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江苏省现阶段麻疹流行株H1基因型
目的监测现阶段在江苏省流行的麻疹野病毒及其基因型别.方法 2003年5月分别在医院门诊疑似麻疹病人和疑似麻疹爆发点的病人中采集了咽拭子,接种EB病毒转化的绒猴淋巴母细胞(B95a细胞),获得3株麻疹野病毒,同时进行了血球凝集(HA)试验、血球吸附试验.结果该3株病毒均无HA和血球吸附活性,逆转录-聚合酶链反应和其产物的基因序列分析提示,这3株病毒属于麻疹野病毒第8基因组H1基因型.结论此次为江苏省首次分离到麻疹野病毒,并证实在江苏省流行的麻疹野病毒基因型与国内流行优势基因型相同.
关键词: 麻疹野病毒 血球凝集试验 血球吸附试验 逆转录-聚合酶链反应 基因组(型) -
梅毒螺旋体特异性表面抗原的克隆表达与血清鉴定
梅毒病原体为苍白密螺旋体(Tp),俗称梅毒螺旋体.对Tp的诊断目前主要依据病史与临床检查,辅助以一些血清学方法,如血球凝集试验(TPHA)和荧光抗体吸收试验(FTA-ABS)[1].蛋白分子量17 000与47 000是Tp特异性表面抗原[2,3],患者感染Tp后能够产生相应的特异性抗体.我们利用基因工程的方法,通过大肠埃希菌表达Tp的17 000与47 000特异性抗原,以建立一种Tp血清学诊断方法.
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评价螺旋体乳胶快速反应实验检测梅毒血清的特异性和敏感性
梅毒的诊断依靠临床及实验室检查.目前实验室常规进行快速血浆反应素环状卡片试验(RPR),是一种筛查试验;用死的或活的梅毒螺旋体来检测抗梅毒螺旋体抗体,包括荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA),这两者是确诊试验.
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大鼠细小病毒KRV株培养方法的建立
目的 建立用大鼠胶质瘤细胞系( Rat glial cell line C6)替代大鼠原代胚细胞(Primary rat embryo cells,RE)来培养大鼠细小病毒(Kilham Rat Virus,KRV)的方法.方法 将500 TCID50 KRV培养物接种到75T-C6细胞培养瓶中(细胞接种量为2×105/mL),培养过夜,待细胞病变CPE达++~+++时,分别用免疫荧光(FITC)鉴定所培养病毒的特异抗原,用血球凝集试验(HA)测定培养物上清的效价,用DNA测序鉴定所培养的病毒,后用96孔板培养法测定KRV的TCID50.结果 KRV在接种到C6细胞的第4~5天,细胞发生明显的病变,CPE可达++++,FITC鉴定呈KRV抗原阳性,病毒的培养上清中HA效价为1:5 120,测序结果表明,该病毒序列与NCBI中KRV序列同源性达98%,确定为KRV.收获的KRV的TCID50为104.6/0.1 mL.结论 通过对C6细胞系培养KRV方法的标准化和对所培养病毒的一系列鉴定表明,用大鼠胶质瘤细胞系可以替代大鼠原代胚细胞系进行大鼠细小病毒的培养.
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哈尔滨出入境人员128例梅毒感染者分析
本文分析了2001~2003年哈尔滨口岸在出入境人员中检出并收治的128例梅毒感染者.结果报告如下.对象与方法(1)对象:128例均在出境人员出国常规健康体检中检出.(2)方法:实验室检查采用快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA).
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伤寒LPS-PHA试验的实验体会
伤寒LPS-PHA试验(脂多糖-红血球凝集试验)是一种简便、易行,适合基层推广使用的血清学诊断方法.1991年以来,已在全国多家医疗单位、卫生防疫站推广使用,证明该方法的敏感性和特异性均显著高于Widal's反应.本文概要介绍我们在生产、使用过程中所积累的部分经验和实际问题,加以分析、讨论,为今后进一步推广使用提供参考.
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四种方法检测鼠疫菌的实验研究
在鼠疫自然疫源地监测工作中,通常是以细菌学检验和血清学检验并用,血清学检验方法虽然发展较快,灵敏度也较高,如IHA[1](间接红血球凝集试验),RIHA[2](反向血凝试验),ELISA[3](酶联免疫吸附试验),RIP[4](放射免疫沉淀试验).又如核酸探针[5]和PCR[6](聚合酶链反应)及鼠疫细菌学的分子生物学诊断技术,这些方法虽然敏感、特异、又具有先进性,但这些方法只能做追溯性诊断或提供间接的诊断依据.而鼠疫自然疫源地的终判定及分型,必需是分离出鼠疫菌才是可靠的、直接的判定依据,因此,选择使用方法简便、检菌率高的培养基是非常必要的.笔者用乳糖肉汤增菌[7,8]、普通营养琼脂平板培养、小白鼠接种试验、涂片显微镜检验四种方法进行了鼠疫菌的检测试验研究,结果如下.
