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新藤黄酸联合阿霉素通过JNK信号通路诱人乳腺癌细胞凋亡的相关机制研究
目的:研究新藤黄酸(GNA)与阿霉素(ADR)联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,并进一步探讨两药联用的相关机制.方法:体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞株,采用MTT法检测GNA与ADR单独及联合处理后细胞的存活率;Chou-Talalay联合指数法评价GNA与ADR的药物联合作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测给药后MCF-7细胞凋亡率;流式细胞仪检测JC-1染色细胞线粒体膜电位变化;Western blot法分别检测GNA与ADR单独及联合处理MCF-7细胞后ASK-1、p-ASK-1、JNK、p-JNK、Cyt-c、Caspase-9和Caspase-3通路蛋白表达的变化,同时检测经JNK通路抑制剂SP600125处理后相关蛋白指标的变化.结果:在一定浓度范围内,人乳腺癌细胞MCF-7的细胞存活率随着GNA(0.0625-4.0000μmol/L)与ADR(0.5-16.0μmol/L)给药剂量增加而降低(P＜0.01),且联合用药组细胞存活率低于单独用药组(P＜0.01).联合指数法分析计算后得出合用指数CI＜1,提示两药联合具有协同作用.GNA与ADR单独和联合作用均能诱导MCF-7细胞凋亡,且联合用药组细胞凋亡率与单独用药组比较,显著增加(P＜0.01).单独给药组MCF-7细胞线粒体膜电位有所降低(P＜0.01),而联合用药组与单独给药组相比则膜电位明显降低(P＜0.01).与正常对照组比较,单独给药组中ASK-1、p-ASK-1、JNK、p-JNK、Cyt-c、Caspase-9和Caspase-3蛋白均被激活,相关蛋白表达量增加,而联合用药组蛋白表达显著上调(P＜0.01).使用JNK通路抑制剂SP600125处理后,ASK-1和p-ASK-1蛋白表达与未处理组无明显差异,Cyt-c和Caspase-9蛋白表达量略微下降,Caspase-3蛋白表达无显著变化,而SP600125抑制了JNK,p-JNK蛋白表达上调,且联合用药组蛋白表达与单独给药组相比有所降低(P＜0.01).结论:GNA与ADR单独和联合应用均能诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡,且两者联合应用可产生协同效应,其作用机制可能与调控JNK信号通路相关.
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戊地昔布通过上调ROS诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡
目的 探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在选择性环氧化酶(cyclooxygenase,COX)-2抑制剂戊地昔布诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用.方法 噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术和Hoechst33258检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察细胞ROS和线粒体膜电位;Western blot检测蛋白表达.结果 1)戊地昔布可诱导细胞凋亡(P＜0.01),抑制细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01).2)给予戊地昔布后,caspase-3表达先升高,然后降解为cleaved caspase-3,Bcl-2的表达降低,Bax的表达增高,caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO和caspase抑制剂Z-VAD-FMK可拮抗戊地昔布的抗肿瘤作用(P＜0.05或P＜0.01).3)戊地昔布可降低线粒体膜电位,明显提高细胞内的ROS水平.抗氧化剂N-乙酰基半胱氨酸(N-Acetyl-L-cystein,NAC)可拮抗戊地昔布的抗肿瘤作用(P＜0.01).结论 戊地昔布可通过升高细胞内ROS诱导MCF-7细胞凋亡.
关键词： 戊地昔布 环氧化酶-2 人乳腺癌MCF-7细胞 凋亡 活性氧 -
白藜芦醇通过激活p38-p53通路诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡
本研究探讨了白藜芦醇(resveratrol,RSV)诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制.以MTT法检测白藜芦醇对MCF-7的细胞毒性；应用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学变化；采用流式细胞术检测细胞的凋亡率；以Western blotting检测相关蛋白的表达.结果表明,白藜芦醇可以时间和剂量依赖性地抑制MCF-7细胞的生长;60 μmol·L-1白藜芦醇作用于MCF-7细胞48 h后可使细胞核皱缩、染色质凝聚,并形成明显的凋亡小体；白藜芦醇可以时间依赖性地诱导MCF-7细胞凋亡及p38和p53蛋白的活化.p38 MAPK抑制剂SB203580和p53抑制剂pifithrin-α可以显著降低白藜芦醇诱导的MCF-7细胞的生长抑制率和凋亡率；并且SB203580可以下调由白藜芦醇引起的p53的活化,而pifithrin-α对白藜芦醇引起p38的活化无影响.研究表明,白藜芦醇可以通过激活p38-p53信号通路诱导MCF-7细胞发生凋亡.
