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MDA-7/IL-24蛋白的功能研究进展
mda-7/IL-24基因初被命名为黑色素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7),是1995年Jiang等[1]利用减数杂交技术从β干扰素和蛋白激酶C活化剂mezerin诱导的人黑色素瘤细胞HO-1中鉴定并克隆出来的.基于结构、序列同源性、基因定位等方面的考虑,MDA-7蛋白被归为IL-10家族,并被命名为MDA-7/IL-24蛋白.mda-7/IL-24基因在进化过程中比较保守,在酵母、猴子、牛、狗和猫的基因组DNA中都发现了mda-7/IL-24基因的同源基因[2].人mda-7/IL-24基因是单拷贝基因,定位于1号染色体(1q32.2-q41),由7个外显子和6个内含子组成,其mRNA长约2 kb,编码由206个氨基酸组成、相对分子质量约为23 800的蛋白质.
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赤芍总苷抑制人黑色素瘤A375细胞株增殖作用的研究
目的 观察赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及其作用机制.方法 黑色素瘤A375细胞,分别加入12.5、25、50、100、200 mg/L TPG,对照组加等量0.9%氯化钠注射液,孵育48 h.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定细胞生长抑制率,用RT-PCR、Western blot法分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)、P21、P27、P53 mRNA及其蛋白的表达水平.结果 不同浓度(12.5、25、50、100、200 mg/L)TPG刺激后,对黑色素瘤细胞均具有明显的增殖抑制作用.100 mg/L TPG作用黑色素瘤细胞48 h,PCNA mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著下降,而P21、P27、P53的mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著上升,差异有统计学意义(P<0.01).结论 TPG抑制黑色素瘤A375细胞增殖,与下调PCNA表达及上调P21、P27、P53表达有关.
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CD146在肾脏疾病中的研究进展
CD146是近年来发现的一种具有跨膜结构的细胞黏附分子,属于免疫球蛋白超家族成员[1].CD146初是用一株特异性识别人黑色素瘤细胞的单克隆抗体从人黑色素瘤cDNA文库筛选克隆到的[2],后又通过对纯化的黑素瘤相关抗原A32和内皮相关抗原S-Endo-1进行氨基酸序列分析亦确定为同一分子.CD146作为钙离子非依赖性细胞黏附分子,它能促进肿瘤生长、血行转移,是肿瘤进展和转移的标志物[3~5].
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肿瘤特异性基因对黑色素瘤细胞凋亡诱导作用
近年来的研究发现,鸡贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)VP3基因编码的一种蛋白质,可以通过独立于p53作用途径、不被Bcl-2抑制的方式,诱导人肿瘤细胞或转化细胞发生凋亡,而对人正常细胞没有毒性作用,故称之为肿瘤特异性凋亡因子(Apoptin).其独特的诱导凋亡作用,有望成为一种新的有效的抗肿瘤药物[1,2].我们在克隆和构建VP3基因真核表达载体的条件下,用该载体瞬间转染人黑色素瘤细胞A375,发现其对人黑色素瘤细胞A375具有明显的凋亡诱导作用.现将结果报告如下.
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蔷薇红景天的化学成分及对紫外线诱导的A375-S2细胞死亡的抑制作用
目的 对蔷薇红景天(Rhodiola rosea L.)干燥根茎的体积分数为30%乙醇提取物化学成分进行研究,并探讨其中部分单体化合物对紫外线诱导的A375-S2细胞死亡的抑制作用.方法 利用硅胶柱色谱等多种方法进行分离纯化,根据理化性质和NMR、MS等波谱数据进行结构鉴定;采用MTT法检测细胞的存活率来评价化合物对紫外线照射诱导的细胞死亡的保护作用.结果 分离得到7个化合物,经鉴定分别为:迷迭香酸(rosmarinci acid,1)、山柰酚(kaempferol,2)、山柰酚-7-O-鼠李糖苷(kaempferol 7-O-rhamnopyranoside,3)、草质素-7-O-α-L-鼠李糖苷(herbacetin 7-O-α-L-rhamnopyranoside,4)、草质素-7-O-(3″-O-β-D-葡萄糖)-α-L-鼠李糖苷(herbacetin 7-O-6-(3″O-β-D-glueopyranosyl)-α-L-rhamnopyranoside,5)、槲皮素(quercetin,6)和芦丁(rutin,7).结论 化合物1为首次从红景天属植物中分离得到,化合物7为首次从该种植物中分离得到;化合物5对紫外线诱导的A375-S2细胞死亡具有明显的抑制作用,且对该细胞没有显示出细胞毒活性.
