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098 隐孢子虫病的病原、表现、诊断与治疗
隐孢子虫病是由一种卵囊为球形、直径4～6 μm、对加氯消毒有极强抵抗力的肠道寄生性原虫--微小隐孢子虫所致的、经粪-口途径传播、人畜共患急性传染病.在免疫功能正常的人中常表现为潜伏期2～28d,持续1～2周,以水样腹泻为主,伴腹痛、低热和恶心呕吐等症状的自限性疾病;而在艾滋病患者等免疫功能低下的人群中往往表现为严重而持久的、有时甚至致命的顽固性腹泻.目前尚无特效治疗.其确诊有赖于病原学检测,如直接涂片法、抗酸染色法、酶联免疫吸附法、免疫荧光法及PCR技术等.据研究,摄入10～100个微小隐孢子虫卵囊或呛一口受污染的水就可能感染发病,使50%健康志愿者感染的卵囊量(ID5o)约为132个.其感染率在艾滋病病毒阳性且伴腹泻者中约为13.8%～23.9%,在普通腹泻者中约为2.1%～6.1%.有关该病暴发流行的报道正呈渐增之势,其危害的广泛性和严重性,尤其是对供水安全造成的威胁越来越不容忽视.
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内蒙古某牧区儿童隐孢子虫感染情况调查
目的 了解内蒙古牧区儿童隐孢子虫的感染情况及风险因素,为预防工作提供科学依据.方法 随机抽取赤峰市某旗的8所幼儿园进行隐孢子虫感染状况调查,应用x2检验和Logistic回归分析儿童感染隐孢子虫的影响因素.结果 受检儿童隐孢子虫的总感染率为4.2％ (42/1 002),喝生水(OR=2.473)是隐孢子虫感染的主要影响因素.结论 牧区儿童隐孢子虫患病率相对较高,不喝生水是预防儿童感染隐孢子虫的重要措施.
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江苏省某地农村集中式供水隐孢子虫污染与儿童感染现状研究
目的 了解江苏省某地农村集中式供水隐孢子虫污染与儿童感染现状,探讨可能的传播途径及影响因素.方法 对调查地区集中式供水设施进行卫生学调查,按照《生活饮用水标准检验方法》(GB/T5750-2006)检测24份水源水和出厂水中隐孢子虫卵囊含量.采取整群抽样方法调查供水地区1 651名儿童,通过问卷调查了解儿童一般人口学资料、生活习惯和环境卫生情况等,采集儿童粪便,用金胺酚—改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊.结果 水源水及出厂水水样中均未检出隐孢子虫卵囊,儿童粪便中隐孢子虫卵囊阳性率为1.09％,感染率幼儿园儿童大于小学生(1～3年级),儿童感染者多无自觉症状,未发现与感染有关的影响因素.结论 该地农村儿童存在隐孢子虫感染,需要进一步对可能的感染途径和影响因素进行研究.
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我国部分农村地区儿童隐孢子虫感染现况调查
目的 了解我国部分农村地区儿童隐孢子虫感染现况.方法 采取随机整群抽样方法,对我国部分农村地区5 458名儿童采集粪便样本进行隐孢子虫卵囊检测,同时进行问卷调查.结果 调查农村地区儿童隐孢子虫感染率为2.58％,其中一至三年级小学生和幼儿园儿童隐孢子虫感染率分别为2.83％和2.26％.湖北省、广东省和江苏省儿童隐孢子虫感染率由高到低依次为4.00％,2.40％和1.09％,差异有统计学意义(x2=32.38,P＜0.01).近1年家庭饲养家畜的儿童隐孢子虫感染率为3.79％,近1年家庭没有饲养家畜的儿童隐孢子虫感染率为1.27％,差别具有统计学意义(x2=34.33,P＜0.01).结论 农村地区儿童隐孢子虫感染情况不容忽视,影响因素可能涉及地区、饮用水,家庭饲养牲畜以及个人卫生习惯等.
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江苏省典型地区水源水及饮用水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫污染现状及分析
目的 了解江苏省典型地区水源及饮用水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫污染现状,为饮用水水质安全、科学供水提供依据.方法 对调查对象进行卫生学调查,按照《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750-2006)检测集中式供水水厂水源水、出厂水、末梢水中贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊含量.结果 所有222份样本中有7份阳性样本,其中隐孢子虫的检出率为0.5％(0.2个/10 L),贾第鞭毛虫的检出率为2.7％(范围:0.5～2.3个/10 L).结论 本次研究“两虫”总体的检出率较低,今后应重点加强对农村小型集中式供水水厂监测工作,开展对易感人群感染状态的调查及风险评估工作.
