纤溶系统活性,有利于防止男性冠心病等血栓性疾病.
关键词： 睾酮 人血管内皮细胞 纤溶酶原激活物抑制物 纤溶酶原激活物抑制物1 血栓性疾病 -
薯蓣皂苷元体内外抑制胃癌增殖的机制
目的:研究薯蓣皂苷元抑制胃癌增殖及转移的主要途径及其机制.方法:分别使用1,10,100 μg/mL浓度薯蓣皂苷元处理人血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)和胃癌BGC-823细胞,制作细胞生长曲线,观察薯蓣皂苷元对细胞增殖能力的影响;选取一定浓度的薯蓣皂苷元处理HUVEC和BGC-823细胞,体外成管实验和划线法分别检测药物处理对血管内皮细胞成管能力及肿瘤细胞迁移能力的影响.将BGC-823细胞接种到裸鼠制作皮下肿瘤模型,连续静脉注射薯蓣皂苷元,分析比较其对皮下肿瘤的抑制效果.结果:与对照组比较,薯蓣皂苷元可明显抑制内皮细胞增殖活性(P＜0.05),且具有浓度依赖性;而相同处理方式对BGC-823细胞的增殖活性基本无影响;10 μg/mL的薯蓣皂苷元对BGC-823细胞的迁移能力具有明显的抑制作用,能够明显抑制HUVEC细胞体外成管能力;与模型组比较,薯蓣皂苷元给药组肿瘤抑制率明显增高(达38.2％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:薯蓣皂苷元可以通过抑制内皮细胞增殖活性影响肿瘤血供,并终抑制皮下肿瘤模型的增殖,同时,其可通过直接的作用抑制胃癌的迁移.
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磷酸二酯酶4D交互蛋白基因对布加综合征隔膜形成的影响
目的 探讨磷酸二酯酶4D交互蛋白(PDE4DIP)基因对布加综合征(BCS)隔膜形成的影响.方法 通过小干扰RNA特异性沉默人血管内皮细胞(HUVECs)中的PDE4DIP基因,应用CCK8实验、划痕实验及血管形成实验分别检测转染后各组的增殖、迁移及血管形成能力,分析其改变情况.结果 沉默该基因后,其mRNA及蛋白水平表达均下降,差异均有统计学意义(P＜0.05);各组细胞增殖的差异无统计学意义(P=0.51),迁移能力(P =0.003)及血管形成能力(P=0.001)明显降低.结论 在HUVECs细胞中,PDE4DIP基因沉默具有抑制HU-VECs细胞迁移及血管形成能力的作用,可能与BCS隔膜形成有关.
关键词： 人血管内皮细胞 磷酸二酯酶4D交互蛋白基因 布加综合征 -
红花注射液对野百合碱损伤血管内皮细胞NO活性、内皮型NO合成酶及结缔组织生长因子表达的影响
目的 探讨红花注射液对野百合碱(MCT)损伤的血管内皮细胞一氧化氮(NO)产生、内皮型NO合成酶(eNOS)及结缔组织生长因子(CTGF)表达及活性的影响.方法 人血管内皮细胞(HUVECs)分为空白对照组、MCT组、红花注射液组.以CCK-8法检测红花注射液对HUVECs增殖的抑制作用,硝酸还原酶法检测NO含量,荧光定量PCR和Western blot法检测eNOS和CTGF的mRNA和蛋白表达情况.结果 红花注射液有效抑制HUVECs增殖,呈浓度依赖性.与空白对照组相比,MCT组eNOS表达降低,NO生成降低(均P<0.05),而CTGF表达增加(P<0.05);与MCT组比较,红花注射液组eNOS活性及NO的生成均增加(均P<0.05),而CTGF表达降低(P<0.05).结论 红花注射液可促进MCT损伤的血管内皮细胞eNOS活性增加及NO产生,抑制CTGF的表达和分泌.