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1282例女性性病流行病学分析
近年来,性传播疾病发病人数不断增加,现就在我院检测诊断的1 282例女性性病患者情况进行分析.1 材料与方法资料来自湖州市中心医院1994年1月1至2003年12月30日妇科门诊日志及传染病报告卡,报告病种为<传染病防治法>和<性病防治管理办法>规定报告病种.诊断标准按卫生部防疫司<性病防治手册>(1994年版).实验室诊断;尖锐湿疣(CA):根据临床表现和病理诊断确诊;淋病(NG):取宫颈分泌物涂片革兰染色镜检和培养;梅毒(TP)初筛用快速血浆反应素环状卡片试验(RPR),确证实验用梅毒螺旋体血球凝集试验(TPIIA);沙眼衣原体(CU)和解脲支原体(Uu)取尿道(宫颈)分泌物,采用荧光克隆抗体试验;生殖器疱疹(GH)主要根据临床表现诊断;艾滋病(AIDS)使用HIV+2型抗体酶联免疫检测试剂盒进行初筛,初筛阳性者用蛋白印迹法进行确诊.所用资料建立数据库,利用SPSS软件进行统计分析.
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梅毒螺旋体抗原血清试验方法的比较
梅毒(Syphilis)是由苍白螺旋体(Treponema pallidum,TP)所引起的一种性传播疾病,近年来在我国有逐年上升趋势.选择好的检测方法,可直接影响到梅毒的治疗和预防.目前我国梅毒螺旋体抗原血清试验方法主要有梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒微粒凝集试验(TP.PA)、荧光螺旋体吸收试验(FTA-Abs)、19S-IgM-TPHA和近几年才发展起来的梅毒酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒印迹试验(WB)、TP-DNA测定试验(PCR)及梅毒胶体金法(SYP)等试验方法.本文应用其中三种梅毒螺旋体抗原血清方法,对63例梅毒抗体阳性血清进行检测,并同非梅毒螺旋体抗原血清试验-甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)方法作了敏感度比较.
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ELISA法检测老年人梅毒抗体易产生假阳性分析
梅毒是性传播性疾病之一.临床上梅毒的诊断主要是根据临床症状和血清学检查,而在血清学检查中,对特异性抗体检测常用的方法是梅毒螺旋体被动颗粒凝集试验TP-PA(或梅毒螺旋体血球凝集试验TPHA)和梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验TP-ELISA.TPPA(或TPHA)已被美国疾病预防控制中心(CDC)定为确诊方法,而TP-ELISA因其对IgG和IgM都具有很好的检测能力[1,2],且灵敏度高,价格低廉,操作方便,结果客观,国内因此广泛使用.然很多文章对TP-ELISA的特异性却报道不一致[2~5],另外有人报道了住院老年病人阳性率高的现象[6],笔者在工作中也注意到有很多临床无症状,主诉无发病史和疾病接触史的老年人TPELISA阳性,为此笔者做一番深入调查,现报道如下.
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晚期心血管梅毒一例
患者男, 50岁,已婚,以反复胸闷气促半年,加重 8 d于 1999年 11月 1日入院。患者半年来反复出现胸闷、气促,快步行走尤为明显,登楼困难,有时夜间端坐,无下肢浮肿,无胸痛、晕厥。曾在外院按心衰给予地高辛、利尿剂、扩血管药等治疗好转。 8 d前胸闷气促加重,呈持续性端坐呼吸、咳嗽,无胸痛、发热。患者无肝炎、伤寒、结核史,无高血压、糖尿病史,无药物过敏史。 1985~ 1992年在南方沿海地区经商,有非婚性交史,曾有龟头溃疡史,后自愈,无躯干四肢皮疹史。患者已婚,妻儿均健康。 体检:体温 36.8 ℃,脉搏 110次,呼吸 26次,血压 16/8 kPa(120/60 mmHg)。神清,唇紫绀,端坐位。全身皮肤粘膜未见皮疹,全身浅表淋巴结未扪及,眼鼻未见损害。颈静脉无怒张,两肺中下野中等量湿音,心界向左下扩大,无震颤。心率 110次,律齐, P2 >A2,主动脉瓣区闻及Ⅱ级收缩期杂音和哈气样舒张期杂音,以胸骨右缘第 2肋间为明显,并向心尖区传导。心尖区Ⅱ级舒张期杂音。腹软,肝肋下 3 cm,质中,无压痛。无移动性浊音。周围血管征:毛细血管搏动明显,股动脉枪击音(+),并可闻及 Duroziez双重杂音(轻压股动脉可听到收缩期及舒张期皆出现的杂音)。四肢、关节无压痛、无结节,神经系统检查未见异常。 