关键词： 白藜芦醇 细胞凋亡 人乳腺癌MCF-7细胞 P38 P53 -
SIRT1去乙酰化酶抑制剂引起人乳腺癌MCF-7耐药细胞凋亡的机制
研究SIRT1去乙酰化酶抑制剂引起人乳腺癌MCF-7耐多柔比星(doxorubicin,DOX)细胞及其敏感细胞凋亡的机制.MTT法检测细胞生长抑制作用;Western blotting方法检测蛋白表达;DNA特异染料Hoechst 33342染色检测染色质凝集;Annexin V检测细胞凋亡;流式细胞仪测定细胞周期分布.结果表明.SIRT1去乙酰化酶抑制剂烟酰胺(nicotinamide,NAM)和Sixtinol对人乳腺癌细胞MCF-7敏感和耐药细胞表现出相同的生长抑制作用,但没有增强DOX活性的作用.NAM使MCF-7和MCF-7/DOX细胞阻滞在(G<,2/M期.50 mmol·L-1NAM作用MCF-7细胞后,激活caspase凋亡通路,出现PARP、caspase-6、-7、-9切割片段,并且染色质发生凝集和Annexin V阳性细胞.而在MCF-7/DOX耐药细胞中,NAM作用24 h后,才开始出现PARP、caspase-6、-7切割片段,48 h后明显增加,可以检测到较多的细胞出现染色质凝集和Annexin V阳性细胞.SIRT1去乙酰化酶抑制剂对人乳腺癌MCF-7耐药细胞和敏感细胞均有相似的抑制作用,无交叉耐药性.其作用通过激活caspase凋亡通路实现.
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天花粉对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及相关基因表达的影响
目的 研究天花粉对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法 取对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞以30,60,90,120 μg·mL-1的天花粉蛋白处理,作为实验组,对照组用等量的0.9％ NaCl处理,继续培养24,48,72h.观察并比较各组细胞形态学及细胞核凋亡形态学变化,以噻唑蓝(MTT)比色法检测各组人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制情况,分光光度法检测天花粉蛋白对人乳腺癌MCF-7细胞胱天蛋白酶(caspase)-3和caspase-8表达的影响.结果 实验组人乳腺癌MCF-7细胞呈现明显的细胞凋亡及核凋亡现象,且随天花粉蛋白质量浓度的增加,其细胞核凋亡现象越明显;干预24 h后,30,60,90,120 μg·mL-1实验组增殖抑制率分别为(1.61±0.94)％,(2.81±1.01)％,(7.05±1.03)％和(9.59±1.12)％;干预48 h后增殖抑制率分别为(2.13±1.01)％,(6.14±1.12)％,(9.05±1.09)％和(19.60±1.15)％;干预72 h后增殖抑制率分别为(3.28±1.07)％,(7.18±1.51)％,(18.39±1.81)％和(29.59±1.63)％.实验组人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制率随作用时间的延长及天花粉蛋白质量浓度的增大而逐渐升高(均P ＜0.01);90 μg·mL-1实验组24,48,72 h caspase-3分别为1.49±0.15,2.36±0.25,2.15±0.23;caspase-8分别为1.94±0.26,1.56±0.19,1.39 ±0.20.对照组人乳腺癌MCF-7细胞caspase-3及caspase-8随作用时间的延长无显著变化(均P ＞0.05),而90 μg·mL-1实验组caspase-3先升高后降低(P＜0.05或P＜0.01),以48 h时高;caspase-8则逐渐降低(P＜0.01);且各时间点90 μg·mL-实验组caspase-3及caspase-8均显著高于对照组(均P ＜0.01).结论 天花粉蛋白可有效促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,抑制其增殖,且增殖抑制作用呈时间-剂量依赖性,其作用机制可能与上调人乳腺癌MCF-7细胞caspase-3及caspase-8表达相关.
