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蛋白磷酸酶-2A催化亚基C在小鼠不同器官中的分化表达与定位
目的 探讨蛋白磷酸酶-2A(PP-2A)的催化亚基 (PP-2Ac)在6只小白鼠不同器官中的表达模式与定位.方法 运用RT-PCR、免疫印迹法及免疫荧光技术等实验手段,分别从mRNA水平、蛋白和组织水平进行研究.结果在mRNA水平上,PP-2Ac在大脑中表达高,卵巢中表达次之,而肌肉、肾脏、脾脏、心脏、肝脏、肺及乳腺中表达相对较低,胃中表达低;在蛋白水平上,也是大脑中的表达高,卵巢、脾脏、心脏、肝脏和肺中表达水平相对较高,肌肉、肾脏、乳腺中表达相对较低,胃中表达低.免疫荧光结果显示,PP-2Ac的表达具有一定的组织特异性和细胞特异性.结论 PP-2A是哺乳动物体内重要的蛋白磷酸酶之一.
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激活转录因子4协同核因子相关因子-2调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基的表达对支气管哮喘豚鼠的影响
支气管哮喘(简称哮喘)是一种气道慢性炎症性疾病.氧化应激在诱导气道炎症及其发展中起关键作用.核因子相关因子-2( NF-E2-related factor 2,Nrf2)是一种对氧化还原敏感的转录因子,调节肺部几乎所有相关抗氧化基因,如γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(γ-glutamylcysteine synthetase catalytic subunit,γ-GCSc),发挥重要的抗氧化作用[1].激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)属于具有碱性亮氨酸拉链结构(basic leucine zipper,bZIP)的cAMP反应元件结合蛋白(CAMP-responsive element binding protein,CREB)家族中的转录因子.氧化应激时,ATF4能与Nrf2结合形成异二聚体,调控Nrf2及其靶基因γ-GCSc表达[2].本研究中通过观察哮喘急性发作期豚鼠肺组织中ATF4、Nrf2、γ-GCSc的表达变化,探讨其在哮喘发病及防治中的作用.
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端粒酶的定量检测与头颈部肿瘤的诊断
端粒酶是一种特殊的 RNA 依赖性 DNA 聚合酶,广泛存在于癌细胞、生殖细胞、胚系细胞(germline cell)、造血干细胞、活性淋巴细胞、表皮基底细胞及肠滤泡细胞等中,也在绝大多数头颈部恶性肿瘤中满意表达.人类端粒酶由 RNA(hTR)和蛋白质两个亚单位组成核糖核蛋白体,而蛋白质又分为结合部分 TP1和催化部分 hTERT 两部分,其中 TP1是端粒酶相关蛋白1,hTERT 是催化亚基.由于大部分正常人体细胞中没有端粒酶活性,而肿瘤细胞却有端粒酶活性特异性表达,所以,端粒酶作为肿瘤的分子生物学标记物已成为人们的公识.
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骨胳肌蛋白磷酸酶1调节亚基基因3′非翻译区多态性与2型糖尿病相关性研究
蛋白质磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)在胰岛素作用下可通过脱磷酸作用激活糖原合成酶[1],促进葡萄糖摄取和糖原合成[2].PP1由一个催化亚基(PP1 catalytic subunit,PP1C)和糖原目标亚基(又称调节亚基)(glycogen-associated regulatory subunit of type 1,PP1G)组成,调节亚基正性调节催化亚基的去磷酸化,其编码基因被称作PPP1R3基因[3].在胰岛素抵抗状态下,胰岛素对PP1的激活作用减弱,从而降低糖原合成酶的活性[4].
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岩黄连脱氢卡维丁体外抑制Tca8113增殖及对端粒酶活性影响的研究
目的:研究中草药岩黄连脱氢卡维丁(Tetradehydroscoulerine,YHL-1)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用,及其对端粒酶活性和端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,探讨其抗癌机制.方法:采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测不同浓度的YHL-1对Tca8113细胞增殖的影响,同时以TRAP-ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性改变情况,并用Western blotting法半定量检测端粒酶hTERT的表达.结果:YHL-1能明显抑制Tca8113细胞增殖,且随时间延长和药物浓度的增高,抑制作用增强.72h时,0.200、0.100、0.050、0.025 g/L YHL-1组细胞增殖抑制率分别为(64.1±1.5)%、(47.3±3.3)%、(35.6±5.O)%、(31.8±5.87)%.72h时,0.100、0.050g/L组端粒酶活性和hTERT蛋白含量均低于空白对照组(P<0.05).结论:岩黄连脱氢卡维丁可以明显抑制Tca8113细胞的增殖,并显著降低其端粒酶活性及hTERT的表达,这可能是其抗舌癌的机制之一.
