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不同产地白头翁中白头翁皂苷D的含量测定
目的:建立白头翁中白头翁皂苷D的含量测定方法.方法:采用HPLC测定白头翁皂苷D的含量,色谱条件为依利特Hypersil ODS2C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),流动相乙腈-水-甲酸(38∶62∶0.1),流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温25℃,考察不同产地白头翁中白头翁皂苷D的含量差异.结果:白头翁皂苷D线性范围0.3112～3.112 μg(r =0.9999),精密度RSD 1.36％,重复性RSD 1.65％,供试品溶液在24 h内稳定,平均加样回收率98.07％(RSD 0.64％).吉林产白头翁中白头翁皂苷D含量高(0.256％),比广东产白头翁高了约20倍.结论:该测定方法简便易行、结果准确、重复性好.不同产地的白头翁中白头翁皂苷D的含量差异较大,选用时应慎重.
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白头翁皂苷D与不同血浆蛋白的结合率测定
目的:研究白头翁皂苷D与不同血浆蛋白的结合率.方法:采用HPLC与平衡透析法相结合的方法测定白头翁皂苷D与牛血清、人血浆及大鼠血浆中蛋白的结合率,COSMOSIL 5C18-MS-Ⅱ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-水-甲酸(80∶20∶0.02),检测波长203 nm.结果:白头翁皂苷D质量浓度为0.06,0.11,0.25 g·L-1时与牛血清白蛋白的结合率分别为(78.45±0.89)％,(77.61±1.14)％,(77.16 ±0.29)％,与人血浆蛋白的结合率分别为(68.91±0.54)％,(67.68±0.87)％,(67.88±0.71)％,与大鼠血浆蛋白的结合率分别为(78.15±0.76)％,(78.61±0.97)％,(78.24±0.93)％.结论:建立的白头翁皂苷D蛋白结合率测定方法简便、稳定、可靠.白头翁皂苷D是一种中等程度的蛋白结合药物,结合率不具有质量浓度依赖性.
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HPLC测定白头翁皂苷D的油水分配系数及平衡溶解度
目的:测定白头翁皂苷D的油水分配系数及其在不同溶剂中的平衡溶解度.方法:采用摇瓶法与高效液相色谱法相结合测定白头翁皂苷D的油水分配系数,采用高效液相色谱法测定白头翁皂苷D在6种有机溶剂及不同pH缓冲液中的平衡溶解度.结果:白头翁皂苷D在不同pH条件下油水分配系数大于零,随着pH升高白头翁皂苷D的平衡溶解度逐渐增加,在不同溶剂中白头翁皂苷D的平衡溶解度以甲醇大(达到255.89 g·L-1),乙腈中小(0.20 g·L-1).结论:在胃肠生理条件下,白头翁皂苷D以分子状态形式存在,由lgPapp可知其吸收性较好,但水溶性较差,提示增加白头翁皂苷D的溶解度可能有利于提高其生物利用度.
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白头翁皂苷D诱导U87MG细胞凋亡
目的 探讨白头翁皂苷D对人脑胶质瘤细胞系U87的增殖抑制和促凋亡效应及其机制.方法 用MTT法检测细胞增殖抑制作用,并求得IC25、IC50和IC75,按浓度和时间分组,Annexin-Ⅴ/PI双染、流式细胞术和TUNEL/PI染色检测凋亡,Hoechst33342染色、透射电子显微镜、DNA-ladder检测细胞系改变,细胞免疫染色和Western blot检测相关凋亡蛋白表达.结果 白头翁皂苷D在14.016 nmol/mL下对U87MG抑制率为94.034％ (P ＜0.05);处理组细胞形态呈凋亡改变,细胞超微结构中发现自噬小体;处理组caspase-3、8 、Bax和FasL表达上调(P＜0.05),Bcl-2表达下调(P＜0.05).结论 白头翁皂苷D对U87MG细胞有呈时间和浓度依赖的增殖抑制作用,且通过FasL/Fas途径诱导其发生凋亡.
