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逆转录聚合酶链反应在轮状病毒肠炎诊断中的应用研究
1.材料与方法:150份粪便标本于1999年11月至2000年2月取自本院住院的急性腹泻患儿.150例患儿年龄为40天龄～2岁;病程1～14天.收集每例腹泻患儿的新鲜粪便标本2份,1份立即进行乳胶凝集试验,1份置于-20℃冰箱待行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.RT-PCR参照Taniguchi等[1]的方法抽提RNA并做HRV RT-PCR反应,引物由上海生工合成.
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伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中的表达与gE乳胶凝集鉴别诊断方法的建立
将伪狂犬病病毒(PRV)Ea株gE基因主要抗原表位区段融合到原核表达载体pET28b的T7启动子下游,构建成原核表达质粒,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blot印迹分析,证实gE基因主要抗原表位区在大肠杆菌中获得了表达,表达产物具有抗原性,分子量为38kD,位于包涵体中.包涵体经变性、复性处理,复性产物致敏乳胶,并对抗原致敏浓度、致敏时间、致敏温度进行优化,建立了gE乳胶凝集试验(gE-LAT).该方法不仅能显著区分gE基因缺失疫苗免疫猪血清和野毒感染猪血清,而且具有简便、快速等优点.检测临床360份猪血清,阳性率为57.78%(208/360),比国外阻断gE-ELISA的58.06%(209/360)略低,阳性符合率为94.86%(203/214),总符合率为96.94%(349/360),两种检测方法结果差异不显著(P＞0.05).
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临床免疫实验误差原因分析及解决方法
临床免疫实验室是检测传染性肝炎、性病、风湿病等多项检验的实验室，其检测结果直接为临床提供确诊依据，但由于多种原因致实验结果误差，给临床工程带来很多麻烦，是造成临床误诊误治和引起医疗纠纷的主要原因之一。为此笔者作了一些比较试验和临床调查，总结一下引起误差的原因和解决方法。常用的临床免疫实验方法有酶联免疫吸附试验、乳胶凝集试验、金标检测技术和免疫渗滤等等。大型综合性医院仪器设备比较先进，自动化程度高，而且大都参加全国或全省质量控制评比，相对误差比较小。但大多的中、小型医院很少注重质量质控工作或只是走走形式，没有严格控制临床实际标本误差的允许范围，致使误差增大，引起检测结果的不准确。 酶联免疫吸附试验是临床免疫应用广泛的试验方法。尽管目前试剂大都是由生物技术和基因工程生产的，具有很高的特异性，但由于试验方法不当也会造成误差，为了查找误差原因，我们作了一些对比试验：①对比自动化仪器操作和正确的手工操作；②对比正确的手工操作和非正确的手工操作。结果发现：自动化仪器结果误差小；正确的手工操作误差较自动化仪器大一些，但是在允许误差范围之内，而非正确的手工操作，其误差非常大，明显超出允许误差范围，是引起错误结果的主要原因。酶联免疫试验与其他试验所不同的是它有洗板过程：包括冲板力度、浸泡时间、孵育温度等等。那么冲力过大会造成本底丢失，引起假阴性结果，浸泡时间过短，洗脱不充分或冲力过大致洗液外溢，造成交叉污染，则会引起假阳性结果。另外试剂的质量、试剂中反应物质的含量也是引起误差的原因之一，如果试剂反应物质配比不合适，敏感度不同也可以引起假阴性和假阳性结果。我们曾作过不同试剂的对比：同一批号的质控血清两种不同试剂，其吸光度值相差10倍。因此在试剂选择上也要认真对待，选择有批准文号，临床标本具有一定梯度，敏感度高、稳定性好的试剂。
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经输血传播疾病的实验室检测及其进展