关键词： 乳腺癌 人乳腺癌MCF-7细胞 天花粉 细胞凋亡 胱天蛋白酶-3 -
siRNA沉默PACE4基因对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的作用
目的 研究siRNA沉默PACE4基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移以及细胞周期的影响.方法 利用人工合成的siRNA特异性抑制PACE4在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,瞬时转染24h和36h后分别利用real-time PCR和Western blot的方法检测沉默效率;MTT、细胞划痕和流式细胞术等方法测定于扰PACE4表达后对细胞的增殖、迁移和细胞周期的影响.结果 转染特异性siRNA-PACE4后,与对照组相比,在36h时,mRNA水平和蛋白水平抑制效果明显(P＜0.01,P＜0.05);MCF-7细胞的生长受到抑制(P＜0.05),且细胞的迁移力(P＜0.05)也明显下降,但是对细胞周期的影响不明显.结论 PACE4在乳腺癌细胞的异常增殖和迁移中发挥一定作用,为进一步探讨乳腺癌的发病机制奠定了基础.
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墨西哥仙人掌多糖对人乳腺癌MCF-7细胞生长抑制作用的研究
目的:观察墨西哥仙人掌多糖对人乳腺癌MFC-7细胞生长的抑制作用.方法:体外培养人乳腺癌MFC-7细胞,利用四甲基偶氮唑蓝染色法(MTT法)及倒置显微镜观察仙人掌多糖对人乳腺癌MFC-7细胞生长的抑制作用.结果:不同浓度的墨西哥仙人掌多糖均能够促进人乳腺癌MFC-7细凋亡或死亡,大浓度的墨西哥仙人掌多糖的肿瘤细胞生长抑制率为78.7%.结论:墨西哥仙人掌多糖能够抑制人乳腺癌MFC-7细胞的生长.
关键词： 墨西哥仙人掌多糖 MTT染色法 人乳腺癌MCF-7细胞 -
中频交变电流联合紫杉醇抗乳腺癌MCF-7细胞作用的研究
目的:研究中频交变电流联合紫杉醇抗人乳腺癌MCF-7细胞的作用.方法:将对数生长期的乳腺癌细胞分别暴露于电刺激、紫杉醇、电刺激与紫杉醇联合作用下,采用cck8法检测细胞存活率,并运用流式细胞技术分析各组实验作用下对细胞凋亡/死亡、细胞周期的影响.结果:中频交变电流(100kHz,110mA,30min)作用MCF-7细胞后,细胞存活率为70±5.24％,联合紫杉醇(IC50)治疗后,细胞存活率为24±1.81％ (P＜0.01);中频交变电流联合紫杉醇能够增加细胞凋亡率,阻滞细胞于S期、G2/M期.结论:中频交变电流单独使用可以抑制MCF-7细胞增殖,联合紫杉醇应用时能表现出协同抑制肿瘤细胞生长的作用.
关键词： 中频交变电流 紫杉醇 人乳腺癌MCF-7细胞 细胞周期 凋亡 -
异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制
目的 探讨异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制.方法 人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞分别用异长春花碱1、10 μmol/L处理后,MTS法检测细胞黏附能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,ELISA法检测细胞转移生长因子-β (TGF-β)分泌的变化,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9活性,Western blotting法检测肿瘤细胞E-钙黏素、N-钙黏素、MMP-2、MMP-9、p-JNK及p-Akt蛋白的表达,RT-PCR法检测肿瘤细胞E-钙黏素、N-钙黏素及MMP-2、MMP-9基因的表达,双荧光素酶报告基因实验考察AP-1和核因子-κB (NF-κB)活性的变化.结果 异长春花碱1、10 μmol/L给药后,细胞黏附能力:MCF-7细胞分别下降34.8％、66.8％,MDA-MB-435细胞分别下降42.6％、72.3％;侵袭能力:MCF-7细胞分别下降44.4％、72.2％,MDA-MB-435细胞分别下降47.7％、86.4％; TGF-β分泌:MCF-7细胞分别下降28.2％、52.1％,MDA-MB-435细胞分别下降39.0％、55.1％;E-钙黏素基因表达:MCF-7细胞分别上调86.5％、181.6％,MDA-MB-435细胞分别上调116.6％、160.7％; N-钙黏素基因表达:MCF-7细胞分别下降33.7％、74.1％,MDA-MB-435细胞分别下降57.6％、76.9％; MMP-2基因表达:MCF-7细胞分别下降71.6％、88.4％,MDA-MB-435细胞分别下降57.4％、69.4％; MMP-9基因表达:MCF-7细胞分别下降15.0％、84.0％,MDA-MB-435细胞分别下调22.1％、73.0％;E-钙黏素蛋白表达显著上调,N-钙黏素蛋白表达明显下调,MMP-2和MMP-9及p-JNK、p-Akt蛋白表达显著下降;AP-1活性:MCF-7细胞分别下降27.7％、68.2％,MDA-MB-435细胞分别下降34.8％、71.4％; NF-κB活性:MCF-7细胞分别下降18.4％、44.8％,MDA-MB-435细胞分别下降24.4％、51.9％.结论 异长春花碱可抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞体外侵袭能力,其机制可能与下调肿瘤转移相关信号通路及上皮间质转化表达有关.
