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DARPP-32在大鼠全脑的定位分布
目的 探讨DARPP-32在大鼠全脑的表达分布特点.方法 应用免疫组织化学染色技术对大鼠脑内DARPP-32的表达分布进行观察.结果 免疫组织化学染色结果显示,强阳性的DARPP-32染色大部分分布于基底节区和前嗅皮质区,主要分布在伏隔核、尾壳核及杏仁核复合体的神经元胞体内,以及苍白球、腹侧苍白球、脚间核及黑质网状部的神经纤维中; 中～弱阳性DARPP-32免疫染色见于中脑红核、隔伞核、小脑的普肯耶神经元、内侧缰核、皮层及海马等区域; 阳性DARPP-32主要定位于神经元的胞质、胞核和胞膜上.结论 DARPP-32在大鼠全脑广泛表达,但主要分布于多巴胺能神经元密集投射的脑区,这些区域的神经元富含多巴胺D1受体.DARPP-32可能在多巴胺介导的神经功能中扮演着重要角色.
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DARPP-32磷酸化参与天芪平颤颗粒缓解帕金森病运动并发症的发生
目的 研究天芪平颤颗粒对帕金森病(PD)运动并发症大鼠异常不自主行为学及纹状体DARPP-32(Thr75)磷酸化表达的影响,探讨长期左旋多巴使用后天芪平颤颗粒对异动症(LID)的作用机制.方法 6-羟基多巴胺(6OHDA)制备PD大鼠模型并给予左旋多巴治疗4周,制备LID大鼠模型,将LID大鼠随机分为5组,分别给予大鼠生理盐水(LID模型组)、左旋多巴(西药组)以及小、中、大剂量天芪平颤颗粒组,另设假手术组(n =5)为对照组,并用免疫组化和Western blotting法观察各组大鼠纹状体内磷酸化DARPP-32(Thr75)的表达情况.结果 长期使用左旋多巴后,PD大鼠出现刻板运动和进行性增加的对侧旋转等行为学改变.天芪平颤颗粒可明显缓解LID大鼠的不自主运动行为.免疫组化结果显示,西药组磷酸化DARPP-32 (THr75)表达较LID 模型组降低[(3.53±0.20)×104vs.(3.85±0.30)×104,P＜0.05],大、中、小剂量中药组磷酸化DARPP-32(THr75)表达量分别为(8.54±0.17)×104、(8.10±0.31)×104、(7.06±0.69)×104,较西药组升高(P＜0.05).Western blotting结果与免疫组化基本一致,西药组磷酸化DARPP-32(THr75)灰度值与LID模型组比较无统计学差异[(0.97±0.24)×106 vs.(1.08±0.12)×106,P＞0.05],大、中、小剂量中药组大鼠纹状体磷酸化DARPP-32(THr75)灰度值分别为(2.40±0.09)×106、(2.37±0.16)×106、(1.44±0.14)×106,较西药组升高(P＜0.05).结论 天芪平颤颗粒可降低LID大鼠的异常不自主运动评分,其机制可能是通过逆转磷酸化DARPP-32(THr75)表达的进一步下降,从而抑制了PKA通路的过度活化；DARPP-32磷酸化参与了治疗PD 运动并发症的机制.
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DARPP-32与脑功能障碍
多巴胺和环磷酸腺苷调节的磷蛋白(DARPP-32)是在多巴胺信息传递及整合过程中的一个关键分子,其通过自身不同位点的磷酸化对蛋白质磷酸化和去磷酸化过程发挥着双向调控的作用,整合多种胞内信号转导,调节神经元的电学和化学性质以及动物的生理行为反应,参与多种生理功能和病理过程.本文就DARPP-32的结构、功能和其调节作用及其在脑功能障碍相关疾病研究中的应用予以综述.
