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红景天、蛹虫草、大黄配伍治疗代谢综合征的实验研究Ⅴ——调节糖代谢紊乱作用机制研究
目的:探讨红景天、蛹虫草、大黄配伍(中药复方FF16)改善IRF小鼠葡萄糖代谢紊乱的作用机制.高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠形成胰岛素抵抗合并糖耐量低减的IRF小鼠,分为模型对照组IRF、罗格列酮(Rosi)组和FF16组.以禁食血糖水平测定、腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)评价动物的糖代谢状态；采用胰岛素耐量试验(ITT)、血胰岛素测定和稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价机体的胰岛素敏感性.应用Western blot方法,检测小鼠肝脏胰岛素信号通路相关蛋白Akt,p-Akt,糖代谢相关蛋白GSK3β,p-GSK3β的表达.结果显示,中药复方FF16能够改善IRF小鼠的糖代谢紊乱,使葡萄糖耐量试验AUCIIPGTT较IRF组降低22.3％；能显著增加IRF小鼠的胰岛素敏感性,使胰岛素耐量试验AUCITT降低22.1％,HOMA-IR指数降低49.5％.FF16使IRF小鼠肝脏Akt磷酸化水平升高116.4％,GSK3β磷酸化水平升高24.9％.推测中药复方FF16可通过增强IRF小鼠肝脏糖原合成,改善机体糖代谢紊乱状态.
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葛根素减轻APP/PS1双转基因小鼠的认知障碍和tau蛋白过磷酸化
该实验利用APP/PS1双转基因模型小鼠,观察葛根素对小鼠学习记忆能力及tau蛋白磷酸化的影响.选用APP/PS1双转基因模型小鼠,3个月龄后开始灌胃给药.给药3个月后,通过Morris水迷宫实验测试小鼠学习记忆能力的变化;行为学测试结束后,处死动物,留取脑组织标本,ELISA法检测皮层Aβ水平;Western blot法检测皮层tau蛋白、磷酸化tau蛋白、GSK3β及磷酸化GSK3β(Ser9)蛋白表达情况.Morris水迷宫实验显示,APP/PS1双转基因模型小鼠逃避潜伏期较正常对照组明显延长,原象限停留时间明显缩短.葛根素组小鼠逃避潜伏期较模型组明显缩短,原象限停留时间明显延长.与正常对照组比较APP/PS1双转基因模型小鼠皮层Aβ水平增多,磷酸化tau蛋白表达显著增加,磷酸化GSK3β(Ser9)蛋白表达降低;给予葛根素后,APP/PS1转基因小鼠寻台潜伏期明显缩短,Aβ水平减少,磷酸化tau蛋白表达显著减少,磷酸化GSK3β(Ser9)蛋白表达增加.葛根素通过减少Aβ的生成,激活GSK3β信号通路,抑制tau蛋白磷酸化,改善APP/PS1双转基因模型小鼠的学习记忆损害.
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人参皂苷Rb1对高糖培养海马神经元胰岛素信号转导途径的影响
目的:探讨人参皂苷Rb1对高糖培养SD大鼠海马神经元糖原合成激酶(GSK) 3β/胰岛素降解酶(IDE)信号转导通路及β淀粉样蛋白(Aβ蛋白)分泌的影响.方法:原代培养新生24 h SD大鼠海马神经元分别接种在不同条件的培养基中,分为正常组、高糖组、氯化锂组以及Rb1组.上述培养基中培养72 h,Western blotting法检测其磷酸化GSK3β(pGSK3β)、总GSK3β (tGSK3β)和IDE蛋白的表达,RT-PCR法检测GSK3β,IDE mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清液中Aβ蛋白的分泌.结果:与正常组相比,高糖组p/tGSK3β蛋白比值增加,IDE蛋白及mRNA减少,Aβ蛋白分泌增加(P＜0.05);与高糖组相比,氯化锂组和Rb1组p/tGSK3β蛋白比值下降,IDE蛋白及mRNA表达增加,Aβ蛋白分泌减少(P＜0.05);与氯化锂组相比,Rb1组p/tGSK3β蛋白,IDE蛋白及mRNA,Aβ蛋白分泌增加无明显差异;4组GSK3β mRNA的表达无明显差异.结论:人参皂苷Rb1可能通过减少GSK3β的磷酸化,下调pGSK3β/GSK3β的比值,上调IDE的表达,从而减少海马神经元Aβ蛋白的分泌.