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UPLC-Q-trap-MS鉴定白头翁皂苷D在大鼠离体肠道菌群中的代谢产物
目的 鉴定白头翁皂苷D在大鼠离体肠道菌群体外代谢产物.方法 运用超高效液相色谱-三重四级杆线性离子肼复合质谱(UPLC-Q-trap-MS)分析白头翁皂苷D体外肠道菌群孵育样品,采用Analyst l.5软件进行数据处理,根据保留时间和各色谱峰质谱裂解规律,比较确定白头翁皂苷D在体外肠道菌群中代谢产物,同时根据质谱二级裂解规律对代谢产物结构进行推测.结果 在大鼠离体肠道菌群孵育样品中鉴定了白头翁皂苷D (M0)原型及常春藤皂苷元3-O-a-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(Ml)、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(M2)、常春藤皂苷元(M3)、白头翁皂苷D羟基化(M4)、白头翁皂苷D甲基化产物(M5、M6)、白头翁皂苷D脱氢产物(M7)等7个代谢产物.结论 白头翁皂苷D能够在大鼠离体肠道菌群中发生广泛的代谢.
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白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其机制研究
目的 探讨白头翁皂苷D体外抗肝癌作用及其相关机制.方法 采用MTT法考察白头翁皂苷D对人肝癌细胞BEL-7402增殖的影响,同时观察BEL-7402细胞形态的变化,采用集落形成实验考察白头翁皂苷D对BEL-7402细胞集落形成的影响;Hoechest 33342染色观察BEL-7402细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BEL-7402细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化;采用Western blotting法检测BEL-7402细胞Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果 MTT结果显示白头翁皂苷D对BEL-7402细胞增殖有抑制作用;集落形成实验结果显示白头翁皂苷D能明显抑制BEL-7402细胞集落的形成,白头翁皂苷D(25.00 μg/mL)能显著诱导BEL-7402细胞凋亡;白头翁皂苷D(18.75、25.00 μg/mL)能显著降低BEL-7402细胞线粒体膜电位;白头翁皂苷D(12.50、18.75、25.00 μg/mL)可显著上调BEL-7402细胞中Caspase-3的表达;白头翁皂苷D(25.00 μg/mL)可显著下调Bcl-2的表达.结论 白头翁皂苷D有良好的体外抗肝癌作用,其机制与调节线粒体途径凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3的表达有关.
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白头翁皂苷D在大鼠肠道的吸收行为研究
目的 考察白头翁皂苷D在大鼠肠道的吸收特性.方法 采用大鼠在体单向肠灌流模型考察白头翁皂苷D在大鼠肠道的吸收情况,HPLC法测定肠灌流液中的白头翁皂苷D,以白头翁皂苷D的吸收速率常数(K)和表观渗透系数(P‰)为指标,考察吸收部位、药物浓度、pH值和P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对白头翁皂苷D吸收的影响.结果 白头翁皂苷D灌流液在各肠段的Ka和Papp值为结肠＞回肠＞空肠＞十二指肠,且各肠段之间存在显著差异(P＜0.05);随着pH值不断增加,局Ka和Papp值也随之增加,且Ka疋和Papp均存在显著差异(P＜0.05);不同质量浓度(0.30、0.15、0.08 mg/mL)的灌流液在结肠的吸收无显著差异;灌流液中含P-gp抑制剂与不含P-gp抑制剂的白头翁皂苷D的肠吸收存在显著差异(P＜0.05).结论 白头翁皂苷D在大鼠各肠段均能较好地被吸收,吸收窗主要在结肠;一定范围内的药物质量浓度对白头翁皂苷D的Ka和Papp无明显影响,初步确定其吸收机制为被动扩散;白头翁皂苷D是P-gp的底物,且存在转运蛋白饱和现象.
