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5-HT3/4受体在内源性多巴胺调节胃动力中的作用
目的 研究5-HT3/4受体在内源性多巴胺调节胃动力中的作用,探讨帕金森病(Parkinson's disease, PD)胃轻瘫发病的可能机制.方法 用6-羟多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损毁大鼠中枢黑质多巴胺能神经元,建立此模型.采用实时荧光聚合酶链反应法(Real-time PCR)和蛋白免疫印记法(Western blotting),检测5-HT3/4受体在6-OHDA 处理模型大鼠胃体的表达.采用Power lab生物信号采集系统记录离体大鼠胃体纵行肌的收缩活动.结果 在基础状态下,6-OHDA 处理模型组大鼠离体胃体纵行肌的收缩强度明显弱于对照组.加入5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)后,6-OHDA 处理模型大鼠肌条的收缩强度上升幅度明显小于正常对照组.Real-time PCR结果显示6-OHDA 处理模型大鼠胃体5-HT3/4受体的基因表达水平显著高于正常组大鼠.Western blotting结果显示6-OHDA 处理模型大鼠胃体5-HT4受体蛋白水平下调,5-HT3受体蛋白水平变化不明显.结论 损毁中枢黑质多巴胺能神经元可引起外周胃肠道内源性多巴胺(dopamine,DA)含量升高,胃动力减弱,5-HT4受体蛋白水平下调.6-OHDA 处理模型大鼠胃动力减弱可能与5-HT4受体蛋白水平下调有关.
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神经毒素诱导帕金森病动物模型的概述
帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种常见的神经系统退行性疾病，其主要的病理改变为黑质多巴胺能神经元的进行性丢失、纹状体多巴胺的耗竭和残留的神经元胞浆中路易小体的形成，但其确切病因仍未明确。目前对帕金森病病因和病理生理机制的认知，主要来源于对PD动物模型的深入研究。为进一步研究PD，该文对目前常用的神经毒素诱导的PD动物模型进行概述,为相关研究者选择合适的动物模型提供一定依据。
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不同剂量尿酸保护性治疗帕金森病大鼠对炎性因子、肾、关节及血管内皮的影响
目的 探讨不同剂量尿酸对帕金森病大鼠炎性因子、肾、关节及血管内皮的影响.方法 将30只SD大鼠分为5组,分别予生理盐水、尿酸50、100、200、400mg/kg连续腹腔注射10天,每天2次.于第5天第1次腹腔注射生理盐水和尿酸后,右侧纹状体缓慢注入6-OHDA,建立帕金森病大鼠模型.于第5、10天第2次注射后1h采取尾静脉血;于第10天采血后处死大鼠,迅速取脑、肾、踝关节、颈总动脉、腹主动脉.分别检测血、组织上清液的CRP、IL-6、TNF-α和肌酐.结果 (1)CRP、IL-6、TNF-α和肌酐:血浆和组织上清液的CRP、IL-6、TNF-α水平各组之间比较无统计学差异,血浆肌酐400mg/kg组较生理盐水组显著升高(P＜0.05).(2)病理HE染色:400mg/kg组肾脏轻度损伤改变,其余各组病理正常;踝关节各浓度组滑膜均无明显炎症改变;颈总动脉和腹主动脉各浓度组均无明显动脉粥样硬化和炎症改变.结论 适当尿酸水平的提高对6-OHDA-PD大鼠肌酐、CRP、IL-6、TNF-α及肾脏、关节、动脉血管无明显影响.