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双团棘胸蛙皮肤胸腺肽-β4的基因克隆及活性检测
目的：研究双团棘胸蛙( Nanorana yunnanensis)皮肤胸腺肽-β4的基因和促进血管生成作用。方法通过基因扩增的方法克隆出双团棘胸蛙的2个皮肤胸腺肽-β4( pTβ4-1和pTβ4-2)的cDNA；根据推导蛋白序列合成多肽在鸡胚尿囊膜和内皮细胞实验系统进行血管生成活性分析。结果 pTβ4-1和pTβ4-2的cDNA长度分别为662 bp和673 bp,开放阅读框都为135 bp,编码44个氨基酸残基。成熟蛋白拥有四足动物胸腺肽β4的典型特征。 pTβ4-1和pTβ4-2的cDNA序列及成熟蛋白与来源于人类、家鼠、家鸡、爪蟾、斑马鱼、大比目鱼和棕点湍蛙的胸腺肽-β4高度相似；合成的 pTβ4-1和pTβ4-2都能促进鸡胚尿囊膜血管生长和内皮细胞小管形成。结论双团棘胸蛙皮肤含有两个具有促血管生成的胸腺肽-β4。
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hV EGF基因修饰的 SD大鼠BM SCs与胶原膜BME-10X复合物的成骨能力研究
目的：观察人血管内皮生长因子（hVEGF165）基因的骨髓基质细胞（BMSCs）与胶原膜BME‐10X复合的相容性及该复合物移植在体内的成骨情况，为其能否修复牙周骨质缺损提供依据。方法在体外将hVEGF165基因转染的SD大鼠BM SCs种植于胶原膜BM E‐10X复合膜上，使用激光共聚焦扫描显微镜、荧光显微镜、扫描电镜及组织学方法进行观察，并将该复合物植入裸鼠皮下，于4、8周处死裸鼠取材制成组织切片，H‐E染色后观察异位体内成骨和血管生成的情况。结果复合物培养24 h后见目的细胞在胶原膜中贴附、伸展，各层BM E‐10X胶原膜上均有数量不等的细胞附着。转染细胞在胶原膜表面复层生长，并进入内部间隙中。复合物植入裸鼠皮下后，可见新生胶原纤维、类骨质样结构和新生血管的形成。结论 hVEGF165基因转染 BMSCs 在胶原膜BM E‐10X上生长良好，细胞‐胶原复合物在裸鼠体内具有异位成骨及促进新生血管形成能力。
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白桦酸体外对人肝癌细胞、鼻咽癌细胞增殖及组织血管生成的影响
目的 观察白桦酸(BA)对肿瘤细胞增殖及组织血管生成的影响.方法 培养人肝癌细胞株Bel-7402、人鼻咽癌细胞株CNE、人血管内皮细胞株HMEC,分别以不同浓度的BA干预,比较Bel-7402细胞和CNE细胞增殖抑制率、凋亡率,并比较HMEC细胞增殖抑制率、迁移能力、血管形成能力.结果 BA可抑制Bel-7402细胞、CNE细胞增殖,促进其凋亡,且呈剂量依赖性(P均＜0.05);BA可抑制HMEC细胞增殖,减弱迁移能力及血管形成能力,且呈剂量依赖性(P均＜0.05).结论 BA可抑制人肝癌细胞、鼻咽癌细胞增殖及肿瘤组织血管生成.
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丹参通脉方对人血管内皮细胞ERS偶联凋亡及炎症调节作用
目的 研究丹参通脉方对人主动脉血管内皮细胞(human vascular endothelial cell,HVEC)同型半胱氨酸(HCY)诱导模型内质网应激(ERS)偶联凋亡及炎症调节作用的影响,探讨丹参通脉方抗动脉粥样硬化的详细机制.方法 应用HCY制作HVEC凋亡模型,丹参通脉方干预24h后,采取Annexin V-FTTC/PI法检测细胞凋亡,免疫荧光检测ERS通路中BIP蛋白,实时荧光定量PCR法检测ERS通路中BIP、Chop的mRNA表达,同时使用ELISA法检测HVEC培养上清液中炎症因子表达.结果 丹参通脉方抑制HVEC凋亡,与空白对照组及HCY模型组相比有统计学意义(P＜0.05);丹参通脉方同时可抑制BIP、Chop细胞内mRNA的表达,通脉方组与空白组及模型组相比有统计学意义(P＜0.05);丹参通脉方可抑制IL-6,IL-8及MCP-1炎症因子的表达(P＜0.01).结论 丹参通脉方可抑制HCY诱导的HVEC凋亡,减轻HVEC炎症反应,其具体机制可能与抑制ERS有关.