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S100A6上调人乳腺癌细胞系MCF-7中β-catenin及其机制
目的 探讨钙细胞周期蛋白S100A6对人乳腺癌细胞系MCF-7中β-catenin的影响及其机制.方法 分别用表达S100A6及其siRNA的重组腺病毒AdS100A6与AdsiS100A6处理MCF-7细胞,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和磷酸化糖原合酶激酶3β(p-GSK3β)表达或分布的变化.结果 在MCF-7细胞中,S100A6可以上调β-catenin的蛋白表达水平(P＜0.01),但对其mRNA表达无显著性影响；S100A6对E-cadherin的mRNA表达、蛋白质表达水平及分布均无显著性影响；S100A6可以提高β-catenin降解复合体的主要成员GSK3β磷酸化水平(P＜0.01).结论 S100A6上调β-catenin的可能机制是通过促进GSK3β磷酸化失活,而不是通过调节E-cadherin实现的.
关键词： S100A6 β-catenin E-cadherin GSK3β -
曲古抑霉素A对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响及其机制
目的：探讨曲古抑霉素A（TSA）对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法不同浓度的TSA处理骨肉瘤MG-63、U2OS细胞48 h，镜下观察细胞形态的改变，CCK8法检测不同浓度对肿瘤细胞的抑制效果，并计算其半数抑制浓度；TSA处理48 h后，以流式细胞术检测对骨肉瘤细胞周期的影响；Transwell法检测TSA对骨肉瘤细胞迁移能力的影响；Western blot检测TSA对骨肉瘤细胞GSK3β、pGSK3β蛋白的影响。结果 TSA 处理后，骨肉瘤细胞细胞质减少，失去细胞连接；不同细胞系对TSA的敏感程度不同，与MG-63细胞相比，U2OS细胞更加敏感。流式细胞技术检测结果显示TSA可以使细胞G2/M期增加，G1期和S期减少，将细胞阻滞于G2/M期（P＜0.05）。Transwell结果显示TSA可以明显降低骨肉瘤细胞的迁移能力（P＜0.05）。Western blot结果表明，TSA并不改变GSK3β的表达，但可以降低pGSK3β的表达（P＜0.05）。结论 TSA可以明显抑制骨肉瘤细胞的增殖以及迁移能力，具有显著的抗肿瘤作用，并且这一作用可能是通过下调pGSK3β蛋白表达发挥作用的。
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糖原合成酶激酶3β对炎症状态下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响
目的：探讨炎症微环境作用下牙周膜干细胞成骨分化能力的变化及糖原合成酶激酶3β(glycogen synthesis kinase,GSK3β)对其成骨分化能力的影响。方法：培养正常及慢性牙周炎组织来源的牙周膜干细胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs)，将两种PDLSCs体外成骨诱导7d，实时定量PCR检测细胞Runx2、 ALP、 OCN的基因表达水平， Western Blot检测p-GSK3β， GSK3β的蛋白表达情况。在成骨诱导时使用GSK3β特异性抑制剂LiCl刺激PDLSCs， ALP染色、 RealTime PCR检测PDLSCs成骨分化的情况。结果： P-PDLSCs的成骨化能力显著低于H-PDLSCs。 P-PDLSCs组p-GSK3β表达较H-PDLSCs组增高，成骨诱导后，两种PDLSCs中p-GSK3β表达降低，但GSK3β总蛋白表达水平增高。 LiCl抑制GSK3β后PDLSCs的ALP活性、 Runx2和OCN表达水平显著降低。结论：在慢性炎症微环境中， GSK3β的磷酸化可影响Wnt信号通路，抑制牙周膜干细胞的成骨分化。