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6-OHDA单侧两点损毁建立PD模型
目的：建立一种稳定的帕金森大鼠模型制备方法，并对其进行评价。方法：利用脑立体定位仪在大鼠单侧前脑内侧束及黑质注射6-羟多巴胺（6-OHDA）溶液（12μg?4μL-1），两周后，腹腔注射阿扑吗啡(APO)(1mg?kg-1)，观察大鼠旋转情况，以向健侧、首尾相接、环曲360°计一圈，记录5min，若>7r?min-1（完全毁损）视为建模成功；若<7r?min-1（部分毁损）及15min无旋转或向损毁侧旋转均视为建模失败。结果：建立成功PD模型，成功率为27.5％。结论：6-OHDA单侧两点法是一种稳定的建立大鼠PD模型方法。
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肠系膜上静脉注射6-OHDA对大鼠血糖的影响
目的 探讨大鼠肠系膜上静脉注射6-羟多巴胺(6-OHDA)对血糖水平的影响,为能量代谢神经调节机制的研究提供实验依据.方法 采用肠系膜上静脉注射6-OHDA的方法建立去交感神经状态动物模型(试验组N=30),设假手术组(N=30)和未施加任何干扰因素的对照组(N=30).观察大鼠进食、大小便等状况,用血糖仪检测各组大鼠0 d、7 d、14 d、21 d、28 d空腹血糖水平,用电子称称取术后各组大鼠各时间点的空腹体重.结果 试验组大鼠空腹血糖和体重与假手术组和对照组比较均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 6-OHDA可起到明显的化学性去交感神经效果,交感神经的存在与否对大鼠血糖水平具有显著影响.
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Synphilin-1 siRNA对6-OHDA诱导的帕金森病大鼠黑质神经保护作用的研究
加.结论:Synphilin-1在6-OHDA诱导的PD大鼠黑质神经元损伤机制中起一定作用,synphilin-1 siRNA具有神经保护作用,能为帕金森病的治疗提供新的思路和方法.
关键词： Synphilin-1 siRNA 6-OHDA 帕金森病 大鼠 -
松果菊苷对6-OHDA帕金森病模型大鼠海马α-Synuclein、β-actin蛋白表达影响随机平行对照研究
[目的]观察松果菊苷对6-OHDA帕金森病模型大鼠海马α-Synuclein、β-actin蛋白表达影响.[方法]使用随机平行对照方法,将72只SPF级SD雄性大鼠适应性饲养14d,按随机数字表法分为6组,空白对照组、假手术组、模型组、松果菊苷(低、中、高剂量)组,12只/组.各组大鼠腹腔注射10％水合氯醛(30mg/kg)麻醉,固定于颅脑定位仪,消毒,沿颅顶正中线切开皮肤,钝性分离颅骨外膜,暴露大鼠颅骨前囟门;以前囟为坐标原点(大鼠脑定位立体图谱),确定前脑内侧束(MFB)坐标,MFB:前囟后4.8mm,矢状缝右侧1.2mm,硬脑下7.8mm;颅骨钻钻孔,立体定向靶点微量注射6-OHDA(2ug/uL,溶于0.1％抗坏血酸生理盐水),注射速度1uL/min,留针15min;骨蜡封闭大鼠脑部颅骨孔,消毒缝合皮肤,复制帕金森病模型,松果菊苷(低、中、高剂量)组(8 ug)、模型组(2ug);空白对照组、假手术组(与模型组等量生理盐水).灌胃干预:复制成功模型,松果菊苷组(低20mg/kg、中40mg/kg,高80mg/kg),余各组均等体积生理盐水,1次/d,连续10d.PAGE胶蛋白电泳;免疫印迹(Western Blot,WB)法检测α-Synuclein、β-actin蛋白.[结果]模型复制48只大鼠,麻醉过度死亡3只,模型复制不成功2只,终纳入结果分析43只,模型组10只,松果菊苷组低、中、高剂量组各11只.α-Synuclein蛋白水平假手术组、松果菊苷各组(低中高)均低于空白对照组(P＜0.01);β-actin各组间无明显差异(P＞0.05);α-Synuclein/β-actin假手术组、松果菊苷低剂量组、松果菊苷中剂量组、松果菊苷高剂量组均低于空白对照组(P＜0.01).[结论]松果菊苷干预帕金森病模型大鼠,可降低海马α-Synuclein表达.