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细胞色素2J3基因转染对大鼠胸主动脉球囊损伤后血管狭窄程度的影响及其机制探讨
血管介入是治疗外周血管阻塞性疾病和心脑血管疾病的常用方法,但术后血管再狭窄(Restenosis,RS)是临床应用中的主要问题.由于术后RS的形成是多因素、多环节参与的复杂过程,因此调动机体内源性抗RS的多种机制,对预防RS,尤其是术后远期RS非常重要.近年来,细胞色素P450/环-二十碳三烯酸(Cytochrome P450/Epoxyeicosatrienoic Acids,CYP450/EETs)对血管的多环节作用引起人们的重视.人血管内皮细胞及平滑肌细胞中存在着CYP450的亚型2J2(CYP2J2),而大鼠血管内皮细胞及平滑肌细胞中存在的主要是2J3 (CYP2J3),它们可催化花生四烯酸(Arachiodonic Acid,AA)生成11,12-环-二十碳三烯酸(11,12-Epoxyeicosatrienoic Acids,11,12-EET)等.
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MicroRNA-155在高糖诱导人血管内皮细胞中的表达及功能研究
目的:研究microRNA-155(miR-155)高糖诱导人血管内皮细胞(HUVECs)中的表达,并探讨miR-155是否通过调节PDCD4(Programmeed cell death 4)的表达参与了高糖诱导的血管内皮细胞凋亡的过程.方法:用不同浓度D-葡萄糖(5.5、11、22及33 mmol/L)孵育HUVECs 48 h,采用荧光定量PCR技术(Quantitative RT-PCR)检测细胞中miR-155、BAX(BCL-2 associated X Protein)、BCL-2 (B cell lymphoma/lewkmia)及CASPASE-3(Apoptosis-related cysteine peptidase)的mRNA表达情况;采用Western blot方法检测BAX、BCL-2及CASPASE-3蛋白在细胞中的表达变化.通过数据库及生物信息学软件预测miR-155的靶基因,并利用双荧光素酶报告基因系统进行验证.进一步通过转染miR-155 mimics和阴性对照miRNA至HUVECs后观察其对靶基因表达及细胞凋亡功能的影响;同时在HUVECs细胞中干扰靶基因的表达并观察其对细胞凋亡功能的影响.结果:随着葡萄糖浓度的增加,HUVECs中miR-155与BCL 2的mRNA表达水平呈浓度依赖性降低(P＜0.05),BCL-2的蛋白表达水平也呈浓度依赖性降低(P＜0.05);而BAX和CASPASK3的mRNA及蛋白表达水平呈浓度依赖性升高(P＜0.05).生物信息学分析发现miR-155的靶基因为PDCD4,经体外双荧光素酶报告基因系统检测,证实PDCD4是miR-155的靶基因.体外细胞实验发现miR-155能降低靶基因PDCD4的mRNA与蛋白的表达水平,并抑制HUVECs细胞的凋亡;PDCD4具有促进HUVECs细胞凋亡的功能.结论:高浓度葡萄糖可降低血管内皮细胞中miR-155的表达水平,并增加凋亡相关基因的表达水平.PDCD4是血管内皮细胞中miR-155的重要靶基因,miR-155通过调节PDCD4表达参与了高糖诱导的血管内皮细胞的凋亡过程.
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组织蛋白酶B对人脐静脉血管内皮细胞增殖及凋亡的影响
目的:探讨组织蛋白酶B(CTSB)对人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)增殖及凋亡的影响.方法:慢病毒转染HUVEC,获得稳定过表达CTSB的HUVEC细胞系HU-CTSB.CCK-8法检测转染前后各组细胞的增殖情况;流式细胞法检测各组细胞的凋亡情况;实时定量PCR法检测各组细胞内凋亡基因Bax;蛋白质印迹法检测各组细胞被剪切的内caspase3表达差异.结果:CCK8法检测发现,与转染前及空病毒对照组HU-MOCK相比,HU-CTSB细胞的生存率明显下降(P＜0.01);流式细胞法检测发现,HU-CTSB细胞的凋亡率明显增高(P＜0.01);实时定量PCR法检测发现,HU-CTSB细胞中Bax mRNA水平增高(P＜0.01);蛋白质印迹法检测发现,HU-CTSB细胞中Bcl蛋白表达下降,且被剪切的caspase3的量多.结论:CTSB可以抑制HUVEC的生长,并通过上调Bax的表达,激活caspase3通路诱导HUVEC发生凋亡.