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胃癌组织端粒酶逆转录酶的表达及意义
端粒酶能合成端粒片段、维持端粒长度,在多种肿瘤中有异常高的表达[1].端粒酶逆转录酶(telomerase catalytic subunit,human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的催化亚基,与端粒酶的活性密切相关.本研究应用hTERT多克隆抗体通过免疫组化法检测hTERT在胃癌组织、正常胃粘膜组织的蛋白表达情况,探讨hTERT作为标志物在胃癌诊断及预后判断中的价值.
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蓝莓对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基蛋白表达的影响
目的:研究非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC)表达的变化及蓝莓对其表达的影响.方法:40只健康SD大鼠随机分为4组:正常组、蓝莓组、异甘草酸镁组、模型组,每组10只.正常组大鼠饲喂正常饲料,其余各组大鼠饲喂高脂饲料.蓝莓组大鼠给予蓝莓原浆(15ml·kg-1·d-1)灌胃;异甘草酸镁组大鼠给予异甘草酸镁溶液(15ml·kg-1·d-1)灌胃;其余组大鼠给予等量生理盐水灌胃.12周后处死大鼠,HE染色观察各组大鼠肝脏病理变化;全自动生化分析仪检测大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、含量;酶联免疫法检测肝组织中还原性谷胱甘肽(GSH)、中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量;免疫印迹法检测大鼠肝组织中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)催化亚基(GCLC)的蛋白表达.结果:异甘草酸镁组、蓝莓组大鼠肝损害较模型组明显减轻,血清ALT、AST、TC、TG含量明显降低(P<0.05),肝组织中MDA含量明显降低(P<0.05),GSH含量、SOD活性明显增加(P<0.05);模型组大鼠GCLC蛋白表达较正常组增加,但无明显差异(P>0.05),蓝莓组和异甘草酸镁组则增加(P<0.05).结论:蓝莓对NASH大鼠肝组织具有保护作用,机制可能与上调GCLC蛋白表达有关.
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槲皮素对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基的影响
肌醇磷脂3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3-K)是多磷脂酰肌醇通路中的一个重要的效应器和涉及信号转导和细胞转化的关键酶.PtdIns(3)P、PtdIns(3,4)P和PtdIns(3,4,5)P是PI3-K的酶促反应产物,它们在细胞内起到第二信使的作用,调节一些蛋白激酶的活性如PAC、PKB和有些PKC同工酶等,PI3-K通过这些信号传导途径参与多种生物学事件,如囊泡运输、细胞骨架重组、肿瘤发生、细胞存活等.近年来的研究表明,人类的某些疾病,如肿瘤、Ⅱ型糖尿病等与PI3-K有密切的联系,因此,有学者提出,PI3-K是一个药理靶点,其特异的抑制剂具有临床治疗价值.
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Tyrphostin AG555对重组人磷脂酰肌醇3-激酶pll0 β催化亚基的影响
磷脂酰肌醇3-激酶(P13-K)是多磷脂酰肌醇通路中一个重要的效应器和涉及信号转导、细胞转化的关键酶.P13-K根据结构的相似性和底物的特殊性可分为3种类型,其中第一种类型的P13-K是由85 kD(p85 α和p85 β)调节亚基和110 kD(p110 α、p110 β和p110 δ)催化亚基组成的高度同源性的异二聚体,而且p110催化亚基具有激酶的活性,可以磷酸化质膜中的磷脂酰肌醇.P13-K能使磷脂酰肌醇的第三位羟基磷酸化,生成磷脂酰肌醇-3-磷酸;P13-K主要磷酸化磷脂酰肌醇-4-磷酸和磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸,生成磷脂酰肌醇-3,4-二磷酸[(PtdIns(3,4)P2]和磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸[PtdIns(3,4,5)P3].PtdIns(3,4)P2和PtdIns(3,4,5)P3在细胞内起到第二信使的作用,它们被认为在细胞分裂中起重要作用.近的研究表明P13-K是一个重要的药物靶点,特异的P13-K抑制剂可望成为新的抗肿瘤药物.