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DARPP-32磷酸化状态与左旋多巴诱发异动症形成间关系的研究
目的:研究纹状体区DARPP-32磷酸化水平变化和直接通路活动的改变在左旋多巴诱发的异动症(LID)形成中所起的作用.方法:以SCH23390(D1受体拮抗剂)治疗LID大鼠,观察LID大鼠的行为学改变,并用逆转录聚合酶链反应技术检测LID大鼠纹状体区前强啡肽原(PDyn)基因mRNA的表达情况,免疫印迹技术检测纹状体内DARPP-32蛋白Thr-34位点和Thr-75位点磷酸化修饰水平的变化.结果:LID大鼠纹状体区PDyn mRNA基因表达和磷酸化的Thr-34位点DARPP-32水平较对照组均明显增高,Thr-75位点磷酸化无显著改变.经SCH23390治疗后,LID大鼠异常不自主运动明显减少,PDyn基因表达和Thr-34位点磷酸化水平降低,Thr-75位点磷酸化水平升高.结论:大鼠纹状体区PDyn基因表达和Thr-34位点磷酸化水平的升高与LID的形成有关,提示直接通路活动异常及基底节环路功能异常参与了LID的发生.
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止颤汤对帕金森病异动症大鼠DARPP 32磷酸化表达的影响
目的 观察止颤汤对帕金森病异动症(LID)大鼠行为学和纹状体DARPP-32(Thr-34)磷酸化表达的影响.方法 采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射于大鼠脑部黑质造成帕金森病模型,进一步予以左旋多巴/苄丝肼腹腔注射制作异动症(LID)模型.实验设立正常组、模型组、西药组及中药小、中、大剂量组,并采用异常不自主运动(AIM)评分及 Western Blotting法观察各组大鼠的行为学及DARPP-32(Thr-34)磷酸化的表达情况.结果 AIM评分显示,止颤汤可以缓解LID大鼠的不自主运动行为,长期用药后,中药中剂量组评分明显下降,但与大剂量组相比差异无统计学意义.Western blotting 结果显示:模型组大鼠磷酸化 DARPP-32 (THr34)的灰度值较正常组增高(P<0.01);西药组磷酸化 DARPP-32(THr34)灰度值与模型组比较,差异无统计学意义.中药大、中、小剂量组大鼠纹状体磷酸化 DARPP-32(THr34)灰度值与西药组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).中药中剂量、大剂量组磷酸化 DARPP-32(THr34)的灰度值较中药小剂量组降低(P<0.05),而中药中剂量组与中药大剂量组比较差异无统计学意义.结论 止颤汤可以有效缓解异动症的症状,降低纹状体DARPP-32(Thr-34)磷酸化的表达,可能是止颤汤治疗异动症的作用机制.
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CDK5在左旋多巴诱发异动症形成中作用的研究
目的 研究纹状体区CDK5的表达变化在左旋多巴诱发的异动症(LID)形成中所起的作用.方法 以Roscovitine(CDK5拮抗剂)治疗LID大鼠,观察大鼠行为学改变并用免疫印迹技术检测其纹状体区CDK5、Thr-34位点和Thr-75位点磷酸化的DARPP-32蛋白表达的变化.结果LID大鼠毁损侧纹状体区CDK5表达量和Thr-34位点磷酸化的DARPP-32水平均较非LID组显著增高,而Thr-75位点磷酸化的DARPP-32表达与非LID组相比无显著差异.经Roscovitine治疗后,前两者表达均显著下降,而后者较LID组显著增加,同时大鼠异常不自主运动明显减少.结论 DARPP-32的Thr-34位点的磷酸化水平的增高与LID的形成关系密切.CDK5的表达增强与机体稳定内环境的代偿性反应有关.
