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绞股蓝总皂苷对糖尿病肾脏病大鼠巢蛋白的影响
目的:观察绞股蓝总皂苷对糖尿病肾脏病(DKD)大鼠巢蛋白的影响,探讨其降低蛋白尿、内生肌酐清除率、保护肾脏的机制.方法:150只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,绞股蓝总皂苷高、中、低剂量组,采用摘除单侧肾脏加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法改良复制DKD模型,灌胃4、6、8周后测定血糖(GLU)、24h尿蛋白(24h-UP),内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白排泄率(UAER),光镜观察肾小球结构改变,Western Blot检测巢蛋白(nestin)、波形蛋白(vimentin)、cdk5/p35蛋白的表达.结果:①治疗8周,与模型组比较,绞股蓝总皂苷高剂量对GLU、24h-UP、Ccr、UAER均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05);绞股蓝总皂苷中剂量组对GLU、24h-UP、UAER较模型组均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05);绞股蓝总皂苷低剂量组对Ccr、24h-UP、UAER较模型组均有不同程度的改善(P＜0.01,P＜0.05).②与模型组比较,绞股蓝总皂苷高剂量组可显著升高nestin的表达(P＜0.01),绞股蓝总皂苷高、中剂量组可升高vimentin的表达(P＜0.05),各治疗组均可降低cdk5/p35的表达(P＜0.01,P＜0.05).③光镜观察各治疗组肾小球系膜细胞增生减轻,炎性细胞浸润改善.结论:绞股蓝总皂苷可能通过上调nestin达到保护足细胞,降低蛋白尿及提高Ccr,延缓DKD进程的目的.
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Cdk5与学习和记忆的研究进展
越来越多的证据表明,Cdk5通过与大量蛋白相互作用而在学习和记忆过程中发挥重要作用.近来,关于Cdk5的研究结果不仅证实其参与药物成瘾过程中细胞间的通路改变,且其活性与一些神经退行性疾病的发生有关.本文就Cdk5对学习和记忆的影响及其相关机制的研究进展予以综述.
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Cdk5—肿瘤新靶点及其抑制剂研究进展
细胞周期蛋白依赖性激酶-5 (cyclin-dependent kinase-5,CdkS)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与神经细胞生长发育和信号传导调控.Cdk5的过表达与肿瘤的发生、发展和凋亡有着密切关系.Cdk5抑制剂的研究正成为癌症治疗的热门领域.本文介绍了Cdk5的生物学功能和作用机制,重点阐述以ATP为锚点的小分子抑制剂和介导蛋白-蛋白相互作用的多肽等抑制剂的新进展.
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人参皂苷Rb1可能通过CDK5途径减轻Aβ25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化
观察人参皂苷Rb1对Aβ25-35诱导的海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响,并探讨其对周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase 5,CDK5)及激动亚基p25/p35的可能作用.通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠海马神经元tau蛋白在Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平,及CDK5的两个亚基cdk5和p25/p35的蛋白水平.20 μmol·L-1凝聚态Aβ25-35作用于海马神经元12 h,可使海马神经元tau蛋白在Thr205、Ser396和Ser404位点的磷酸化水平增高,p25的数量增多,但并不影响cdk5亚基的表达.人参皂苷Rb1可减轻凝聚态Aβ25-35诱导的海马神经元tau蛋白的过度磷酸化,抑制p35的降解并减少海马神经元p25的生成.人参皂苷Rb1可能通过CDK5途径减轻Aβ25-35诱导的胎鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化.