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有氧运动对肥胖大鼠海马组织tau蛋白磷酸化水平及PI3K/Akt信号通路的影响
目的:探讨有氧运动对肥胖大鼠海马组织tau蛋白磷酸化水平及其调控通路PI3K/Akt的影响,为揭示运动改善肥胖导致的神经系统功能紊乱提供一定的理论依据.方法:3周龄雄性SD大鼠随机分为高脂饮食组和正常饮食组,分别以高脂饲料和普通饲料饲养12周.随后高脂饮食组大鼠随机分为高脂安静组(HF-Sed组)和高脂运动组(HF-Ex组).正常饮食组大鼠随机分为正常安静组(ND-Sed组)和正常运动组(ND-Ex组).HF-Ex组和ND-Ex组大鼠进行为期8周的跑台训练.训练结束后48小时,分离两侧海马组织.通过Western blot检测各组大鼠海马组织中tau、GSK3β、PI3K和Akt蛋白含量及其磷酸化水平.结果:经过12周的饲养后,高脂饮食组大鼠中有55％符合肥胖大鼠建模成功条件.经过8周跑台训练后,HF-Sed组tau蛋白的磷酸化水平显著高于ND-Sed组;而HF-Ex组tau蛋白的磷酸化水平却显著低于HF-Sed组.另外,HF-Sed组GSK3β Ser9位点的磷酸化水平显著低于ND-Sed组,Tyr216位点的磷酸化水平显著高于ND-Sed组,说明HF-Sed组GSK3β激酶活性高于ND-Sed组;而经过8周跑台训练,HF-Ex组GSK3β Ser9位点的磷酸化水平显著高于HF-Sed组,Tyr216位点的磷酸化水平显著低于HF-Sed组,说明HF-Ex组GSK3β激酶活性受到抑制.此外HF-Sed组PI3K p110、p85亚基蛋白含量和AktThr308、Ser473位点的磷酸化水平显著低于ND-Sed组,说明HF-Sed组PI3K/Akt通路活性受到抑制;而HF-Ex组PI3K p110、p85亚基蛋白含量和Akt Thr308、Ser473位点的磷酸化水平显著高于HF-Sed组,说明HF-Ex组该通路活性增强.结论:肥胖能够诱导大鼠海马组织tau蛋白磷酸化水平上升,而有氧运动通过提高肥胖大鼠海马组织PI3K/Akt信号通路活性,抑制GSK3β的激酶活性,从而降低了tau蛋白的磷酸化水平,对于延缓脑内神经纤维缠结的形成,防治肥胖导致的神经系统退行性疾病有积极作用.
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抗阻运动对大鼠大脑皮质和海马组织PI3K/Akt信号通路的影响
目的:探讨抗阻运动对大鼠大脑皮质和海马组织PI3K/Akt信号通路及下游底物的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为安静对照组(SG组)和抗阻运动组(RG组).抗阻运动组大鼠进行为期8周的爬梯训练.后一次训练结束后48小时,分离大脑皮质和海马组织.通过荧光定量PCR和Western blot检测各组大鼠大脑皮质和海马组织中PI3K、Akt、GSK3β以及tau蛋白mRNA和蛋白含量及其磷酸化水平.结果:经过8周抗阻运动,抗阻运动组大鼠大脑皮质和海马组织PI3K p110和p85亚基mRNA和蛋白含量显著高于安静对照组;Akt和GSK3β mRNA和总蛋白含量与安静对照组并无显著性差异,但Akt Thr308和Ser473以及GSK3β Ser9位点的磷酸化水平显著高于安静对照组,GSK3β Tyr216位点的磷酸化水平显著低于安静对照组;tau蛋白mRNA和总蛋白水平与安静对照组也无显著性差异,而其Ser202、Thr231和Ser396位点的磷酸化水平却显著低于安静对照组.结论:抗阻运动能够提高大鼠大脑皮质和海马组织PI3K mRNA和蛋白含量,增强其磷脂酰肌醇激酶活性;提高Akt Thrβ08和Ser473位点的磷酸化水平,激活Akt;活化的Akt磷酸化GSK3β Ser9位点,抑制GSK3β的活性;终导致tau蛋白多个位点的磷酸化水平降低.因此,抗阻运动能够提高大鼠大脑皮质和海马组织PI3K/Akt信号通路活性,并对下游底物产生积极影响.