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异甘草素诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡研究
目的:研究异甘草素诱导人黑色素瘤( A375)细胞凋亡及其初步机制。方法采用硫氰酸盐B ( SRB)法测定异甘草素对 A375细胞生长的抑制效应, AO/EB 和 Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡形态,流式细胞技术检测A375细胞凋亡率;荧光染料二乙酸-2’,7’-二氯荧光素(DCFH-DA)测定A375细胞内活性氧的变化。5,5′,6,6′-四氯-1,1′,3,3′-四乙基苯并咪唑羰花青碘化物(JC-1)测定线粒体膜电势的变化,利用试剂盒检测异甘草素处理后的A375细胞内ATP和培养液中的乳酸、葡萄糖含量。结果异甘草素能抑制A375细胞的增殖,并呈浓度依赖性;在荧光显微镜下发现,异甘草素处理后的A375细胞出现明显的凋亡形态;细胞凋亡率随异甘草素浓度的增加而升高;异甘草素处理后的细胞内活性氧有明显上升趋势,细胞线粒体膜电位明显下降;异甘草素作用后胞内ATP含量下降( P<0.05或P<0.01),培养液中的乳酸含量下降,葡萄糖含量上升(P <0.05或P<0.01)。结论异甘草素能够抑制A375细胞的恶性增殖,终诱导细胞凋亡。推测异甘草素通过活性氧升高,引起线粒体膜电势下降,从而影响A375细胞的糖酵解途径而导致细胞凋亡。
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RNA干扰沉默Ras同源类似物C对恶性黑色素瘤细胞侵袭转移的影响
目的 观察靶向Ras同源类似物C(RhoC)的短发卡RNA(shRNA)质粒载体构建及RhoC基因沉默对人恶性黑色素瘤A375细胞侵袭、转移能力的影响.方法 构建3条质粒载体pGPU6/Neo-RhoC shRNA1、shRNA2和shRNA3,利用脂质体LlpofectamlneTM 2000转染A375细胞,Western blot检测转染后RhoC蛋白表达,并将佳靶向序列质粒转染A375细胞,应用细胞黏附实验和Transwell小室细胞侵袭实验分别检测细胞黏附能力及侵袭能力.结果 构建的3条质粒载体pGPU6/Neo-RhoC shRNA1、shRNA2和shRNA3转染A375细胞后,RhoC蛋白表达水平分别为0.284 ±0.041、0.136±0.022和0.213 ±0.032,pGPU6/Neo-RhoC shRNA2为佳靶向序列质粒;将pGPU6/Neo-RhoC shRNA2转染A375细胞,细胞对层粘连蛋白和纤维粘连蛋白的黏附能力、细胞穿膜细胞分别为0.473±0.085、0.324±0.023和50.000±14.526,较空白对照组和阴性对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 利用RNAi技术成功构建pGPU6/Neo-RhoC shRNA质粒载体可显著下调体外培养的A375细胞RhoC蛋白的表达,且RhoC基因沉默后细胞的侵袭转移能力明显受到抑制.
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纳秒脉冲电场联合抗肿瘤药物对人黑色素瘤A375细胞活力的影响
纳秒脉冲电场(Nanosecond Pulsed Electric Fields, nsPEFs)是一种有望应用于临床肿瘤治疗的新兴方法.前期研究表明,nsPEFs可抑制人黑色素瘤细胞A375的细胞活性和迁移,但与抗肿瘤药物联用是否有协同作用有待研究.本文采用CCK-8法考察nsPEFs与抗肿瘤药物达卡巴嗪和顺铂联合作用对A375细胞活力的影响.结果发现,nsPEFs联合达卡巴嗪协同作用不显著,但与顺铂联合作用则具有强协同作用,且与nsPEFs的输入能量正相关.该研究结果可为nsPEFs联合抗肿瘤药物更好应用于临床提供实验依据.
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全反式维A酸、阿维A和他扎罗汀对人黑色素瘤细胞A375凋亡和Bax/Bcl-2蛋白表达的影响及意义
目的探讨全反式维A酸(ATRA)、阿维A及他扎罗汀对人黑色素瘤细胞A375凋亡及Bax/Bcl-2蛋白表达的影响及其意义.方法采用体外培养和流式细胞仪检测细胞凋亡(Annexin V-PI法),SABC免疫细胞化学方法检测细胞Bax/Bc1-2蛋白表达情况.结果浓度均为10-5mol/L的ATRA、阿维A及他扎罗汀能不同程度地诱导了人黑色素瘤细胞A375凋亡,其中阿维A作用为显著,凋亡率13.42%,明显高于对照组、ATRA及他扎罗汀组(均P<0.05);其次为ATRA(5.03%,明显高于对照组及他扎罗汀组,P<0.05)和他扎罗汀组(凋亡率2.88%).3种维A酸亦使A375细胞Bax蛋白阳性表达增强而Bcl-2蛋白阳性表达减弱(P<0.05),其中阿维A作用强,其次为ATRA和他扎罗汀.结论维A酸促进A375细胞凋亡可能部分通过以线粒体为核心的凋亡途径.阿维A可能是防治黑色素瘤的有效药物.
关键词: 维A酸 人黑色素瘤细胞 A375 凋亡 Bax/Bc1-2蛋白 -
白介素24及其受体的研究进展
白细胞介素24(intedeukin-24,IL-24),又名黑色素瘤分化相关抗原7(melarloma differentiation associated antigen 7,mda-7),是1995年JIANG等[1]利用消减杂交技术从经IFN-β和mezerein诱导后的人黑色素瘤细胞cDNA文库中筛选到的一个肿瘤抑制基因.