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HPLC-ELSD法测定白头翁总皂苷碱水解产物中8种皂苷
目的 建立同时测定白头翁总皂苷碱水解产物中8种皂苷成分的HPLC-ELSD方法.方法 采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；流动相为甲醇-0.2％甲酸水溶液；柱温35℃；梯度洗脱条件:0～30 min,70％～100％甲醇；体积流量1.0 mL/min; ELSD气化室温度40℃；气体压力350 kPa.结果 白头翁皂苷D、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖、白头翁皂苷A、黑海常春藤苷A1、白头翁皂苷F、齐墩果酸3-D-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齐墩果酸3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷、齐墩果酸3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷进样量分别在0.799～4.568、0.563～6.756、0.431～2.683、0.894～7.826、0.643～7.504、1.351～7.822、0.629～2.515、0.698～2.794 μg,峰面积(A)的对数值lgA与相应质量(M,μg)的对数值lgM呈良好的线性关系(n=5),8种成分的平均回收率在99.0％～101.0％,且RSD值均小于1.5％.结论 本检测方法简便、准确,为白头翁总皂苷碱水解产物的质量控制提供了依据.
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白头翁皂苷D联合索拉非尼对人肝癌细胞转移的影响
目的：探讨白头翁皂苷D联合索拉非尼对人肝癌细胞株转移的影响。方法人肝癌细胞株BEL-7402细胞按干预方式不同分为白头翁皂苷D组（11.9 mg/L）、索拉非尼组（2.15μmol/L）、联合组（白头翁皂苷D 11.9 mg/L+索拉非尼2.15μmol/L）以及对照组（普通培养液）。通过MTT法、Transwell小室实验、细胞划痕实验观察白头翁皂苷D和索拉非尼单药和联合对BEL-7402细胞迁移的抑制作用，并用Western blot检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示，白头翁皂苷D、索拉非尼单药和联合对BEL-7402细胞的增殖均有抑制作用，且24 h的抑制率均<15%；Transwell小室实验和细胞划痕实验结果显示，联合组的迁移抑制率高于单药组（P<0.01），联合作用为相加（0.85≤联合效应≤1.15）；Western blot检测示联合组在下调MMP-2、MMP-9方面的作用强于单药组（P<0.05）。结论白头翁皂苷D和索拉非尼联合可协同抑制BEL-7402细胞转移，联合效果整体优于单药。
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人体肠道菌群对人参皂苷Rg3、白头翁皂苷D代谢转化的影响
目的 考察人体肠道菌群对人参皂苷Rg3、白头翁皂苷D代谢转化的影响.方法 分别采集肝癌患者与健康人体的新鲜粪便,经处理后分别与人参皂苷Rg3、白头翁皂昔D进行厌氧共孵育,UPLC-Q-TOF/MS法鉴定其肠菌孵育后的代谢产物差异,UPLC-QQQ-MS法检测原型及其代谢产物含有量随孵育时间的变化.结果 肝癌患者与健康人体肠道菌群的人参皂苷Rg3孵育液中均鉴定出了人参皂苷Rh2(脱糖基产物)、原人参二醇;肝癌患者肠道菌群的白头翁皂苷D孵育液中鉴定出了白头翁皂苷D脱鼠李糖产物、白头翁皂苷D脱葡萄糖产物、白头翁皂苷D羟基化产物、常春藤皂苷元,但健康人体肠道菌群的白头翁皂苷D孵育液中鉴定出了白头翁皂苷D脱鼠李糖产物、白头翁皂苷D脱葡萄糖产物、白头翁皂苷D脱鼠李糖和葡萄糖产物、白头翁皂苷D甲基化产物、常春藤皂苷元.人参皂苷Rg3、白头翁皂苷D在肝癌患者肠道菌群中的代谢速率显著低于健康人体,人参皂苷Rh2和常春藤皂苷元在肝癌患者肠道菌群中的生成速率显著低于健康人体.结论 在肝癌状态下,人体肠道菌群变化对人参皂苷Rg3、白头翁皂苷D代谢转化有显著影响.