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曲妥珠单抗耐药机制的新研究进展
人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her-2)在20%～25%的侵袭性乳腺癌中有过度表达,且其过度表达与乳腺癌的侵袭性和生存率相关.曲妥珠单抗(商品名:赫赛汀,herceptin)是一种己广泛应用于临床治疗的抗Her-2的单克隆抗体,其与化疗药物联用可以明显延长患者的无病生存期,但Her-2表达阳性的乳腺癌细胞易对曲妥珠单抗产生耐药性.本文系统总结了曲妥珠单抗的耐药机制及相关新研究进展,包括PI3K/AKT信号通路过度激活、表皮生长因子受体家族(epidermal growth factor receptor family,EGFR family)及其配体的异常表达、Her-2或曲妥珠单抗封闭、胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-IR)旁路活化P13K/AI(T通路、Darpp-32和t-Darpp过度表达、肿瘤细胞自体吞噬、热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)过度表达等.
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百草枯对小鼠纹状体区多巴胺D1受体信号转导的影响
目的:观察百草枯对小鼠纹状体区多巴胺D1受体信号转导的影响.方法:用口服百草枯的途径,建立小鼠帕金森病模型;应用液闪测定技术测定百草枯对小鼠纹状体区DARPP-32(Mr=32 000)磷酸化程度的影响.结果:给予小鼠口服百草枯10 mg*kg-1*d-1连续4个月后,纹状体区DARPP-32的32P结合位点增加77.4%(P＜0.01).结论:百草枯可能通过cAMP/PKA系统减弱体内DARPP-32的磷酸化程度,调节其对多巴胺D1受体信号转导途径的作用.
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天芪平颤颗粒对帕金森病大鼠异动症行为学及信号转导蛋白表达的影响
目的:研究天芪平颤颗粒对帕金森病(PD)大鼠异动症行为学及信号转导蛋白DARPP-32、ERK磷酸化表达的影响.方法:通过6-羟基多巴(6-OHDA)立体定向至大鼠前脑内侧束建立帕金森病模型,共25只,随机分为5组,每组5只.PD组:腹腔注射0.2％维生素C液；西药组:腹腔注射左旋多巴甲酯29 d；中药小剂量组、中剂量组、大剂量组:给予左旋多巴甲酯基础上分别加用不同剂量天芪平颤颗粒；另设假手术组为对照组(n=5).评估不同剂量天芪平颤颗粒对PD模型大鼠运动并发症的行为学影响,并用免疫组织化学方法检测大鼠纹状体区磷酸化的DARPP-32和ERK表达情况.结果:天芪平颤颗粒能减少左旋多巴制剂产生的剂峰旋转次数.免疫组化显示,与PD组大鼠比较,西药组磷酸化DARPP-32(Thr75)明显降低,中剂量组和大剂量组均未出现明显的降低(P＞0.05).与PD组磷酸化ERK1/2比较,左旋多巴长期治疗后,磷酸化ERK1/2表达升高,中剂量组和大剂量组表达量均未出现明显上升(P＞0.05).结论:天芪平颤颗粒可以减少PD大鼠剂峰异动行为,可能通过DARPP-32(Thr75)及ERK1/2磷酸化,达到调节胞内异常信号转导的功能.
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缺血引起沙土鼠纹状体DARPP-32磷酸化状态的变化
采用蒙古沙土鼠双侧颈总动脉阻断前脑缺血模型, 以放射自显影（反向磷酸化, back-phosphorylation）及免疫印迹(Western blotting)法体外测定缺血时纹状体DARPP-32磷酸化水平和蛋白含量的变化。结果表明, 短暂性缺血纹状体DARPP-32的免疫学活性和蛋白含量无明显改变。在缺血10 min内, 随缺血时间的延长, 体外DARPP-32的［32P］的掺入量在缺血5 min时升高, 在缺血2、7、10 min时均降低, 而反向磷酸化的测定结果表明体内DARPP-32磷酸化水平增高, 说明缺血可诱导DARPP-32磷酸化水平变化。
关键词： 脑缺血 蒙古沙土鼠 DARPP-32 反向磷酸化 Westernblotting -
左旋千金藤啶碱D1激动作用增加6-OHDA损毁大鼠的DARPP-32磷酸化效应
为了进一步阐明SPD对大鼠纹状体突触后D1受体的激动作用特性,本文应用反磷酸化在体内测定及放射配体结合方法,分别观察SPD对6-OHDA损毁大鼠纹状体DARPP-32体内磷酸化作用及突触后D1受体密度的影响.结果表明:皮下给予SPD(20,40 mg/kg,21 d),损毁侧纹状体DARPP-32体外[32P]的掺入量较健侧下降50%(P<0.01).换言之,损毁侧纹状体内DARPP-32的磷酸化程度增加了.然而,SPD使损毁导致D1受体上调的作用减弱(Bmax 从385.0±26.1 fmol/mg 降至319.7±20.1 fmol/mg水平).因此,SPD激动D1受体,使6-OHDA损毁大鼠纹状体内DARPP-32磷酸化作用加强,而受体密度减少.这是SPD调节脑内D1受体信号转导功能的重要机制.