关键词： 人参皂苷Rb1 β淀粉样蛋白25-35 Tau蛋白 Cdk5 p25/p35 -
生长抑素类似物对肝癌细胞的抑制作用及对CDK5表达的影响
目的 探讨生长抑素及其类似物对人肝癌细胞的抑制作用及其对周期素依赖性蛋白激酶5(CDKS)的表达的影响.方法 体外培养人肝癌细胞株(HepG2),在倒置显微镜下观察不同浓度组肝癌细胞的形态变化.MTT比色实验观察不同浓度的奥曲肽(Octreotide)对细胞增殖的影响.细胞爬片,免疫细胞化学法检测CDK5的表达情况.结果 不同浓度的奥曲肽对肝癌细胞增殖的抑制作用有差异,高剂量组的抑制作用强.药物作用48h后,药物组CDK5的表达较对照组明显减少,着色程度随药物浓度增高而逐渐减弱.结论 奥曲肽对肝癌细胞的增殖有抑制作用,可下调肝癌细胞中CDK5的表达,CDK5在奥曲肽抑制肝癌细胞增殖的过程中发挥作用.
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索拉菲尼对肝癌细胞的抑制作用及其对CDK5表达水平的影响
目的 探讨索拉菲尼对体外培养的人肝癌HepG2 细胞的增殖抑制作用及其对周期素依赖性蛋白激酶5 表达的影 响.方法 体外培养人肝癌HepG2 细胞株,采用MTT 法检测不同浓度索拉菲尼对HepG2 细胞增殖的影响;同时经细胞 爬片后,采用免疫细胞化学法检测肝癌细胞内CDK5 的表达情况.结果 索拉菲尼可使人肝癌细胞增殖率明显下降,且 呈明显的时间- 剂量依赖效应;药物作用48 h 后,给药组CDK5 的表达较对照组明显减少,其着色程度随药物浓度增高 而逐渐变淡.结论 索拉菲尼对人肝癌HepG2 细胞增殖有抑制作用,并能下调肝癌细胞中CDK5 的表达,从而起到抗肿 瘤的治疗作用.
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油酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素及CDK5、PPARγ表达的调节作用
目的探讨不同浓度油酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素及细胞周期性依赖激酶5（CDK5）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的调节作用。方法用不同浓度（25、50、100、200、400μmol/L）油酸处理诱导成熟的3T3-L1脂肪细胞24h，用实时荧光定量PCR及Western-blotting法测定各处理组胞内脂联素、CDK5、PPARγ mRNA和蛋白表达水平，并在油酸浓度为100、400μmol/L时用Western-blotting法测定PPARγser273磷酸化水平。结果50～100μmol/L范围内，油酸可促进脂联素、PPARγ mRNA表达，100μmol/L油酸可显著上调脂联素和PPARγ mRNA及蛋白表达；之后随浓度增加，油酸对脂联素和 PPARγ的促进作用下降，在400μmol/L 时显著降低脂联素 mRNA和蛋白表达，但对PPARγ蛋白无明显作用。100μmol/L油酸对PPARγ ser273磷酸化水平无明显影响，但在400μmol/L时可显著升高PPARγser273磷酸化水平。各浓度油酸对CDK5 mRNA及蛋白均无明显影响。结论50～100μmol/L油酸可促进脂联素、PPARγ表达，400μmol/L油酸抑制脂联素的表达并升高PPARγ ser273磷酸化水平。提示50～100μmol/L油酸可能通过上调 PPARγ而促进脂联素表达，400μmol/L油酸可能通过异常激活 CDK5介导的 PPARγ ser273磷酸化抑制脂联素表达。
关键词： 油酸 3T3-L1脂肪细胞 脂联素 Cdk5 PPARγ -
孕鼠优裕环境胎教对子鼠海马体Cdk5、Fos、Gat1基因表达的影响
目的:研究母鼠优裕环境胎教子鼠行为表征与海马体神经发育相关基因表达的影响.方法:将23只受孕SD母鼠按照随机分为2组:优裕“胎教”组(优裕组)、空白对照组(对照组),每组随机选取10只子鼠进行矿场试验与海马体Cdk5、Fos、Gat1表达水平检测.结果:①在空格试验中优裕组数大于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);②优裕组的Cdk5与Fos mRNA水平显著高于对照组(P＜0.05);而EEG的Gat1 mRNA水平显著低于于对照组(P＜0.05).结论:优裕环境母鼠胎教促进子鼠的生长发育,Cdk5、Fos、Gat1可能参与其分子机制.