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白头翁皂苷D抗肝癌作用的药效学研究
目的 研究白头翁皂苷D(毛茛科植物白头翁Pulsatilla chinensis (Bge.) Regel的干燥根)体内抗小鼠H22肝癌细和体外的抗人肝癌SMMC-7721作用.方法 在体外实验中,采用MTT法考察白头翁皂苷D对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;在体内实验中,采用小鼠H22实体瘤进行体内抑瘤实验,测定肿瘤生长抑制率,利用光镜(HE染色)、电镜等方法进行形态学观察.结果 白头翁皂苷D处理人肝癌SMMC-7721细胞24、48、72h后,给药组均出现了不同程度的细胞增殖抑制.白头翁皂苷D (4.5、6.0 mg/kg)对小鼠H22肝癌细胞实体瘤的生长有明显的抑制作用,抑瘤率分别为38.67％和41.59％(P＜0.01,与模型组比较).组织学观察显示,肿瘤细胞大量变性坏死,电镜下可见凋亡细胞和凋亡小体.结论 白头翁皂苷D具有一定的体内、外抗肿瘤作用.
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白头翁皂苷D抗肿瘤的研究进展
白头翁皂苷D是白头翁众多有效单体成分中在抗肿瘤方面研究广泛、效价高的单体,是近年来抗肿瘤药物研究的热点之一.白头翁皂苷D通过抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抑制能量代谢、调节自噬以及抑制肿瘤细胞迁移和转移等方面抑制肿瘤生存,现就近年来白头翁皂苷D抗肿瘤方面的相关研究进行综述.
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白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞中Wnt/β-链蛋白信号通路的影响
目的:研究白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制效应及其机制.方法:不同浓度的白头翁皂苷D作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h后,CCK-8法检测细胞生存抑制率;Hoechst法检测细胞核凋亡变化;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞内Wnt/β-链蛋白信号蛋白及下游组件蛋白CyclinD1和c-Myc的表达情况.结果:CCK-8法检测显示白头翁皂苷D可以抑制MCF-7细胞的增殖能力,细胞的生存抑制率呈药物浓度依赖性;Hoechst染色可见部分细胞核的形态发生改变,产生细胞核碎片,核发白等变化;与对照组比较,随着白头翁皂苷D浓度的增加,MCF-7细胞中β-链蛋白的蛋白表达量呈减少趋势;50 nmol·ml-1的白头翁皂苷D诱导组细胞中CyclinD1及c-Myc的蛋白表达量也明显减少(P<0.05).结论:白头翁皂苷D可有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-链蛋白信号通路的激活,并抑制其下游蛋白CyclinD1和c-Myc的表达有关.