目前，已知的输血传播疾病有十几种，其中主要有乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病（AIDS）、梅毒、人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ/Ⅱ型（HTLV-Ⅰ/Ⅱ）感染和巨细胞病毒感染（CMV）等。目前，大多数国家已规定必须对献血者及血液筛查这6种病原体。现就目前这几种主要输血传播疾病的实验室检测及其新进展情况作一概述。 一、血清免疫学检测 1.乙型肝炎病毒(HBV)感染检测［1］: 对献血者HBV感染的检测，大多数国家通常只检测HBV表面抗原(HBsAg)。检测HBsAg方法有间接免疫凝集试验，如间接血凝试验（IHO）、乳胶凝集试验等，敏感性为10～100 μg/L，不适合对献血者的筛查。随着敏感性可达0.1～1.0 μg/L的酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫试验（RIA）的建立，尤其是ELISA具备试剂稳定、无危险无污染、可自动化等优点，现已经成为各国规定的用于献血者检测的标准方法。由于单克隆抗体技术的发明、基因工程表达抗原、人工合成多肽和新的标记技术的应用，以及自动化检测设备的发展，ELISA检测的敏感性和特异性得到极大提高。
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非获得性免疫缺陷综合征患者肺隐球菌病42例影像学特征及诊断方法
目的 提高非AIDS肺隐球菌病(PC)的临床诊断水平.方法 收集2003-2008年复旦大学附属中山医院呼吸科确诊的42例非AIDS的PC资料,总结分析其临床表现、胸部CT征象和诊断方法 .结果 42例非AIDS的PC患者均无禽鸟或其粪便接触史,免疫健全者占71.4%(30/42).影像学以多发性结节病灶(67.9%)常见,胸膜下分布为主(67.9%),可伴空洞形成(50%).亦可见团块和(或)实变(31.4%)或斑片(2.9%)病灶.无创检查如痰、支气管肺泡灌洗液(BALF)、支气管镜吸出物阳性检出率分别为4.3%、8.3%、6.3%,有创检查包括经支气管镜肺活检、经皮细针穿刺肺活检、手术切除肺组织活检阳性检出率则分别达64.7%、64.3%、100%.14例经病理或培养确诊的PC,同时行血清乳胶凝集试验,结果均阳性.结论 PC在免疫健全者中常见.禽鸟或其粪便接触史对此病的鉴别诊断意义不大.影像学表现多样化且变化较慢,除胸膜下多发性结节外,尤其应警惕团块和(或)实变或斑片表现.创伤性检查如经支气管镜或经皮肺穿刺活检可提高非手术病例的临床诊断率.血清隐球菌抗原检测是PC较理想的早期无创性诊断及病情随访和疗效评价的重要手段之一.
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头孢西丁检测耐苯唑西林金黄色葡萄球菌
目的评价头孢西丁纸片扩散试验检测耐苯唑西林金黄色葡萄球菌(ORSA)的临床应用价值.方法用头孢西丁和苯唑西林纸片扩散试验、苯唑西林琼脂筛选试验检测临床分离的186株金黄色葡萄球菌.结果82株PBP2a阳性金黄色葡萄球菌中,头孢西丁纸片法、苯唑西林纸片法和苯唑西林琼脂筛选法分别检出ORSA81、77株和78株;104株PBP2a阴性中,头孢西丁纸片法全部为阴性,苯唑西林纸片法和苯唑西林琼脂筛选法阴性为101株和103株;以ORSA-乳胶凝集试验结果为参考标准,头孢西丁纸片法、苯唑西林纸片法和苯唑西林琼脂筛选法检测ORSA的特异性分别为100%、97.1%和99.0%,敏感性分别为98.8%、93.9%和95.1%.结论头孢西丁纸片扩散试验简便、价廉,不需要特殊的试验条件并能提高测定ORSA常规试验的可靠性,适用于临床实验室对ORSA的常规检测.
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4种不同方法检测梅毒螺旋体抗体的比较
目的对4种不同的梅毒螺旋体抗体检测方法进行比较,筛选高敏感性和特异性诊断方法和试剂. 方法采用快速血浆反应素试验(RPR);梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA);梅毒螺旋体特异性抗体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA);梅毒螺旋体特异性抗体乳胶凝集试验(TPLA)4种方法对76份可疑梅毒抗体阳性标本进行检测. 结果 RPR有一定假阳性和假阴性;TPPA敏感性稍差;TP-ELISA敏感性高. 结论 TP-ELISA敏感性高,适合大批献血员筛查;TPLA与其他方法的检测结果符合率高,且操作简便,适合作确认试验.