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人工半合成槲皮素水溶性衍生物对重组人磷脂酰肌醇3-激酶p110 β催化亚基的影响
黄酮类化合物是广泛存在于植物界的多酚类化合物,具有多种药理学作用,如抑制肿瘤细胞生长、抗血小板聚集等.近来的研究表明,黄酮类化合物是几种与细胞内信号转导、细胞转化有关激酶的抑制剂.黄酮类化合物具有的多种生物学作用,是由于它们抑制了这些关键酶从而能够选择性地阻断细胞内信号转导通路.因此,黄酮类化合物被认为是治疗肿瘤的潜在化合物.但是,多数黄酮类化合物不溶于水,这极大地限制了其生物利用度和给药途径.理论上,在力求保持黄酮类化合物活性结构的情况下,将其改造成水溶性衍生物可望开发出一种抗肿瘤或抗血小板聚集的药物.基于这一设想,我们用槲皮素(3,5,7,3',4'--五羟基黄酮)作为母体分子,采用化学合成法合成出槲皮素水溶性衍生物---槲皮素-7-硫酸酯钠盐、槲皮素-7,4'-二硫酸酯二钠盐和槲皮素磷酸酯(B).我们研究表明槲皮素水溶性衍生物对HL-60细胞生长和血小板聚集有抑制作用,但其作用的分子机制仍未清楚.本文研究了槲皮素水溶性衍生物对重组人磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)p110 β催化亚基的影响.
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重组人蛋白激酶CK2α和β亚基的原核表达、纯化及鉴定
蛋白激酶CK2是一种信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,是由两个催化亚基(α或α′)和两个调节亚基(β)组成的四聚体.目前该酶有近200种蛋白底物,底物涉及到细胞功能的许多方面,但其确切功能仍不清楚.由于该酶在细胞中的含量较少,提取纯化得到研究所需的量较困难.因此克隆并表达重组蛋白激酶CK 2对于深入研究该酶具有十分重要的意义.
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人 ARD1在肿瘤发生发展中的作用研究进展
蛋白质的乙酰化修饰是由一类乙酰基转移酶完成的,已发现的乙酰基转移酶家族成员10多个,它们各自的作用靶分子有所不同,其生理意义也有所不同。 ARD1( arrest defec-tive 1, ARD1)基因是 N-乙酰基转移酶( N -acetyltran -sferase,NAT)家族成员之一[1],近年来逐渐成为研究的热点。 ARD1基因初在酵母细胞中发现它与NAT1基因结合,生成NatA复合体,催化细胞内多种蛋白质乙酰化。其中NAT1是乙酰化的催化亚基,ARD1是调节亚基[2-3]。但近的报道认为ARD1蛋白单独也可能具有催化蛋白的乙酰化反应的活性[4]。人 ARD1( human arrest defective 1, hARD1)在人类多种肿瘤疾病研究中,从基因至蛋白水平的研究均有所涉及,但现有实验结果提示,hARD1活性调节有着多样性,其对肿瘤发生发展的作用尚不清楚,有待深入研究。
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细胞周期及其调控研究进展
细胞周期是指正常连续分裂的细胞从前一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂完成所经历的连续动态过程,也是多阶段、多因子参与的精确而有序的调控过程,可分为5期:即G 0期(Gap 0,静息期)、G 1期(Gap 1,DNA合成前期)、S期(DNA synthesis phase,DNA合成期)、G 2期(DNA合成后期)、M期(Mitosis,有丝分裂期),有两个主要限制点,即G 1/S 限制点(控制细胞从G 1期进入S期,能防止受损的碱基复制,修复染色体中的突变)和G 2/M限制点(细胞一分为二的控制点,能使细胞在进入分裂期之前修复已复制好的DNA上出现的损伤).通过限制点后,即使刺激信号被去除细胞仍然会开始DNA复制.在哺乳动物细胞周期的运行中,需有许多酶的参与,但是其中核心的酶是由一组作为催化亚基的周期蛋白依赖激酶(CDKs)和一组作为调节亚基的周期蛋白(Cyclins)组成的杂二聚复合体,是一类非常重要的丝/苏氨酸蛋白酶.