实验室检查:血尿粪、肝肾功能均正常。血快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)1∶ 8,梅毒螺旋体血球凝集试验(+)、 HIV抗体初筛试验(-),脑脊液常规、生化未见异常。心电图:窦性心动过速, ST段轻度压低,电轴中度左偏。 X线胸片:两肺野纹理增粗,心影向左下扩大; X线长骨、骨盆未见骨质病变,脑 CT检查正常。心脏彩色多普勒示:左室扩大,主动脉瓣钙化挛缩,主动脉瓣重度返流。诊断:梅毒性心血管病,主动脉瓣关闭不全,心功能Ⅳ级,心衰Ⅲ度。 治疗经过:经强心、利尿、扩血管 [地高辛、米力农、速尿、螺内酯 (安替舒通 )、贝那普利 (洛汀新 )、硝酸甘油 ]等抗心衰治疗后,心衰控制,即予普鲁卡因青霉素 G 80万 U肌内注射,日 1次, 20 d,共 2个疗程,中间间隔 2周,驱梅治疗前一天始服泼尼松 10 mg,每日 3次,连服 5 d,未发生 Jarisch- Herxheimer反应。 3个月后 RPR 1∶ 4,其间心衰曾发作 2次,目前尚在随访中。
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口唇单纯疱疹合并硬下疳一例
患者,男, 25岁。因上唇部皮疹 1个月而就诊。患者于 1个月前上唇中部稍偏右起水疱,轻度痒痛,约 1周左右,水疱干枯结痂,但基底仍红并逐渐增大、变硬,无不适。剥去痂皮,基底少许糜烂渗液,反复不愈。近半年来,上述部位及附近唇部经常起水疱,痒痛,一般均于 7~ 10 d左右自愈而无需服药。共发生 4次左右,每次间隔约 1个月余。患者有非婚性接触史及口交史,既往无外阴溃烂史及可疑梅毒皮疹史。体检:上唇中部稍偏右见一约 1 cm稍隆起的结节,上覆黄色痂,触之硬而无痛;右颌下可触及 2个分别约鹌鹑蛋和乒乓球大的淋巴结,质硬界清,无触痛,尚活动,表面皮肤正常;外阴及全身其他部位无皮疹。实验室检查:血常规正常,快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) 检测 1∶ 8 阳性,梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA )阳性。诊断:①单纯疱疹,②一期梅毒。配偶体检正常, RPR阴性。两人均给予苄星青霉素 240万 U,分两侧臀部肌内注射, 1周 1次,共 3周。治疗 2周后皮疹变平变软,仅见红褐色斑疹,但淋巴结缩小不明显, 3个月后复查,唇部恢复正常,颌下淋巴结仍有鹌鹑蛋大, RPR阴性。 1年后复查,临床体检及 RPR检测均正常。 讨论梅毒临床表现多种多样,症状时隐时显,并可与多种性病伴发,易于误诊或漏诊。黎兆军等 [1]检测了 95例梅毒患者Ⅱ型单纯疱疹病毒抗体, 26.3%阳性,但为隐性感染,未见典型的梅毒与单纯疱疹同时伴发的病例报道,尤其是位于口唇部。此患者有多次单纯疱疹发作自愈史,在就诊前一次发作未愈基础上发生硬下疳和局部淋巴结肿大, RPR和 TPHA均阳性而确诊,苄星青霉素治疗有效,为典型的单纯疱疹与梅毒感染并发病例。因而临床上应提高警惕,可疑病例应进行筛查,减少误诊和漏诊。
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未治梅毒患者脑脊液梅毒抗体及外周血淋巴细胞亚群检测
近年来,梅毒的发病率呈逐年上升趋势[1],为了解无症状神经梅毒的发生情况,及其与梅毒患者细胞免疫之间的关系,我们应用快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、性病研究实验室试验(VDRL)、梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)等方法对36例未治且无神经损害表现和5例未治神经梅毒的梅毒患者的脑脊液进行梅毒抗体检测;同时应用流式细胞仪检测这些患者的外周血T细胞亚群及天然杀伤(NK)淋巴细胞.
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口服青霉素V钾片脱敏治疗二期梅毒一例
患者女,29岁.掌跖部出现紫红色斑2周,无自觉症状.来本院就诊.患者有青霉素过敏史,否认有非婚性接触史,其丈夫半年前被诊断为二期梅毒,已正规治疗.体检:一般情况好,各系统检查无异常.皮肤科检查:躯干、四肢散在绿豆至黄豆大小、边界清楚的淡红斑,掌跖部见多个散在暗紫红色斑块,表面少量脱屑.皮肤浅表淋巴结未触及.血清学检查:快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)1∶8,梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)阳性.诊断:二期梅毒.