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血清乳胶凝集试验对肺隐球菌病诊断的荟萃分析
目的：采用荟萃分析的方法评价血清乳胶凝集试验对肺隐球菌病的诊断价值，为临床早期诊断提供参考依据。方法通过计算机检索、中国知网、万方、维普和中国生物医学文献数据库，筛选出有关血清乳胶凝集试验诊断肺隐球菌病的研究，检索日期从建库开始截止至2015年8月，采用 QUADAS 量表对纳入的文献进行质量评价，使用荟萃 Disc 1．4软件检验异质性并合并各检验效应量，Stata 12．0软件检测发表偏倚。结果终纳入7篇文献；荟萃分析结果显示，灵敏度为0．81，特异度为0．99，阳性似然比为63．8，阴性似然比为0．22，诊断优势比为343．74，SROC 曲线下面积为0．997，Q 值为0．982。结论血清乳胶凝集试验诊断肺隐球菌病有较高的灵敏度及特异度，可作为早期快速诊断肺隐球菌病的重要方法。
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乳胶凝集试验检测肠道弯曲菌的临床价值研究
目的:探讨采用乳胶凝集试验检测肠道弯曲菌的临床价值.方法:对临床送检的373份粪便标本,先采用乳胶凝集试验直接检测,再将标本经48 h培养后的培养物采用传统方法进行鉴定,重点分析乳胶凝集试验直接检测的准确度、敏感度及特异性.结果:粪便标本直接检测结果与培养后鉴定结果比较,判定直接检测真阳性59例,假阳性2例,真阴性298例,假阴性14例；直接检测法准确度为95.7%,敏感度为80.8%,特异性为99.3%,阳性结果预示值为96.7%,阴性结果预示值为95.5%.结论:采用乳胶凝集试验直接检测肠道弯曲菌的临床应用价值较高.
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乳胶凝集试验对肺隐球菌病诊断价值的Meta分析
目的 目前肺隐球菌病的诊断缺乏金标准,本研究旨在评价乳胶凝集试验对肺隐球菌病的诊断价值,为临床提供参考.方法 检索中国知网、维普网、万方数据、Pubmed、EMbase、Web“Science、Sumsearch、TRIP、循证医学中心、CATbank、Cochrance组织、Evidence-baseed health、Netting the Evidence、社区预防服务指南、National Guide-line Clearinghouse等国内外数据库或搜索引擎,收集探索乳胶凝集试验对肺炎隐球菌感染诊断价值的诊断性研究,筛选、评价文献并提取数据进行Meta分析,计算灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比以及诊断优势比等指标.结果 本次研究共检索到287篇相关文献,终共纳入7个文献,其中5篇研究来自中国,2篇来自日本;发表时间从1993-2012年;共计686例研究对象,其中肺隐球菌病152例,非肺隐球菌病534例.采用QUADAS评分标准评价纳入文献的方法学质量,纳入的7篇文献QUADAS评分均≥9分.使用Rev-Man 5.3软件进行数据分析,分析乳胶凝集试验诊断肺隐球菌病的临床价值.7篇文献的灵敏度为60.00％～ 100.00％,P＜0.000 1,各研究的灵敏度之间存在统计学异质性,特异度为85.71％～ 100.00％,P＜0.000 1,各研究的特异度之间存在统计学异质性.Meta分析结果显示,乳胶凝集试验诊断肺隐球菌病的合并灵敏度为0.80 [0.72,0.86],合并特异度为0.99[0.98,1.00].结论 Meta分析结果证明,乳胶凝集试验对肺隐球菌病具有很高的诊断价值.