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Wnt信号通路在有氧运动改善高脂饮食诱导C57BL/6小鼠胰岛素抵抗中的作用
目的:探讨有氧运动对C57BL/6小鼠骨骼肌Wnt信号通路的关键蛋白糖原合成激酶(GSK3β)磷酸化表达水平及其下游信号蛋白分子连环蛋白(β-catenin)磷酸化水平的影响及其与胰岛素抵抗(IR)的关系.方法:将4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组(Con组)和胰岛素抵抗模型组(IR组),分别喂饲标准饲料和高脂饲料10周.建立IR模型后,再将IR组随机分为高脂饮食安静组(HC组)和高脂饮食运动组(HE组);Con组随机分为正常饮食安静组(NC)和正常饮食运动组(NE),随后运动组小鼠进行持续6周、75％ V02max强度的有氧跑台运动.6周训练结束后24小时,分别检测小鼠口服糖耐量试验(OGTT)和空腹血清胰岛素值(FINs);采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠胰腺组织胰岛β细胞形态学变化;采用Real-time PCR及Western Blot方法检测小鼠骨骼肌GSK3β和β-catenin基因及蛋白表达.结果:(1)与NC组相比,HC组小鼠OGTT、FINs及胰岛β细胞形态学结果呈现IR的病理生理学变化,而6周有氧跑台运动(HE vsHC)可以显著改善OGT、FINs及胰岛形态学变化;(2)与NC组相比,HC组骨骼肌组织GSK3β mRNA表达及pGSK3β Ser9蛋白表达分别下降60％及1.19％ (P＜0.05).β-catenin mRNA和pβ-cateninSer33/37Thr41蛋白表达分别增加60％和19.23％(P＜0.05);(3)与NC组相比,NE组骨骼肌组织GSK3β mRNA表达和GSK3β蛋白表达分别增加40.00％(P＜ 0.05)和36.11％,β-catenin mRNA表达降低15.00％(P＜ 0.05).结论:6周有氧运动可显著改善高脂饮食诱导小鼠IR,其机制与Wnt信号通路活性变化相关.
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罗格列酮对HT29、HCT116结肠癌细胞凋亡影响及机制探究
目的 探讨罗格列酮对结肠癌HT29、HCT116细胞增殖、凋亡情况的影响以及AKT/GSK3β信号通路的变化.方法 HT29、HCT116结肠癌细胞经不同浓度罗格列酮(20.0μmol/L,40.0μmol/L,80.0μmol/L)处理后,采用MTT法检测细胞增殖能力的变化,annexin-V FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl2、Bax以及Akt、GSK3β表达情况.结果 与空白对照组相比,不同浓度的罗格列酮对HT29、HCT116结肠癌细胞的增殖均有影响(P<0.01),并且影响呈剂量依赖关系;不同浓度的罗格列酮对HT29、HCT116细胞均有诱导凋亡的作用(P<0.01),且诱导HT29、HCT116细胞凋亡呈剂量依赖性;罗格列酮处理细胞48 h后,与空白对照组相比Bcl2/Bax表达水平、P-GSK3β、P-Akt表达水平明显下降(P<0.01),Akt、GSK3β表达水平较空白对照组差异无显著性(P>0.05).结论 罗格列酮可能通过抑制Akt/GSK3β通路的激活,改变Bcl2/Bax情况,发挥抑制细胞增殖、诱导凋亡的作用.
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MiR-26b通过靶基因GSK3β调控高糖诱导的系膜细胞肥大
目的:研究miR-26b调控高糖诱导系膜细胞(MCs)肥大的机制,为其在糖尿病肾病(DN)早期发病机制研究提供新线索.方法:采用生物信息学方法预测调控GSK3β的候选miRNAs;在db/db小鼠肾皮质中验证所有候选miRNAs的表达并分别与GSK3β做pearson相关性分析;以高糖诱导的MCs为载体,采用real-time PCR,观察与GSK3β显著负相关的miRNAs和GSK3β表达水平;转染miR-26b抑制子后,检测高糖诱导的GSK3β以及α-SMA的表达改变.结果:预测到调控GSK3β的候选miRNAs共9个:分别为miR-199a-5p,miR-128,miR-23b,miR-23a,miR-29a,miR-29c,29b,miR-26b,miR-26a;与对照组相比,miR-128,miR-23b,miR-26b,miR-29a,26b在db/db小鼠肾皮质中表达显著上调;其中miR-26b与GSK3β表达水平负相关显著(r=-0.470 29);高糖诱导的MCs中miR-26b与GSK3β亦呈现显著负相关,miR-26b抑制子部分逆转GSK3β表达水平,同时α-SMA、Ⅳ型胶原表达水平上调.结论:miR-26b可能通过其靶基因GSK3β参与高糖诱导的MCs肥大机制的调控,为DN早期发病机制研究提供了新的思路.