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miR-449a对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及迁移能力的影响
目的:通过敲低微小RNA(microRNA,miRNA)-449a的方法研究miR-449a对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移能力的影响.方法:采用miRNA芯片在乳腺癌细胞MCF-7和人正常乳腺细胞MCF-10A筛选具有表达差异的miRNA;化学合成法制备miR-449a的抑制剂(inhibitor),转染后经real-time PCR验证表达的变化;细胞增殖CCK-8实验对转染后细胞增殖能力进行检测;划痕实验检测细胞转移能力,transwell小室实验检测细胞侵袭的改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)实验对MCF-7细胞增殖和迁移相关的β-catenin和E-cadherin蛋白进行检测;通过生物信息学软件预测miR-449a潜在靶基因为Notch 1,荧光素酶实验检测Notch l是miR-449a的靶基因.结果:分别收集MCF-7和MCF-10A细胞,芯片结果显示miR-449a在MCF-7细胞的表达水平显著高于MCF-10A;本研究将细胞分为未处理组(Mock组),阴性对照组(negative control组,NC组)和处理组,通过收集不同组MCF-7细胞进行试验,CCK-8结果显示miR-449a下调后MCF-7细胞增殖能力显著降低;划痕实验结果显示miR-449a表达降低导致MCF-7细胞转移能力降低;transwell实验结果显示MCF-7细胞侵袭受到抑制;Western blot结果发现miR-449a敲低后β-catenin表达降低,E-cadherin表达增加;荧光素酶试验结果显示,miR-449a能够显著降低Notch 1-3'-UTR质粒的荧光素活性(P＜0.01).结论:在乳腺癌细胞MCF-7中敲低miR-449a能够显著抑制癌细胞增殖和迁移,而这一变化可能通过降低Notch 1蛋白表达实现的.
关键词： miR-449a 人乳腺癌MCF-7细胞 Notch1 增殖 迁移 -
姜黄素体外诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用
目的:观察姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞(简称MCF-7细胞)凋亡的诱导作用.方法:不同浓度姜黄素(0.048,0.056,0.064,0.072,0.080μmol/L)作用于MCF-7细胞24h,采用CCK-8法检测其对MCF-7细胞的生长抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡结果.结果:经上述不同浓度姜黄素诱导24h后,MCF-7细胞生长抑制率分别为17%、28%、48%、50%及55%;琼脂糖凝胶电泳显示出DNA梯形条带.结论:姜黄素对体外培养MCF-7细胞的增殖有明显的抑制作用并可诱导其细胞凋亡.