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神经毒素6-OHDA干预后星形胶质细胞铁转运蛋白表达的变化
背景：前期的研究已经证实，在神经元和小胶质细胞中，神经毒素6-OHDA能够增加铁转入蛋白DMT1的表达，减少铁转出蛋白FPN1的表达，可能导致帕金森病黑质铁的沉积。然而，6-OHDA能否在星形胶质细胞中发挥不同的作用尚不明确。
目的：观察6-OHDA作用于C6神经胶质瘤细胞(大鼠星形胶质细胞株)后，铁转运蛋白DMT1和FPN1表达变化。
方法：培养大鼠星形胶质细胞C6细胞，加入10μmol/L 6-OHDA培养24 h， Western blots法检测6-OHDA干预后DMT1和FPN1蛋白表达。
结果与结论：用10μmol/L 6-OHDA作用于大鼠C6星形胶质细胞24 h后， Western blots检测结果显示DMT1蛋白表达升高了2.5倍(P <0.01)，FPN1蛋白表达升高了1倍(P <0.05)。提示，6-OHDA 通过同时增加铁转运蛋白DMT1和FPN1表达促进铁运速率，星形胶质细胞对6-OHDA 的反应与神经元和小胶质细胞不同。 -
6-OHDA诱导PD大鼠黑质神经细胞凋亡的观察
目的探讨帕金森病发病过程中黑质神经元的缺失形式.方法将6-OHDA立体定向微量注射于右侧内侧前脑束(MFB)制备PD大鼠模型,观察大鼠的行为改变,并运用特殊染色,DNA原位末端标记技术检测黑质内多巴胺(DA)神经元凋亡的发生及其变化规律.结果成功复制出符合临床特点的PD大鼠模型,且旋转行为与黑质区神经元数目呈反变关系,损伤侧黑质DA神经元存在着细胞凋亡,以术后两周明显.结论 6-OHDA诱导的PD大鼠SNc中存在以凋亡为主的死亡方式,细胞凋亡在PD发病中可能起关键作用.
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外源性Nurr1基因过表达促进6-羟基多巴胺诱导的SK-N-SH细胞凋亡
目的研究Nurr1 基因过表达在6-羟基多巴胺(6-OHDA)选择性诱导多巴胺(DA)能神经元特异性损伤中的作用. 方法①不同浓度6-OHDA作用不同时间,比较细胞形态;②细胞经6-OHDA作用后,经流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布比例;③不同浓度6-OHDA作用不同时间,经AnnexinV/PI 双染后,运用共聚焦显微镜观察细胞凋亡情况,获得毒素诱导凋亡的适剂量(75μmol/L)和时间(12 h),运用FCM检测两株细胞早期凋亡比例. 结果①经6-OHDA处理后,倒置相差显微镜观察,结果显示SK-N-SH/Nurr1细胞形态损伤早于SK-N-SH细胞,且损伤程度明显;②细胞周期结果显示,6-OHDA诱导SK-N-SH细胞G2/M期细胞比例下降,而SK-N-SH/Nurr1细胞S期细胞比例下降;③经AnnexinV/PI双染联合FCM检测早期凋亡比例结果显示,SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡比例明显高于SK-N-SH细胞(P＜0.05).结论外源性Nurr1基因过表达促进了6-OHDA 诱导的SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡,Nurr1可能与SK-N-SH/Nurr1细胞对6-OHDA损伤敏感性增强有关.
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经颅重复性磁刺激后大鼠纹状体FOSB蛋白的表达
观察经颅重复性低频磁刺激(rTMS)对大鼠纹状体FosB蛋白表达的影响.6-OHDA单侧损毁纹状体边缘区,磁刺激器给予大鼠头部1 Hz,100 mT的重复性刺激,14 d后用免疫组织化学ABC法检测纹状体FosB免疫阳性产物.rTMS后能够引起大鼠纹状体区域明显的FosB蛋白表达,这种表达广泛分布于尾壳核及苍白球,尤以腹侧纹状体及尾侧的壳核明显.6-OHDA损毁后予以rTMS,损毁侧FosB蛋白表达未出现减少,且尾壳核的背外侧部表达明显上调.对照组动物仅损毁侧有少量的FosB表达外,纹状体内未见FosB阳性标记.经颅重复性低频磁刺激能够激活纹状体内神经元,推测rTMS可能在增加多巴胺释放的同时,又能够激活多巴胺受体的活性,故在帕金森病等的治疗上有一定的意义.
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不同脑区注射6-羟基多巴胺制备帕金森病动物模型的方法
帕金森病是中老年人常见的中枢神经系统退行性疾病,6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)建立的模型是目前国内外公认的、可靠的PD模型.本文拟就6-OHDA建立PD模型脑内注射的方法、靶点的选择进行综述.