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Cyclin E 、CDK5在肺癌中的表达
[目的] 研究Cyclin E、CDK5在不同组织类型肺癌中的表达情况及其与肺癌发生发展的关系.[方法] 采用免疫组织化学法检测91例原发性肺癌及10例正常支气管粘膜组织中的Cyclin E、CDK5表达水平.[结果] Cyclin E、CDK5在肺癌中总的阳性表达率分别为 46.15%、37.36%,而在正常支气管粘膜中几乎无表达. Cyclin E、CDK5表达水平在肺癌各组织类型、分化程度间无显著性差异(P>0.05).Cyclin E与CDK5存在交叉共存现象(91例中有65例表达相同),经相关分析发现两者呈显著正相关(P<0.01). [结论] Cyclin E、CDK5与肺癌发生有关,可作为肺癌的潜在的诊断指标.
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SB431542对高糖环境中小鼠足细胞Cdk5／p35表达的影响
目的：应用SB431542及Roscovitine处理高糖培养的足细胞，观察抑制转化生长因子（ TGF）-β1通路对高糖培养足细胞中Cdk5／p35表达的影响及抑制Cdk5激酶活性对高糖和TGF-β1诱导足细胞凋亡的影响。方法采用不同浓度SB431542（0.1，1.0，10μmol／L）处理高糖培养的足细胞，Western印迹法及RT-PCR技术检测各处理组Cdk5及p35蛋白和mRNA的表达变化情况。应用流式细胞术检测 Roscovitine对高糖及 TGF-β1刺激足细胞凋亡的影响。结果高糖（HG组）Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平明显增高，显著高于正常血糖组（NG）组和甘露醇组（M组）（P＜0.05），并且呈时间依赖性升高。加入SB431542后，高糖培养导致的足细胞内Smad-2蛋白磷酸化水平明显降低。同时，HG＋SB431542组足细胞内Cdk5和p35的蛋白及mRNA表达水平呈浓度依赖性显著降低，明显低于HG组（P＜0.05）。加入Roscovitine后，高糖及 TGF-β1诱导足细胞的足细胞凋亡水平显著下降（P＜0.05）。结论高糖可能通过活化TGF-β1通路上调Cdk5／p35表达从而诱导足细胞凋亡。
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CDK5在左旋多巴诱发异动症形成中作用的研究
目的 研究纹状体区CDK5的表达变化在左旋多巴诱发的异动症(LID)形成中所起的作用.方法 以Roscovitine(CDK5拮抗剂)治疗LID大鼠,观察大鼠行为学改变并用免疫印迹技术检测其纹状体区CDK5、Thr-34位点和Thr-75位点磷酸化的DARPP-32蛋白表达的变化.结果LID大鼠毁损侧纹状体区CDK5表达量和Thr-34位点磷酸化的DARPP-32水平均较非LID组显著增高,而Thr-75位点磷酸化的DARPP-32表达与非LID组相比无显著差异.经Roscovitine治疗后,前两者表达均显著下降,而后者较LID组显著增加,同时大鼠异常不自主运动明显减少.结论 DARPP-32的Thr-34位点的磷酸化水平的增高与LID的形成关系密切.CDK5的表达增强与机体稳定内环境的代偿性反应有关.
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实时荧光定量PCR检测癫痫发生中大鼠海马MEF2及CDK5的表达
目的:检测大鼠在癫痫发生过程中不同时间点海马肌细胞增强因子(myocyte enhancer factor,MEF2) mRNA及细胞周期素依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5,CDK5) mRNA的表达水平,并分析两者之间的相关性.方法:采用锂-匹鲁卡品腹腔注射,建立大鼠慢性癫痫模型,提取海马组织中的总RNA,并逆转录为cDNA,应用Real-time PCR检测MEF2及CDK5 mRNA的表达量.结果:MEF2A/2D mRNA于造模中止后1d急剧下降,3d开始上升,至4w达高,后渐恢复至正常水平；CDK5 mRNA的表达量在整个癫痫发生过程中均呈上升趋势,4w达大,6w开始下降,8w恢复至正常水平.结论:MEF2与CDK5均参与了慢性癫痫的形成过程,但两者的表达量在时间上无明显关联性.