关键词： 姜黄素 人乳腺癌MCF-7细胞 细胞凋亡 -
淫羊藿苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡作用的实验研究
目的:研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对MCF-7细胞增殖/凋亡作用的影响及其作用机制.方法:采用MTT比色分析法及Annexin V/PI标记流式细胞仪检测TCA对MCF-7细胞的增殖与凋亡作用的影响,采用Western blot检测蛋白表达,研究ICA是否通过ERK/MAPK信号转导通路起作用.结果:与对照组比较,MCF-7细胞培养24 h后,ICA各组OD值均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);培养48 h后,各组差异均有统计学意义(P＜0.05);培养72 h后,各组差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,培养24 h后,10 mM ES单独作用后对MCF-7细胞无明显的增殖作用,ES加ICA组有明显的抑制作用.20 mM ES诱导结果与10 mM的结果一致.不同浓度的ICA作用48 h后,总ERKl/2和MEK蛋白表达均无明显变化,MEK磷酸化水平同样无明显变化,ERK1/2磷酸化水平增高.结论:淫羊藿苷对雌激素阳性人乳腺癌细胞有明显的抑制增殖与诱导凋亡的作用,同时可拮抗雌激素对乳腺癌细胞的增殖作用,但是其作用机制尚不清楚.
关键词： 淫羊藿苷 人乳腺癌MCF-7细胞 增殖凋亡 -
17-AAG对MCF-7细胞增殖的抑制作用及对STAT3和VEGF表达的影响
目的 观察17-AAG对人乳腺癌MCF-7细胞株STAT3、VEGF mRNA及蛋白表达水平的影响.方法 体外培养MCF-7细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间的17-AAG,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力；RT-PCR和Westem blot法检测各组细胞STAT3和VEGF mRNA及蛋白的表达水平.结果 0.165～10.000 mg/L 17-AAG作用24 h、48 h对MCF-7细胞有显著的抑制作用,且有明显的时间、剂量依赖性；1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L 17-AAG作用48 h后,各组细胞STA T3和VEGF mRNA及蛋白表达水平均下调,且具有浓度依赖性.结论 17-AAG对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能抑制STA T3和VEGF mRNA及蛋白的表达,且具有剂量依赖性.
关键词： 17-AAG 人乳腺癌MCF-7细胞 细胞增殖 VEGF STAT3 -
多西紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其相关基因表达的影响机制
目的 探讨多西紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其相关基因表达的影响机制.方法 采用MTT比色法分析多西紫衫醇对人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞的增殖作用,应用光镜、电镜分别进行细胞形态学及超微结构的观察;采用Annexirr V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率和周期变化,以及应用免疫组化方法检测Bax,Bcl-2基因蛋白的表达变化.结果 多西紫杉醇对人乳腺癌MCF-7肿瘤细胞有生长抑制作用,并呈现量效关系,可随着作用时间的延长出现形态学以及超微结构的改变,而细胞凋亡率以及周期亦随剂量呈递增关系,并可上调bax和下调Bcl-2的蛋白表达.结论 多西紫衫醇对人乳腺癌MCF-7细胞具有明显抑制生长的作用,并可进一步诱导细胞凋亡,其机制可能与调节Bax,Bcl-2等凋亡基因有关.
关键词： 多西紫杉醇 人乳腺癌MCF-7细胞 细胞凋亡 基因表达 -
下调人乳腺癌MCF-7细胞系miRNA-221和miRNA-222表达对抑制肿瘤细胞增殖及迁移能力的探讨
目的：通过敲低微小RNA（microRNA，miRNA）-221和miRNA-222的表达上调组织金属蛋白酶抑制剂3（TIMP3）的方法来研究人乳腺癌 MCF-7细胞系的增殖和迁移能力。方法根据 miRBase 数据库中 Homo sapiens（hsa）-miRNA-221和hsa-miRNA-222的寡核苷酸序列和一段无义序列分别设计并重组成质粒：反义抑制miRNA-221（antisense-miRNA-221，AS-miRNA-221）、反义抑制miRNA-222（antisense-miRNA-222，AS-miRNA-222）、共同反义抑制miRNA-221/222（antisense-miRNA-221/222，AS-miRNA-221/222）和无义抑制（Scramble），并将其分别利用脂质体LipofectamineTM2000转染进人乳腺癌MCF-7细胞中，经G418筛选后建立稳定表达的对照细胞株[未转染正常细胞（Control组）和无义抑制细胞（Scramble组）]和低表达miRNA-221、miRNA-222细胞株（即AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组和AS-miRNA-221/222组）。