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国产苄星青霉素治疗早期梅毒的疗效观察
我们于 1997年 1月至 1999年 12月,用国产苄星青霉素对 30例早期梅毒进行了为期 2年的临床疗效观察,结果满意,现报道如下。 一、临床资料 1.病例入选标准:按卫生部 1991年公布的《性病诊断标准与治疗方案》(暂行)进行诊断,入选病例必须符合以下要求:①首诊时,快速血浆反应素环状卡片试验( RPR)阳性,梅毒螺旋体血球凝集试验( TPHA)阳性或暗视野查见梅毒螺旋体;首诊时 RPR阴性者, TPHA必须为阳性或暗视野查见梅毒螺旋体。②病期短于 2年的早期梅毒。 二、治疗药物及观察方法 苄星青霉素 (由江西江中集团东风制药厂提供 )每瓶 120万 U。符合入选对象的早期梅毒患者确诊后分两侧臀部肌内注射苄星青霉素 240万 U,以后每周 1次,共 3次。 观察指标与随访:首诊时按调查表记录患者的一般情况、临床表现,并记录实验室检测结果( RPR、 TPHA、暗视野检查,其中 RPR要求测定滴度)、 Jarisch- Herxheimer反应 (注明症状、发现时间、程度、消退时间)、皮疹消退情况等。要求患者定期复诊,复诊时间为治疗结束后第 1个月、第 4个月、第 7个月、 1年半、第 2年,共复查 5次,每次复查时均要求检测 RPR滴度。 疗效标准:临床治愈:指临床症状和体征均消失。血清治愈和血清固定: RPR由阳性转为阴性;或者 RPR持续阳性,但疗后 2年 RPR在低滴度范围内 (≤ 1∶ 8)无变化,此时为血清固定,不影响判愈。血清复发或无效:经治疗后 (1年内 )临床症状再出现或 RPR滴度升高 4倍,并除外再感染。统计分析:配对 t检验
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梅毒螺旋体抗体 IgG酶联免疫吸附试验的建立
梅毒螺旋体抗原试验,如荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验( FTA- ABS)、梅毒螺旋体血球凝集试验( TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验( TPPA)等的敏感性和特异性高,但试剂昂贵,操作较复杂,所需时间较长,现不用于筛查而用于确证。为探讨既可用于筛查又可用于确证的梅毒螺旋体抗体检测方法,我们用基因重组技术表达的梅毒螺旋体蛋白( Treponema pallidum protein,Tp) 17和 Tp44.5为抗原,以辣根过氧化物酶标记的鼠抗人 IgG单克隆抗体为酶结合物,建立了梅毒螺旋体抗体 IgG的间接 ELISA法( ELISA- Tp- IgG),经临床观察和献血员筛查,效果较好,现报道如下。
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婚检179例梅毒分析
梅毒在我国广泛流行,目前呈明显上升的趋势.现将1999~2000年在我院婚检门诊检查的梅毒病例进行分析.材料与方法1 资料来源本资料来自1999年1月1日~2000年12月31日,我院婚前医学检查门诊总计9722人,其中检出梅毒病例179例.2 检测方法采用梅毒血清试验甲苯胺红不加热血清试验(TRUST),为筛查试验,出现阳性,然后用梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)+TRUST的滴度检测为证实试验.报告单必须有2名以上的检验医生签名,试剂由上海荣盛生物技术有限公司和英国欧米茄公司生产.
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TRUST法和ELISA法检测梅毒结果比较
梅毒是由梅毒螺旋体(TP)感染引起的一种性传播疾病,也是血液传播性疾病之一.目前检测梅毒螺旋体的试验方法主要有:快速血浆反应素试验(RPR)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)、梅毒螺旋体胶乳颗粒凝集试验(TPPA)、梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA).
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夫妻同患梅毒2例报道
临床资料例1,女,22岁,无业.2002年1月婚检时,夫妻双方在市妇幼保健所查快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)均阴性.2002年9月妊娠3个月到市妇保所例行孕期健康体检时查出RPR1:32阳性,梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)阳性,体检皮肤、黏膜、生殖器及肛周均正常.追问病史,否认有非婚性接触史.
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梅毒螺旋体血球凝集试验结果分析
近十几年,梅毒发病率迅速上升,据中国疾病预防控制中心统计:1993年每10万人的全部梅毒发病数不足0.2例,而2005年每10万人中仅一期和二期梅毒发病数就达到了5.7例.