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不同荚膜抗原检测方法对隐球菌脑膜脑炎诊断和疗效评估的价值
目的 评价胶体金免疫层析、乳胶凝集试验、酶联免疫分析3种隐球菌荚膜抗原检测方法在隐球菌脑膜脑炎患者诊断和疗效评估中的价值.方法 采用上述3种方法对2012年10月至2015年3月在浙江大学附属邵逸夫医院住院确诊的57例颅内感染患者的脑脊液标本进行荚膜抗原检测,评估其对隐球菌脑膜脑炎的诊断价值;采用乳胶凝集试验、酶联免疫分析方法分别对10例患者脑脊液荚膜抗原进行动态监测,评估治疗期间脑脊液荚膜抗原水平与疗效的相关性.结果 胶体金免疫层析法和乳胶凝集试验对隐球菌脑膜脑炎诊断的敏感度均为95％,特异度均为100％;酶联免疫分析法诊断的敏感度及特异度均为100％;隐球菌脑膜脑炎患者脑脊液荚膜抗原水平随着患者疾病好转逐渐下降.结论 3种方法检测隐球菌荚膜抗原对隐球菌脑膜脑炎患者均具有重要诊断价值,其敏感度和特异度均在95％以上.胶体金免疫层析法适用于隐球菌脑膜脑炎患者的快速诊断;脑脊液隐球菌荚膜抗原水平的动态监测对其疗效观察有参考价值.
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血清乳胶凝集试验对肺隐球菌病的临床诊断价值
目的 评价乳胶凝集试验检测血清隐球菌荚膜多糖抗原对肺隐球菌病的临床诊断价值.方法 2000年7月至2007年7月期间,根据临床表现及影像特征,疑诊肺部隐球菌感染的患者27例,全部进行血清乳胶凝集试验和肺活检组织病理检查.结果 经病理证实肺隐球菌病9例,乳胶凝集试验全部阳性,非隐球菌感染患者18例,乳胶凝集试验全部阴性.乳胶凝集试验的敏感性和特异性均为100%.结论 血清乳胶凝集试验对肺隐球菌病具有很高的诊断价值.
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乳胶凝集试验对小儿新型隐球菌脑膜炎诊断及治疗的应用探讨
目的 探讨乳胶凝集试验对小儿新型隐球菌性脑膜炎的临床诊疗价值.方法 对我院儿科近3年确诊的15例新型隐球菌脑膜炎患儿相关临床资料进行回顾性分析,包括颅脑CT、脑脊液墨汁染色及乳胶凝集试验等检查结果在治疗前后的变化.结果 治疗前,乳胶凝集试验对小儿新型隐球菌脑膜炎诊断阳性率86.7％(13/15)高于颅脑CT 20.0％ (3/15)和常规脑脊液墨汁染色40.0％(6/15),差异均有统计学意义(x2=13.393,P=0.001;x2=7.033,P=0.021);治疗后,乳胶凝集试验抗体滴度逐渐降低,并与颅脑CT以及脑脊液墨汁染色的转阴率变化在一定程度上具有一致性,但有3例患儿(20.0％)持续阳性.结论 乳胶凝集试验诊断小儿新型隐球菌脑膜炎的价值较高,但作为治愈指标的参考意义有限.
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类风湿因子检测中乳胶凝集试验与散射比浊法的对比研究
目的 国内常用检测类风湿因子(RF)的方法有散射比浊法和乳胶凝集试验.笔者对散射比浊法和乳胶凝集试验的相关性进行了对比研究.方法 对133例门诊及住院患者血清标本同时采用乳胶法和比浊法进行类风湿因子检测,并对测得的数据进行统计学处理.结果 散射比浊法、乳胶凝集法测定RF阳性率分别为15.0%和11.2%,前者与后者有显著性差异(P＜0.05),测定血清中RF的水平,散射比浊法比乳胶凝集法更敏感.结论 对散射比浊法和乳胶凝集试验进行对比研究后发现,散射比浊法优于乳胶凝集法.