转染24 h后于荧光显微镜下观察转染效率；采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测各组细胞中miRNA-221和miRNA-222的表达量，采用逆转录PCR检测各组细胞中质粒载体上携带的抗性neo 基因的表达情况，以此来验证转染是否成功；分别采用实时荧光定量PCR、免疫印迹法检测TIMP3和金属蛋白酶17（ADAM17）的表达差异；采用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测并绘制生长曲线，观察低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力；采用划痕修复实验观察转染后细胞的迁移能力。结果转染24 h之后，在荧光显微镜下观察到各转染组细胞的绿色荧光蛋白表达较多，即转染效率较高。检测转染后各组细胞中 neo 基因、miRNA-221和 miRNA-222的表达。与 Control 组比较，Scramble 组、AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组neo基因表达明显升高；与Scramble组比较，AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组miRNA-221和miRNA-222的表达量明显降低，即证实转染了反义抑制miRNA-221/222的低表达稳定细胞株构建成功。与Scramble组比较，AS-miRNA-221组、AS-miRNA-222组、AS-miRNA-221/222组细胞TIMP3 mRNA表达升高，而其调控的ADAM17水平降低。生长曲线显示低表达miRNA-221、miRNA-222各组细胞的生长能力明显受到抑制。划痕修复实验结果显示低表达 miRNA-221、miRNA-222各组细胞的迁移能力降低。结论通过敲低miRNA-221、miRNA-222、上调TIMP3表达可以抑制人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖和迁移能力。
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基于CYP19探讨雷公藤甲素抗ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞作用机理
目的 基于CYP19基因阐明雷公藤甲素抗ER(+)人乳腺癌细胞的作用机制.方法 雷公藤甲素组与来曲唑组相对照,采用MTT法观察雷公藤甲素对MCF-7细胞增殖的影响;采用Western blot观察其对芳香化酶的影响;采用RT-PCR观察其对CYP19基因的影响;采用瞬时转染形成高表达及低表达CYP19基因的MCF-7细胞,并用Western blot的方法观察雷公藤甲素对转染细胞CYP19以及其下游通路相关基因JNK、P38和ERK的影响.结果 雷公藤甲素能明显抑制MCF-7细胞增殖(P<0.01),其抑制作用随着浓度增高和时间的延长而增强,能抑制芳香化酶及CYP19基因的表达,并能明显下调低表达CYP19-MCF-7细胞的CYP19表达,及抑制JNK、p-38和ERK的磷酸化.结论 雷公藤甲素抗MCF-7细胞的作用机制之一,是通过抑制芳香化酶起作用,并引起下游Ras-Raf-MAPK-ERK激酶系统通路受抑制.
关键词： CYP19 雷公藤甲素 人乳腺癌MCF-7细胞 转染 -
杉蟾藤成分复方诱导ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的实验研究
目的 阐明杉蟾藤成分复方对ER(+)人乳腺癌MCF-7细胞的作用机制.方法 杉蟾藤成分复方组与阿霉素相对照,采用MTT法观察杉蟾藤成分复方对MCF-7细胞增殖的抑制率;采用高内涵细胞分析系统观察其对MCF-7细胞凋亡和坏死的影响;采用Western blot观察其对MCF-7细胞信号转导通路蛋白ERK、JNK、p38、Bad和凋亡基因相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3表达情况.结果 随着药物浓度增高和时间的延长,杉蟾藤成分复方对MCF-7细胞增殖的抑制率也增大;高内涵细胞分析测定其对MCF-7细胞以早期凋亡和细胞核凋亡为主;Western blot提示其能下调p-ERK和Bcl-2蛋白表达,上调p-JNK、p-P38、Bad和Bax蛋白,促进Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的活化,以Caspase-8显著.结论 杉蟾藤成分复方能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,通过阻断Ras-Raf-MAPK-ERK激酶系统及调控Bcl-2家族,促细胞早期凋亡和细胞核凋亡.其对细胞凋亡的两条信号通路都有作用,即外源性死亡受体通路和内源性线粒体通路.