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左旋千金藤啶碱D1激动作用增加6-OHDA损毁大鼠的DARPP-32磷酸化效应
为了进一步阐明SPD对大鼠纹状体突触后D1受体的激动作用特性,本文应用反磷酸化在体内测定及放射配体结合方法,分别观察SPD对6-OHDA损毁大鼠纹状体DARPP-32体内磷酸化作用及突触后D1受体密度的影响.结果表明:皮下给予SPD(20,40 mg/kg,21 d),损毁侧纹状体DARPP-32体外[32P]的掺入量较健侧下降50%(P<0.01).换言之,损毁侧纹状体内DARPP-32的磷酸化程度增加了.然而,SPD使损毁导致D1受体上调的作用减弱(Bmax 从385.0±26.1 fmol/mg 降至319.7±20.1 fmol/mg水平).因此,SPD激动D1受体,使6-OHDA损毁大鼠纹状体内DARPP-32磷酸化作用加强,而受体密度减少.这是SPD调节脑内D1受体信号转导功能的重要机制.
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侧脑室注射6-OHDA对寒冷应激诱导的大鼠血浆ACTH含量的改变
目的观察侧脑室注射6-OHDA对4℃寒冷应激诱导的血浆ACTH含量的改变.方法成年Wistar雄性大鼠30只,随机分成5组(n＝6),分别为空白对照组、寒冷应激组、6-羟基多巴胺(6-OHDA)非应激组、6-OHDA+寒冷应激组、配药液+寒冷应激组.所有动物处理后立即取静脉血用放射免疫法测定其血浆ACTH含量.结果 4℃寒冷应激4h后血浆ACTH含量明显升高,与正常对照组相比有明显差异(P<0 .01):6-OHDA侧脑室注射后再寒冷应激,血浆ACTH含量不再明显升高.结论寒冷应激可能通过脑内儿茶酚胺能系统调控HPA轴的活性.
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芍药苷对6羟基多巴胺诱导的PC12细胞损伤的保护作用研究
目的 探讨芍药苷(PF)对6羟基多巴胺(6-OHDA)损害的PC12细胞的保护作用.方法 检测各组6-OHDA诱导PC12损伤细胞相对存活率和乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用免疫荧光和免疫印迹技术检测PC12细胞α-突触核蛋白(α-syn)、自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ、p62)以及酸敏感离子通道(ASIC1a)的蛋白水平.结果 与正常对照组比较,6-OHDA组相对细胞存活率显著下降,LDH活性显著升高(均P<0.01).与6-OHDA组比较,PcTx1组、阿米洛利组、PF各亚组相对细胞存活率均显著升高,LDH活性显著降低(P<0.05～0.01).与正常对照组比较,6-OHDA组ASIC1a蛋白水平显著升高(P<0.01).与6-OHDA组比较,PcTx1组、阿米洛利组、PF各亚组ASIC1a蛋白水平均显著降低(P<0.05～0.01).与正常对照组比较,6-OHDA组α-syn、LC3-Ⅱ、p62蛋白水平均显著增加(均P<0.01).与6-OHDA组比较,PcTx1组、阿米洛利组、PF各亚组α-syn、LC3-Ⅱ、p62蛋白水平均显著降低(P<0.05～0.01).结论 PF可能通过提高α-syn的自噬性降解,对6-OHDA毒素损害的PC12细胞起到保护作用.PF的神经保护作用可能与抑制ASIC1 a的活性有关.
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樟芝多糖对6-OHDA构建的帕金森小鼠模型的行为及抗氧化损伤/抗炎能力的影响
目的 探索樟芝多糖对于6-OHDA诱导的的帕金森小鼠脑组织抗氧化/抗炎能力及行为学的影响.方法 6-OHDA毁损内侧前脑束构建帕金森小鼠模型,小鼠分组为正常组、模型组、给药组(50,100,200 mg·kg-1)组,均为腹腔注射给药.游泳实验和水迷宫实验观察行为学变化,Elisa法检测纹状体GSH-Px、SOD、CAT、LDH、MDA含量和炎症因子IL-6、IL-1β表达.结果 与模型组相比,给药组小鼠的GSH-Px、SOD、CAT、LDH显著上升,MDA、IL-6和IL-1β显著下降,小鼠的认知、行动能力得到明显的改善.结论 樟芝多糖可以一定程度上改善帕金森小鼠行为,其原因可能与多糖具有抗氧化、抗炎的作用有关,多糖可以提高脑组织抗氧化能力,减少炎症因子表达.
