首页 > 文献资料
-
益肺解毒汤对人肺腺癌A549细胞侵袭迁移的影响及相关机制
目的:观察益肺解毒汤对肺癌A549细胞侵袭转移的影响,并探讨该方对细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响及其作用机制.方法:常规培养肺癌A549细胞,CoCl2化学模拟肺癌A549细胞缺氧微环境,设空白组,以150μmol·L-1 CoCl2,150 μmol·L-1CoCl2+15 g·L-1益肺解毒汤,15 g·L-1益肺解毒汤处理细胞,镜下观察细胞形态学改变,transwell实验观察细胞侵袭能力;细胞划痕实验测细胞迁移能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定A549细胞上皮细胞-间充质转化(EMT)过程中上皮细胞、间质细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达,转录因子Snail蛋白表达,信号分子β-链蛋白(β-catenin)、磷酸化糖原合成酶激酶-3(p-gsk-3β)表达.结果:缺氧可诱导A549细胞发生形态改变,益肺解毒汤可抑制缺氧诱导的形态改变.与空白组比较,CoCl2组细胞侵袭和迁移能力增强(P＜0.05);与CoCl2组比较,CoCl2+益肺解毒汤组的细胞侵袭能力明显减弱(P＜0.01),迁移能力亦减弱(P＜0.05).与空白组比较,CoCl2组细胞EMT相关蛋白,E-cadherin表达下调,Vimentin,Snail表达上调(P＜0.05),说明缺氧使细胞发生了EMT;与CoCl2组比较,CoCl2+益肺解毒汤组可上调E-cadherin,p-gsk-3β,下调Vimentin,Snail,β-catenin蛋白表达(P＜0.05).结论:益肺解毒汤能抑制缺氧诱导的A549细胞的形态变化、侵袭及迁移能力,还能抑制缺氧诱导的EMT的发生,其机制可能与Wnt/β-catenin通路有关.
关键词： 中药复方 益肺解毒汤 上皮-间充质转化 Wnt/β-链蛋白信号通路 -
白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞中Wnt/β-链蛋白信号通路的影响
目的:研究白头翁皂苷D对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制效应及其机制.方法:不同浓度的白头翁皂苷D作用于人乳腺癌MCF-7细胞48 h后,CCK-8法检测细胞生存抑制率;Hoechst法检测细胞核凋亡变化;蛋白质印迹法检测MCF-7细胞内Wnt/β-链蛋白信号蛋白及下游组件蛋白CyclinD1和c-Myc的表达情况.结果:CCK-8法检测显示白头翁皂苷D可以抑制MCF-7细胞的增殖能力,细胞的生存抑制率呈药物浓度依赖性;Hoechst染色可见部分细胞核的形态发生改变,产生细胞核碎片,核发白等变化;与对照组比较,随着白头翁皂苷D浓度的增加,MCF-7细胞中β-链蛋白的蛋白表达量呈减少趋势;50 nmol·ml-1的白头翁皂苷D诱导组细胞中CyclinD1及c-Myc的蛋白表达量也明显减少(P<0.05).结论:白头翁皂苷D可有效抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,其机制可能与抑制Wnt/β-链蛋白信号通路的激活,并抑制其下游蛋白CyclinD1和c-Myc的表达有关.
关键词： 白头翁皂苷D MCF-7 Wnt/β-链蛋白信号通路 -
BMP-2与Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞分化为成骨细胞的作用
目的 探讨骨形成蛋白(BM P)2与Wnt/β-链蛋白(β-catenin)信号通路对间充质干细胞分化为成骨细胞的作用.方法 将间充质干细胞C3H10T1/2分为五组:A组用正常培养基培养,B组用成脂诱导液IFMD(含有吲哚美辛10 μg/ml、10% FBS、1-甲基-3-异丁基黄嘌呤0.5 mmol/L和地塞米松1 mmol/L)处理,C组在IFMD处理的同时加入BM P-2100 ng/ml,D组在IFMD处理的同时加入氯化锂(LiCl)20 mmol/L,E组在IFMD处理的同时加入BM P-2100 ng/ml和LiCl 20 mmol/L.处理第8天,用 ALP染色及油红O染色鉴定成骨细胞及脂肪细胞的分化情况;处理第2、4、8天,检测Ⅰ型胶原(Col1a1)、骨钙素(Ocn)以及CCAAT增强子结合蛋白(C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白(aP2)和葡萄糖转运蛋白4(Glut4)的表达;重亚硫酸盐测序法检测C/EBPα在各组细胞中启动子区甲基化情况.结果 A组无ALP及油红O阳性细胞,B组有大量油红O染色阳性细胞,E组细胞ALP活性高.与B组比较,C组和E组Runx2、Col1a1和Ocn mRNA表达较高(P<0.05或P<0.01),C组、D组和E组C/EBPα、aP2和Glut4 mRNA表达较低(P<0.05或P<0.01).E组C/EBPα启动子区出现较高的甲基化水平,经5-氮杂胞苷处理后,C/EBPα mRNA表达升高(P<0.01),大部分细胞分化为脂肪细胞.结论 在易成脂的病理微环境中,BMP-2和Wnt/β-catenin信号通路单独作用均不能有效促进成骨细胞分化,需要两者协同作用才能使间充质干细胞分化为成骨细胞,具体机制与C/EBPα启动子区甲基化有关.
关键词： 间充质干细胞 成骨细胞 骨形成蛋白2 Wnt/β-链蛋白信号通路 -
高良姜素通过抑制Wnt/β-链蛋白信号通路诱导胶质瘤细胞凋亡
目的 探讨高良姜素对胶质瘤细胞体外增殖和凋亡的影响. 方法 (1)将胶质瘤细胞U251和U87分为空白对照组、DMSO组及高良姜素100、200、300、400 μmol/L组,使用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法观察对胶质瘤细胞增殖情况;(2)通过Hoechest染色观察在不同浓度(0、100和200 μmol/L)高良姜素作用下胶质瘤细胞U251和U87凋亡情况;(3)使用流式细胞仪检测胶质瘤细胞U251和U87在不同浓度(100和200 μmol/L)高良姜素作用下凋亡情况;(4)应用Western blotting技术检测凋亡相关蛋白β-链蛋白、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白基因(Bax)、活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(活化caspase-3、活化caspase-9)、多聚腺苷二磷酸核糖基聚合酶(PARP)蛋白等在胶质瘤细胞U87和U251的表达. 结果 (1)在100、200、300、400 μmol/L浓度的高良姜素作用下,体外培养的胶质瘤细胞U251和U87的增殖被明显抑制,并呈现一种量效关系.100、200、300、400 μmol/L高良姜素作用于胶质瘤细胞U251和U87 24h时,其半数抑制浓度分别为281、321、276、229 μmol/L及289.4、261.1、247.4、225.3 μmol/L.(2)胶质瘤细胞U251和U87随着高良姜素浓度增加(0、100和200 μmol/L),凋亡率也相应增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).(3)流式细胞仪检测细胞凋亡发现了同样的结果.(4)0、100、200 μmol/L浓度高良姜素作用下,胶质瘤细胞U87和U251的Wnt/β-链蛋白表达依次减少,Bcl-2依次减少,Bax依次增加,活化caspase-3、活化caspase-9表达依次增多,活化PARP表达依次增加,差异具有统计学意义(P＜0.05). 结论 高良姜素能抑制胶质瘤细胞U251和U87增殖,并通过Wnt/β-链蛋白信号通路及线粒体途径诱导其凋亡.
关键词： 神经胶质瘤 Wnt/β-链蛋白信号通路 高良姜素 细胞凋亡 线粒体途径