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精神分裂症患者伏隔核的DARPP-32及其磷酸化水平
目的探讨DARPP-32蛋白及其苏氨酸磷酸化水平和精神分裂症症状的关系.方法取17例精神分裂症患者(I型7例,Ⅱ型10例)和9例对照组的脑组织,蛋白质免疫印迹法测定伏隔核中DARPP-32、34P-DARPP-32和75P-DARPP-32的水平.结果在脑的伏隔核,对照组、I型组、Ⅱ型组的DARPP-32分别为(100.0±7.3)、(70.8±4.7)和(96.2±5.8),(单因素方差分析P<0.05);34P-DARPP-32分别为(100.0±8.7)、(66.3±7.0)和(102.0±9.2),(单因素方差分析,P<0.05);而75P-DARPP-32分别为(100.0±19.9)、(79.8±7.0)和(118.1±22.0),(单因素方差分析,P>0.05).结论DARPP-32及其在34苏氨酸磷酸化程度的减少和精神分裂症的阳性症状有关.
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电针“曲池”“足三里”穴对缺血再灌注损伤大鼠纹状体DARPP-32磷酸化的影响
目的 观察电针“曲池”“足三里”穴对脑缺血再灌注损伤局灶性大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠神经行为学的变化及多巴胺和环磷酸腺苷调节的蛋白(DARPP-32)磷酸化的影响.方法 将25只雄性SD大鼠随机分为假手术组(6只)、手术组(19只).手术组采用Longa线拴法制备左侧左侧大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,将造模后符合纳入标准的12只大鼠随机分为模型组、电针组,各6只.电针组取“曲池”和“足三里”穴,电针干预14 d,假手术组和模型组在同等条件下抓取及固定,不予任何干预.通过神经功能评分判断大鼠的神经功能缺损情况;小动物磁共振仪(MRI)扫描观察脑梗死体积,Western blot检测纹状体DARPP-32、p-Thr75-DARPP-32的表达情况.结果 与模型组相比,电针组大鼠神经功能评分降低(P＜0.05),脑梗死体积减少(P＜0.05),纹状体p-DARPP-32-Thr75/DARPP-32比值增高(P＜0.05).结论 电针“曲池”和“足三里”穴可改善MCAO大鼠神经功能缺损症状,其机制可能与促进缺血纹状体的DARPP-32在Thr75位点的磷酸化有关.
关键词： 脑缺血 电针 DARPP-32 p-DARPP-32-Thr75 -
DARPP-32在小鼠肾脏中的表达分布
目的研究DARPP-32在小鼠肾脏组织的表达和分布.方法免疫印记和免疫组化方法检测DARPP-32在小鼠肾脏组织的表达和分布.结果在小鼠组织中,抗DARPP-32多克隆抗体可检测到32×103蛋白的表达;DARPP-32染色阳性细胞位于髓质远曲小管、皮质层近曲小管及髓放射区集合管.结论DARPP-32很可能是多巴胺调节肾脏钠离子重吸收的一个重要中间环节.