关键词： 杉蟾藤成分复方 人乳腺癌MCF-7细胞 凋亡 -
多西紫杉醇和顺铂联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞hTERT及C-myc基因表达的影响
目的 研究多西紫杉醇和顺铂联合应用对人乳腺癌MCF-7细胞的作用及其机制.方法 MCF-7细胞传代培养后分组加药:第1组加入多西紫杉醇(多西紫杉醇组);第2组加入顺铂(顺铂组);第3组加人多西紫杉醇和顺铂(联合用药组);对照组为未加药的MCF-7细胞.加药24、48、72 h后收集细胞,MTT法检测各组细胞生长抑制率,PCREIJSA法检测各组细胞端粒酶活性,RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶hTERT mRNA的表达,Western blot技术检测C-myc蛋白的表达.结果 联合用药组人乳腺癌MCF-7细胞的生长和增殖受到明显抑制,多西紫杉醇联合顺铂对端粒酶活性、hTERT mRNA及转录调控基因C-myc表达的抑制呈明显的时效和效量相关性.结论 多西紫杉醇和顺铂联合应用对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制具有协同加强作用,其机制可能是对MCF-7细胞的端粒酶活性及其端粒酶转录调控基因C-myc有较强的抑制作用.
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利拉鲁肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖影响的体外研究
目的 2型糖尿病治疗药物二甲双胍、胰岛素及类似物、噻唑烷二酮类及磺脲类等可通过调节丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和(或)磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路影响肿瘤细胞生长.利拉鲁肽作为一种新型降糖制剂,其安全性也备受关注.文中探讨胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)类似物利拉鲁肽(Liraglutide)对人乳腺癌细胞系(michigan cancer foundation-7,MCF-7)细胞增殖的影响及其与p38MAPK信号通路的关系. 方法 利拉鲁肽以1、10、100、1000 nmol/L作用于MCF-7细胞24、48、72、96h,MTT法测细胞增殖情况,不同浓度利拉鲁肽及联合p38MAPK抑制剂作用于MCF-7细胞96h,流式细胞术测细胞周期,蛋白免疫印迹(Western blot)测定p38MAPK磷酸化程度. 结果 ①与对照组相比,不同浓度利拉鲁肽作用24h、72h、96h及1nmol/L、10nmol/L作用48h均表现为显著抑制作用(P＜0.05),其中组间两两比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05),且1nmol/L抑制作用明显;1nmol/L利拉鲁肽作用于MCF-7细胞24、48、72、96h均成抑制作用,组间差异有统计学意义(P＜0.05);②不同浓度利拉鲁肽作用于人乳腺癌MCF-7细胞96 h后,与对照组相比,S+G2/M期细胞数目比例均有所减少,差异有统计学意义(P＜0.05);③1 nmol/L利拉鲁肽联合p38MAPK抑制剂SB203580作用于人乳腺癌MCF-7细胞96h后,S+G2/M期细胞数比例较1 nmol/L利拉鲁肽组显著增加(P＜0.05),与对照组相比无显著差异(P＞0.05).④Western blot法测定MCF-7细胞通过1nmol/L利拉鲁肽作用96 h后,与对照组比较,利拉鲁肽组p38MAPK磷酸化程度增加. 结论 利拉鲁肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,呈时间依赖性;可能涉及p38MAPK信号通路.
关键词： 利拉鲁肽 人乳腺癌MCF-7细胞 细胞周期 p38MAPK通路 -
黄芪含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞的实验研究
目的:研究不同浓度黄芪含药血清对雌激素受体阳性的人乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的作用以及Bcl-2蛋白表达的影响,初步探讨黄芪的植物雌激素效应情况.方法:采取MTT法观察不同含药血清组对人乳腺癌MCF-7细胞在不同时间段(24h,48h,72h)的增殖活性,检测细胞周期及细胞凋亡率,检测细胞凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达.结果:黄芪含药血清可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并且呈现不同剂量的梯度性；不同浓度黄芪含药血清均不能诱导细胞的凋亡；但黄芪高剂量组可以明显的增加G0/G1期比例；黄芪含药血清可以上调Bcl-2蛋白的表达.结论:黄芪含药血清可以抑制MCF-7细胞的增殖；高剂量组可以使MCF-7固定在G0/G1期；可部分上调Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡.
关键词： 黄芪含药血清 人乳腺癌MCF-7细胞 细胞周期 细胞凋亡