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Wnt信号通路中β-catenin、GSK3β及Lef-1在卵巢癌中的表达及其意义
目的 研究Wnt信号通路相关因子β-catenin、GSK3β及Lef-1在卵巢癌中的表达及意义. 方法 应用免疫组织化学EnVision法检测218例人卵巢组织(包括正常组织,卵巢良性腺瘤及腺癌组织标本)中β-catenin、GSK3β及Lef-1的表达情况. 结果 β-catenin、GSK3β及Lef-1在癌组织中的表达明显高于腺瘤及正常组织(P＜0.05);β-catenin及Lef-1表达与淋巴结转移及FIGO分期有关(P＜0.05),与肿瘤分级无关(P ＞0.05);GSK3β与肿瘤分级、淋巴结转移及FIGO分期有关(P＜0.05);β-catenin、GSK3β及Lef-1三者在癌中的表达均与卵巢癌的类型无关(P＞0.05).β-catenin表达与GSK3β和Lef-1表达均呈正相关(P＜0.05). 结论 Wnt信号通路中β-catenin、GSK3β及LEF-1在卵巢癌的发生发展过程中起了一定的作用,卵巢癌的进展可能和β-catenin分别与GSK3β及LEF-1共同作用促进细胞的增殖有关,三者高表达与卵巢癌的预后有关.
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GSK3β抑制非小细胞肺癌细胞自噬增强放疗敏感性
目的 探讨糖原合成酶激酶-3β (GSK3β) 在非小细胞肺癌中对自噬的调节及调节自噬对放疗敏感性的影响.方法 通过Western blot检测正常支气管上皮细胞HBE和肺癌细胞A549, H460, H292, H1299, Calu1和SK-MES-1中GSK3β的表达情况.转染或抑制GSK3β的表达并经X射线照射后, 通过Western blot检测磷酸腺苷蛋白激酶 (AMPK), 自噬标记物微管相关蛋白轻链-3 (LC3) 和自噬降解底物p62的蛋白表达水平.应用集落形成实验检测转染或抑制GSK3β的表达并经X射线照射后的细胞增殖能力, 促进或抑制自噬并经X射线照射后的细胞增殖能力.结果 在H460细胞中分别转染野生型GSK3β-WT, 激酶激活型GSK3β-S9A, 激酶失活型GSK3β-K85R并经X射线照射, 下调AMPK和LC3表达水平, 上调P62表达水平, 抑制肺癌细胞的增殖能力, 其中转染激活型GSK3β-S9A的作用显著.在A549细胞中抑制GSK3β并X射线照射, 上调AMPK和LC3表达水平, 促进肺癌细胞的增殖能力.在H460细胞中施加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤 (3-MA) 或自噬诱导剂雷帕霉素 (Rapamycin) 并经X射线照射, 3-MA抑制细胞自噬水平, 抑制细胞增殖能力, 细胞存活能力下降更显著.结论GSK3β抑制细胞自噬, 抑制细胞自噬水平可以增强非小细胞肺癌的放射敏感性.
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GSK3β在病理性瘢痕中的表达和意义
目的 研究Wnt/β-catenin 通路中糖原合成酶激酶3β(GSK 3β)在病理性瘢痕中的表达情况,以确定GSK3β在病理性瘢痕中的作用.方法 利用免疫组化技术检测GSK 3β在30例瘢痕疙瘩(A组),30例增生性瘢痕(B组)及20例正常皮肤(C组)中的表达,并进行统计学分析.结果 GSK 3β在A、B组中的表达与C组比较,其差异有统计学意义(P ＜0.05),但A、B组之间的差异无统计学意义(P ＞0.05).结论 GSK 3β是病理性瘢痕形成的重要机制之一,Wnt/β-catenin通路的激活在病理性瘢痕形成中起到重要作用.