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抑制Tau蛋白过度磷酸化治疗阿尔茨海默病的研究进展
阿尔茨海默病(AD)是一种神经退行性疾病,在疾病早期出现记忆障碍,随着病情进展出现严重的认知衰退,并终导致患者在确诊后的平均9年内死亡[1].AD是成人老年痴呆症常见的原因.全球患病率高达2400万,由于本病的机制尚不清楚,目前还没有治愈的方法,预计到2050年将翻两番[1].仅在美国,估计每年用于阿尔茨海默病的医疗保健费用高达17.2亿,因此迫切需要寻找治疗AD的新途径.现就近几年针对抑制Tau蛋白过度磷酸化治疗AD的研究做一综述.
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长时程突触可塑性的研究进展
人的大脑由成千上万的神经元组成,各个神经元之间通过"突触"这种特殊的结构相互连接、通信,这种结构是人的学习记忆、情感认知等多种高级功能的重要基础.外界信息的输入触发的神经元活动可特异性地持续改变突触的结构和功能,这种神经活动依赖的突触变化称之为长时程突触可塑性.大量实验证据表明突触可塑性是大脑学习和记忆的分子细胞学机制,了解突触可塑性的机制对阐明中枢神经系统性相关疾病(如老年痴呆症、药物成瘾等)的机理具有重要意义.本文简要地综述了长时程突触可塑性研究中的基本发现和研究进展.
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周期素依赖性蛋白激酶5及其激动剂在神经系统发育中的作用
周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5, CDK5)是CDKs家族的成员之一,属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族,具有与其他的CDKs成员同源的序列~[1].CDK5早是从Hela细胞中分离并克隆,并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序列有57%的同源性~[2],故又称为cdc2相关的蛋白激酶.
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神经元突触内的非受体型酪氨酸激酶底物
非受体型酪氨酸激酶(non-receptor tyrosine kinase,nRTK)是一个较大的激酶家族,其功能是催化蛋白的酪氨酸磷酸化.nRTK家族中的几种常见亚型,比如Src和Fyn,可以在神经系统内表达.近年来的研究表明,神经元的突触部位含有多个nRTK的底物蛋白,这些底物蛋白主要包括谷氨酸受体(离子型和代谢型谷氨酸受体)、突触后构架蛋白、突触前调节蛋白和突触富含的多种蛋白激酶.在基础或刺激的状态下,nRTK可催化这些底物蛋白内特定酪氨酸的磷酸化,从而调节这些底物蛋白的多种生理、生化和生物物理功能.因为突触内的nRTK对突触变化信号非常敏感,所以突触nRTK被认为参与了突触传导活动的强度和效率等方面的调节.
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细胞周期素依赖性蛋白激酶-5参与疼痛、阿片耐受
疼痛及其治疗是临床上的一大难题,主要由于机制不明.Cdk5是一种特殊的细胞周期素依赖性激酶家族,几乎存在于整个中枢和外周神经系统的神经元内.Cdk5作为丝氨酸/苏氨酸激酶,可调节众多底物和蛋白,目前发现在疼痛信号通路及阿片耐受中具有重要作用,可能作为治疗疼痛的新方法,对其在疼痛通路及阿片耐受中作用的深入了解,将有助于解决这一难题.