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乳胶凝集试验快速诊断轮状病毒肠炎的临床应用
轮状病毒(RV)是婴幼儿腹泻的主要病原,常引起流行.笔者用乳胶凝集试验检查了常州市儿童医院122例秋季腹泻婴幼儿的粪便标本,同时与聚合酶链反应(PCR)检查结果进行了比较,认为该方法简便、快速、特异性强.报道如下.
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免疫比浊法和乳胶凝集法检测类风湿因子的比较
类风湿因子(rheumatoid factors，RF)是诊断类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的一个重要的实验室指标，其检测方法很多，国外主要采用比浊法［1］、酶联免疫法、放射免疫法等，国内仍普遍采用乳胶凝集试验(latex agglutination test，LAT)，此方法虽然操作简单，但敏感性差，受温度影响大，且只能进行半定量结果分析。本文采用免疫比浊法(immunoturbidimetric assay，ITA)测定了RA和其他结缔组织病(connective tissue disease，CTD)患者及正常人的血清RF含量，并同时与LAT进行比较，研究两种检测RF的方法在诊断RA中的敏感性和特异性，结果报告如下。
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早期梅毒实验诊断的对比研究
为了解早期梅毒可靠的诊断方法,我们对318例早期梅毒患者,进行了梅毒螺旋体暗视野检查、PCR法皮损与血清DNA检测,快速血浆反应素环状卡片试验(RPR),梅毒螺旋体被动乳胶凝集试验(TPHA)血清学检查对比研究,现将结果报道如下.
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3种梅毒血清学试验方法评价及临床应用
梅毒血清学初筛试验有TRUST KIT、USR(未加热的血清反应试验)及RPR(快速血浆试验)法,此3种方法均是环状卡片法,以TRUST KIT为代表.此外还有金标法和确诊试验TP@PA(梅毒螺旋体乳胶凝集试验)法,通过对这3种方法评价探讨临床应用意义.
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单增李斯特菌多克隆抗体制备及其在乳胶凝集试验中的应用
目的:制备高效价高纯度兔抗单增李斯特菌(LM)多克隆抗体,并初步探讨其在乳胶凝集试验(LAT)中的应用.方法:复苏并扩大培养LM标准菌株,制备灭活疫苗免疫家兔,采用ELISA法测定耳缘静脉血抗体效价.4次免疫后,颈动脉采血分离血清,采用辛酸-饱和硫酸铵法粗分离,经蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行IgG纯化,采用SDS-PAGE电泳、紫外分光光度法、间接ELISA法分别测定蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价.得到的高效价提纯IgG与乳胶微球进行共价偶联,并选择偶联乳胶的IgG含量及偶联时间等条件,建立快速检测模拟样品中LM的方法.结果:制备并纯化的兔抗LM IgG蛋白浓度为23.364 g·L-1,效价为1∶12 800～1∶25 600,与霍乱弧菌、沙门氏菌、志贺菌等多种菌均无交叉反应,与斯氏李斯特菌有弱交叉反应；致敏时IgG与乳胶微球偶联比率为1∶40;利用LAT方法检测246份样品,阳性检出率为87.5％,低检出抗原含量为0.039 8 g· L-1.结论:制备了高效价、高纯度的兔抗LM多克隆抗体；建立的LAT方法特异性强,敏感性较高,重复性好,便于基层推广使用,为LM的现场检测提供了一种新手段.
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快速乳胶凝集试验在检测外阴和阴道念珠菌感染的应用
目的评价快速乳胶凝集试验诊断阴道念珠菌病的价值.方法用乳胶凝集法对临床拟诊念珠菌感染的119例妇女阴道分泌物进行检测,同时与阴道分泌物直接镜检法和培养法相比较.结果凝集法对阴道念珠菌感染的检出率为58.8%,高于培养法(56.3%)和直接镜检法(31.1%). 与培养法比较,快速凝集法的诊断敏感性为89.6%,特异性为80.8%.结论凝集法能快速诊断外阴阴道念珠菌病.虽成本略高于直接镜检法和培养法,但凝集法能缩短检测时间,且操作简便,可对念珠菌感染做初步诊断.