关键词： GSK3β Wnt/β-catenin通路 病理性瘢痕 -
GSK3β、JNK对脑缺血再灌注后微血管生成机制的研究进展
GSK3β、JNK参与调节脑缺血再灌注后半暗带区微血管的生成,为缺血性脑血管疾病的临床治疗提供了新的思路.本文从GSK3β和JNK的结构、功能、活化及其与血管生成的关系等方面,就近年来有关GSK3β、JNK在脑缺血再灌注后微血管生成机制方面的研究进展做一综述.
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IL-38通过调控PI3K/Akt/GSK3β/NFATc1信号通路抑制骨质疏松的机制研究
目的:探讨IL-38抑制骨质疏松的作用并研究其分子机制.方法:共纳入2014年6月~2016年12月我院收治的138例骨质疏松患者作为研究对象.另选取120例同期在我院骨科进行骨折手术的无骨质疏松患者作为对照.采用ELISA法检测实验对象血清IL-38水平.构建IL-38-C57BL/6J转基因小鼠,建立骨质疏松小鼠模型,将野生型、IL-38转基因小鼠分别设置为假手术组(Sham组)与卵巢切除组(Ovariectomy,OVX组).术后8周取小鼠血清,检测碱性磷酸酶(ALP)、血钙及血磷水平.另取小鼠的脊柱与双侧股骨,通过病理切片分析股骨组织形态结构,用骨密度仪检测脊柱骨密度变化.将各组小鼠的骨髓基质细胞(BMSCs)进行分离并检测其体外增殖能力,Western blot 检测各组 BMSCs 的 PI3K、Akt、GSK3β 与NFATc1的磷酸化水平.小鼠成骨细胞MC3T3-E1转染IL-38后,Western blot检测PI3K、Akt、GSK3β与NFATc1磷酸化水平的变化,流式细胞术检测IL-38对细胞凋亡的影响.结果:骨质疏松组患者的血清IL-38水平显著低于对照组(P<0.05).野生型与IL-38转基因OVX小鼠的血钙、血磷水平均显著高于Sham组(P<0.05),而ALP水平显著低于Sham组(P<0.05).另外,IL-38转基因OVX小鼠的血钙和血磷水平均显著低于野生型OVX小鼠(P<0.05).股骨病理切片及脊柱骨密度分析显示,野生型与IL-38转基因OVX小鼠均出现骨组织形态结构破坏和骨密度下降,并且IL-38转基因OVX小鼠的骨组织形态结构破坏和骨密度下降情况均较野生型OVX小鼠显著减轻(P<0.05).IL-38转基因OVX小鼠BMSCs的体外增殖能力显著高于野生型OVX组(P<0.05).IL-38转基因OVX小鼠BMSCs的PI3K、Akt与NFATc1磷酸化水平均显著低于野生型OVX组(P<0.05),GSK3β磷酸化水平显著高于野生型OVX组(P<0.05).MC3T3-E1细胞转染IL-38后PI3K、Akt与NFATc1的磷酸化水平均显著降低(P<0.05),GSK3β的磷酸化水平显著升高(P<0.05).流式细胞检测显示转染IL-38后MC3T3-E1细胞的凋亡显著减少(P<0.05).结论:骨质疏松患者的血清IL-38水平显著降低,IL-38可能通过调控PI3K/Akt/GSK3β/NFATc1信号通路促进BMSCs增殖、抑制成骨细胞凋亡,从而抑制骨质疏松的进展.