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鞘内注射6-羟多巴胺、α1受体拮抗剂对氯胺酮脊髓镇痛作用的影响
目的在体探讨脊髓去甲肾上腺素(NE)能神经元α1受体和氯胺酮(Ket)脊髓镇痛的关系.方法用热水甩尾法观察鞘内注射(ith)氯胺酮50、100、200 μg对小鼠甩尾潜伏期(TFL)的影响.并观察鞘内分别预先注射 6-羟多巴胺(6-OHDA,6 μg)、α1受体拮抗剂哌唑嗪(Pra,5、15 μg)或特拉唑嗪(Ter,5、15 μg )对Ket(100 μg,ith)脊髓镇痛的影响.结果 Ket(50 μg,ith)对小鼠TFL无影响(P>0.05),而Ket(100、200 μg ,ith)可剂量依赖性地延长小鼠TFL(P<0.05).鞘内单独注射6-OHDA、Pra或Ter对小鼠的痛阈无影响(P>0.05).ith 5 μg Pra或Ter对Ket脊髓镇痛无影响(P>0.05),而ith 6-OHDA 、15 μg Pra或Ter则可明显减弱Ket脊髓镇痛(P<0.05).结论脊髓是Ket的镇痛部位之一,Ket脊髓镇痛和脊髓NE神经元α1受体有关
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MANF减轻帕金森病大鼠模型的神经损伤
目的 观察中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(MANF)对6-OHDA引起的多巴胺能神经元损伤的影响.方法 表达纯化人重组MANF蛋白;将6-OHDA立体定位注射至大鼠纹状体区,制备大鼠帕金森模型;将3个剂量(5、10、20 μg)纯化的MANF注射至模型大鼠纹状体区,腹腔注射司来吉兰作为阳性对照,纹状体直接注射PBS作为阴性对照;计数大鼠给药前后由阿扑吗啡诱导的由损伤侧向健侧不对称的旋转次数;免疫组化方法检测各大鼠黑质、纹状体部位酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元和神经纤维.结果 10 μg MANF组大鼠的旋转行为较PBS组明显减少,效果与司来吉兰组相近.MANF注射后对黑质部位TH阳性神经元数量和纹状体部位TH阳性神经纤维数量均有不同程度的明显恢复.结论 MANF能减轻6-OHDA引起的帕金森模型大鼠的神经损伤.
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帕金森病肠功能分析及 CXCR4在肠神经系统中的表达
目的：研究帕金森病（ PD）大鼠肠功能的改变，探讨趋化因子CXCL12受体CXCR4在肠神经系统中的功能及作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为6-OHDA组和对照组。6-OHDA组经6-OHDA脑内定点注射建立PD动物模型，建模4周后收集两组大鼠1 h粪便排出量，计算粪便含水量。利用免疫荧光染色法检测胃肠神经细胞CXCR4表达的变化。结果与对照组相比，6-OHDA组大鼠1 h粪便排出量及含水量明显降低（P＜0．01），而且胃肠神经组织中CXCR4阳性细胞数量明显减少，但荧光强度显著增强（P＜0．01）。结论 PD大鼠胃肠神经系统中CXCR4表达水平降低与其胃肠功能障碍密切相关。
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立体定向下黑质毁损偏侧帕金森病恒河猴模型的制作与评价
目的 建立立体定向手术下6-OHDA黑质毁损的帕金森病恒河猴模型并建立客观评估体系.方法 实验用恒河猴5只,在立体定向技术下以6-OHDA对恒河猴右侧黑质进行7个靶点的毁损,术后2周、2、4、6个月进行行为学评分量化,于术后7个月以SPECT检测恒河猴双侧纹状体DAT的代谢来判断毁损侧DA代谢减少程度,术后8个月以TH免疫荧光法检测恒河猴双侧黑质的DA能神经元改变,以此来证实黑质的毁损程度.结果 术后7个月SPECT检测显示毁损侧纹状体区DA代谢仅为对侧的10%～25%左右,术后8个月双侧黑质的TH免疫荧光检测显示毁损侧黑质DA能神经元减少70%以上.结论 立体定向技术下6-OHDA单侧恒河猴黑质毁损方法能够成功的制作符合人类病理特征的帕金森病模型.SPECT是评价模型制作成功与否的客观手段.