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雷公藤红素对APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病模型小鼠肝叶部分切除术后认知功能及海马内Cdk5、p25和p35表达的影响
目的：动态观察雷公藤红素对APPswe/PS1dE9双转基因阿尔茨海默病(alzheimersdisease, AD)模型小鼠肝叶部分切除术后认知功能及海马内周期蛋白依赖性蛋白激酶5(cyclin-de-pendentkinase5, Cdk5)和激动因子p25和p35表达的影响。方法3月龄AD模型小鼠96只,随机均分为三组：手术组(S组),麻醉后行肝叶部分切除术；雷公藤红素组(C组),手术前3d上午腹腔注射雷公藤红素60μg/kg；二甲亚枫(DMSO)组(O组),手术前3d上午腹腔注射同体积的0.04%DMSO。三组随机抽取8只小鼠采用水迷宫连续训练5d并检测术后1、3、7、14d的学习记忆能力,余下小鼠分别于术后1、3、7、14d取标本,每次6只,检测海马内细胞Cdk5及激动因子p25、p35的表达。结果与C组比较,术后3、7和14dS和O组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05)、目的象限时间百分比明显降低(P<0.05)；与C组比较, S和O组术后3、7、14d海马内Cdk5表达和术后1、3、7、14d海马内p25表达明显增高(P<0.01)。三组小鼠海马内p35表达差异无统计学意义。结论雷公藤红素可改善肝叶部分切除术后AD模型小鼠的认知功能的下降,其机制可能与Cdk5和p25蛋白表达下降有关。
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5-羟基-1-氢-吲唑对SH-SY5 Y细胞的保护作用及其机制研究
目的：研究5-羟基-1-氢-吲唑对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导凋亡的SH-SY5Y神经细胞的保护作用及其可能的作用机制。方法以MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立体外帕金森病细胞模型,以MTT法筛选药物有效保护浓度；以免疫化学染色以及Hoechst 33258核染研究药物的神经保护作用以及抗凋亡作用；以Western blot法检测与神经元凋亡密切相关的磷酸化tau蛋白及其上游激酶磷酸化糖原合成激酶( P-GSK-3β)和周期依赖性蛋白激酶5( cyclin dependent kinase,CDK5)的表达。结果 MPP+可引起 GSK-3β的活化以及CDK5活性升高,诱导tau的异常磷酸化和神经细胞凋亡；而5-羟基-1-氢-吲唑可下调GSK-3β与CDK5的活性,降低磷酸化tau的水平和抑制MPP+导致的SH-SY5Y细胞的凋亡。结论5-羟基-1-氢-吲唑可抑制MPP+引起的SH-SY5Y神经细胞凋亡,作用机制可能是通过同时抑制GSK-3β和CDK5两条信号传导通路,而降低tau蛋白的磷酸化水平,进一步发挥神经元保护作用。
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复智散通过细胞周期依赖性蛋白激酶5通路减轻皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化
目的：探讨复方中药复智散( FZS)能否通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)通路,减轻Aβ25-351诱导的新生鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。方法选用24 h内新生Wistar大鼠,分离纯化皮层神经元,进行体外培养。皮层神经元在体外培养7 d后,应用20μmol · L-1 Aβ25-351作用于皮层神经元24 h。药物治疗组则应用 FZS (20 mg · L-1)、CDK5抑制剂Roscovitine (15μmol · L-1)、钙蛋白酶(calpain)制剂Calpeptin(20μmol·L-1)预处理24 h,然后用20μmol·L-1 Aβ25-351作用24 h。用Western blot检测 Tau蛋白Ser396、Ser202和Thr231位点磷酸化水平和CDK5的激活蛋白p25/p35的蛋白水平；荧光酶标仪测定荧光强度来反映calpain活性；免疫沉淀法检测CDK5激酶活性。结果20μmol·L-1 Aβ25-351作用于皮层神经元24 h后,Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位点磷酸化水平增加, CDK5激酶活性升高,CDK5激活蛋白 p25水平升高, calpain 活性升高。20 mg·L-1 FZS治疗组则明显抑制了Aβ25-351导致的Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位点磷酸化水平增加,抑制了CDK5激酶活性、p25蛋白水平以及calpain活性升高。 CDK5