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丙烯酰胺对小鼠成体神经发生及GSK3β表达的影响
目的：探讨和研究丙烯酰胺对成年小鼠海马成体神经发生及GSK3β表达的影响。方法：雄性成年昆明小鼠分为丙烯酰胺处理组和生理盐水对照组，通过腹腔注射（ i.p.）进行丙烯酰胺染毒，用BrdU标记和免疫组织化学方法研究齿状回神经干细胞的增殖，BrdU／NeuN／GFAP三标的方法研究齿状回神经干细胞的存活和分化，Neuro-2a 细胞中观察GSK3β表达与分布，用Western blot方法检测小鼠海马中GSK3β的表达。结果：丙烯酰胺处理组小鼠齿状回亚颗粒细胞层（ SGZ）中的BrdU阳性细胞数量显著低于对照组，并且新生细胞向神经元分化的数量显著降低。丙烯酰胺处理小鼠SGZ区新生干细胞的存活率显著低于对照小鼠，另外，丙烯酰胺组新生干细胞向胶质细胞分化的比例显著升高。在Neuro-2a细胞中磷酸化的GSK3β表达量极显著升高，但在丙烯酰胺处理组小鼠的海马中磷酸化的GSK3β显著降低。结论：结果表明，丙烯酰胺能显著抑制小鼠齿状回成体神经干细胞增殖，降低新生干细胞的存活率并影响其分化，丙烯酰胺抑制小鼠成体神经发生可能与GSK3β有一定的关系。
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头穴透刺对脑出血大鼠神经功能和gsk3β影响的研究
目的：通过观察“百会透曲鬓”针刺法对脑出血急性期大鼠模型神经功能和gsk3β的影响，研究“百会透曲鬓”针刺法对脑出血后继发性脑损伤的神经保护可能的机制。方法：选用Wistar大鼠72只随机分为三组：针刺组（模型组＋针刺组）、模型组、针刺组＋抑制剂组（针刺组＋LY294002）各24只。建立大鼠脑出血模型。针刺腧穴：百会穴向曲鬓穴方向透刺，在头部贯穿顶区、额区、颞区。造模并治疗后取1天，3天，7天三个时间点。对1天，3天，7天三个时间点神经功能缺失体征评分。用免疫组化分析法检测脑组织中gsk3β蛋白表达的阳性细胞数。结果：脑出血对针刺组在术后3天评分达到高峰，随后显著降低。针刺组在1天时神经功能缺失评分缓慢升高，其后出现下降趋势，与模型组相比3天是神经功能缺失评分无差异，与模型组相比7天时评分有差异（ P＜0．05）；gsk3β在大鼠脑出血后1天表达多，3天达高峰后减少，7天仍有少量表达。针刺组各时间点免疫标记神经元均比模型组增高，具有显著差异。针刺组与抑制剂组比较有统计学意义，模型组与针刺组＋LY294002相比无意义。结论：针刺“百会”透“曲鬓”穴对脑出血大鼠神经功能缺损体征明显好转，提示针刺“百会”透“曲鬓”穴能够改善脑出血大鼠的神经功能；研究显示在脑出血急性期，针刺“百会透曲鬓”穴可以下调gsk3β的蛋白表达，能够改善脑组织缺血缺氧状态和保护受损伤的神经元细胞，减轻脑出血后炎性反应导致的继发性脑损伤程度。
关键词： 脑出血大鼠模型 “百会透曲鬓”针刺法 神经功能 GSK3β -
抑制Tau蛋白过度磷酸化治疗阿尔茨海默病的研究进展
阿尔茨海默病(AD)是一种神经退行性疾病,在疾病早期出现记忆障碍,随着病情进展出现严重的认知衰退,并终导致患者在确诊后的平均9年内死亡[1].AD是成人老年痴呆症常见的原因.全球患病率高达2400万,由于本病的机制尚不清楚,目前还没有治愈的方法,预计到2050年将翻两番[1].仅在美国,估计每年用于阿尔茨海默病的医疗保健费用高达17.2亿,因此迫切需要寻找治疗AD的新途径.现就近几年针对抑制Tau蛋白过度磷酸化治疗AD的研究做一综述.
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GSK3β在胃癌中的表达
目的 通过观察糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)蛋白在胃癌组织中的表达变化,探讨GSK3β在胃癌中的临床意义.方法 应用免疫组织化学(IHC)SP法检测45例胃癌组织中GSK3β蛋白的表达变化.结果 GSK-3β蛋白在胃癌中的阳性率为40.00%,明显低于正常组织(P<0.05).GSK-3β的蛋白改变与胃癌的TNM分期、分化程度以及淋巴结转移有关联(P<0.05).结论 GSK-3β的降低参与了胃癌的发生,GSK-3β的检测对评估预后具有一定参考价值.