关键词： 白头翁皂苷D MCF-7 Wnt/β-链蛋白信号通路 -
白头翁皂苷D联合索拉非尼对人肝癌细胞侵袭与转移的影响
目的：探讨白头翁皂苷 D联合索拉非尼对人肝癌细胞株侵袭和转移的影响。方法以人肝癌细胞株SMMC-7721细胞为研究对象，分为白头翁皂苷D组（浓度为11．9μg ／L）、索拉非尼组（浓度为2．15μmol／L）、联合组（白头翁皂苷D 11．9μg／L＋索拉非尼2．15μmol／L）以及对照组（普通培养液）。通过MTT法、Transwell小室实验观察白头翁皂苷D、索拉非尼单药和联合对SMMC-7721细胞的侵袭和转移的抑制作用，并用免疫组织化学方法检测CD44V6、血管内皮生长因子C（VEGF-C）、基质金属蛋白酶MMP-9基因蛋白表达的影响。结果 MTT结果显示，白头翁皂苷D、索拉非尼单药和联合对SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用，且24 h的抑制率都＜15％；Transwell小室实验结果显示，联合组的黏附抑制率与单药组相比，具有协同抑制作用，但未呈现时间依赖关系；联合组的侵袭抑制率和迁移抑制率均显著高于单药组（P＜0．01）；免疫组织化学结果表明，联合组在下调CD44V6、VEGF-C、MMP-9方面均高于单药组（P＜0．05）。结论白头翁皂苷 D和索拉非尼联合可协同抑制SMMC-7721细胞侵袭和转移，联合效果整体优于单药。
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白头翁皂苷D对乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用研究
目的 探讨白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞的体内外抗肿瘤作用及其机制.方法 采用MTT法和吉姆萨染色,考察白头翁皂苷D对人MCF-7细胞体外增殖抑制的影响;建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,考察白头翁皂苷D体内抗肿瘤作用;HE染色和透射电镜实验考察肿瘤组织形态学和超微结构的变化;采用Western Blot法检测MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3及PI3K/AKT/mTOR途径相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K的表达.结果 白头翁皂苷D可抑制MCF-7细胞的增殖,且呈剂量依赖关系;裸鼠体内实验结果显示白头翁皂苷D可抑制肿瘤的生长,30.0 mg·kg-1剂量组瘤体质量明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01);形态学观察结果也显示白头翁皂苷D对MCF-7细胞具有凋亡作用,且随着给药剂量的增加变化越明显;白头翁皂苷D(15.0,20.0,25.0μmol·L-1)不同剂量组均可抑制MCF-7细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达,与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);白头翁皂苷D还可下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路相关蛋白PI3K-p85、p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达,20.0,25.0μmol·L-1剂量组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 白头翁皂苷D对MCF-7细胞有显著的体内外抗肿瘤作用,其机制可能是通过下调PI3K/AKT/mTOR信号传导通路诱导细胞凋亡.
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白头翁皂苷D体外抗肺腺癌作用及其机制
目的 探讨白头翁皂苷D体外抗肺腺癌细胞A549的作用及机制.方法 采用MTT法、集落形成实验对白头翁皂D体外抗A549细胞活性进行研究;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;使用蛋白印迹法检测A549细胞中线粒体凋亡途径及PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白的表达.结果 白头翁皂苷D(20、40 μmol/L)体外可诱导肺腺癌细胞A549凋亡;蛋白印迹实验结果显示白头翁皂苷D(20、40 μmol/L)可下调线粒体凋亡途径相关蛋白bcl-2、caspase-3和PI3K/Akt/mTOR信号传导通路主要相关蛋白PI3K、p-Akt、p-mTOR和p-p70S6K的表达.结论 白头翁皂苷D有显著的体外抗肺腺肿瘤作用,其作用机制与下调线粒体凋亡途径和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达有关.
关键词： 白头翁皂苷D 肺腺癌 凋亡 细胞周期 PI3K-Akt-mTOR途径 -
HPLC-ELSD法测定白头翁中白头翁皂苷D的含量
目的：建立高效液相色谱-蒸发光检测法测定白头翁皂苷D含量的方法。方法 Hyperisil ODS2 C18柱（250 mm ×4．6 mm ，5μm），柱温30℃；流动相：甲醇-水-甲酸（72∶28∶0．1）；流速1 mL · min-1；Altech ELSD 3300检测器，雾化气流速1．3 L · min-1，漂移管温度为55℃。结果该方法的线性范围为0．1046～1．0460 mg · mL -1（r＝0．9992），平均回收率（n＝6）为101．0％（RSD＝1．6％），不同产地药材白头翁皂苷D差异性较大。结论该方法专属性强、准确、灵敏度高、重复性好，可用于白头翁中白头翁皂苷D的测定，对白头翁规范性种植具有指导意义。
关键词： HPLC-ELSD法 白头翁 白头翁皂苷D 含量测定