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某市农村饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫污染状况调查
目的 调查某地区农村水厂水源水与出厂水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫污染情况,为公共卫生管理提供依据.方法 2013年8-9月,调查该地区12家农村水厂基本情况,采集水厂水源水和出厂水各一份,采用《生活饮用水卫生标准检测方法—免疫磁分离荧光抗体法》(GB/T 5750.12-2006)对水样进行隐孢子虫与贾第鞭毛虫的检测.结果 某地区农村饮用水水源水中贾第鞭毛虫检出率25.0％ (3/12),隐孢子虫未检出,出厂水均未检出贾第鞭毛虫和隐孢子虫.结论 此次调查表明某地区农村饮用水水源受贾第鞭毛虫污染.常规水处理工艺能够去除低浓度两虫污染.
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饮用水隐孢子虫污染与感染研究现状分析
隐孢子虫是可以感染人体和其他脊椎动物的肠道病原体,在水源性疾病流行中其占有重要的位置,是引起人类腹泻疾病常见因素之一.自上世纪80-90年代发达国家因饮用水隐孢子虫污染导致流行以来,对饮用水的隐孢子虫污染与人感染的研究不断深入,尽管多数感染者症状轻微或无症状,但由于对隐孢子虫病患者的治疗缺乏针对性的药物,因而更受关注,被世界卫生组织和美国疾控中心列为新发传染病.本文对人隐孢子虫病流行现状、饮用水隐孢子虫污染与感染风险和监测等进行系统回顾和深入分析,讨论相关制约因素,并提出了近期需要关注和亟待研究解决的主要问题.
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提高饮用水“两虫”检测回收率的方法探讨--Filta-Max xpress快速法
本文对免疫磁分离荧光抗体法测定水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫过程中3个关键步骤——浓缩、分离和染色过程的加标回收率情况分别进行比对试验，对如何提高饮用水中“两虫”检测回收率提出合理化建议。
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圆孢子虫病——一种新发现的食源性疾病(综述)
圆孢子虫病(Cyclosporiasis)是由圆孢子虫(Cyclospora cayetanensis)引起的人体寄生虫病，1977年首次发现并于1979年首先由Ashford报道。［1］近几年美国等国家陆续发生多起食源性圆孢子虫病暴发事件，使得圆孢子虫成为继隐孢子虫、等孢球虫后的又一种重要的人体寄生球虫。我国虽未出现大规模食源性暴发，但迄今已报道了16例圆孢子虫感染的病例。［2］本文就圆孢子虫及其感染的基本情况综述如下。
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牧区儿童隐孢子虫感染情况及危险因素的调查
目的：通过调查，了解牧区儿童隐孢子虫感染情况，观察牧区饮用水隐孢子虫污染环境情况，及时掌握牧区家养牲畜隐孢子虫感染情况，探讨和分析牧区儿童感染隐孢子虫的危险因素，为制定相关的预防控制策略和措施提供参考数据。方法选择2012年12月-2014年12月6个典型牧区的8所幼儿园1002名儿童粪便、120份牛粪便、120份羊粪便、120份猪粪便用RIDA快速检测法和金胺-酚复染法进行检测。同时向1002名儿童进行问卷调查，分析儿童对隐孢子虫的知晓率以及各类粪便中隐孢子虫检测结果情况。结果儿童对隐孢子虫知晓率为30.03%。1002份儿童粪便样品，有42份样品隐孢子虫卵囊阳性，阳性率为4.19%；120份牛粪便样品，有25份样品隐孢子虫卵囊阳性，阳性率为20.83%；120份羊粪便样品，有14份样品隐孢子虫卵囊阳性，阳性率为12.07%；120份猪粪便样品，有35份样品隐孢子虫卵囊阳性，阳性率为29.17%。结果差异有统计学意义（P<0.05）。结论牧区粪便污染较为严重，且儿童对其知晓程度较低，应加强儿童的健康教育，环境问题不容忽视。
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北京、河南、新疆地区HIV/AIDS相关慢性腹泻患者隐孢子虫感染检测分析
目的 了解北京、河南、新疆地区HIV感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)相关慢性腹泻患者中隐孢子虫感染状况。方法收集3个地区HIV/AIDS相关慢性腹泻患者粪便，采用甲醛-乙酸乙酯沉淀法集卵，用改良抗酸染色法染色检测隐孢子虫卵囊。同时检测患者血液CD4+T淋巴细胞计数。结果253例HIV/AIDS相关慢性腹泻患者的粪便标本中有32例为隐孢子虫阳性，感染率为12.6％。北京、河南、新疆地区艾滋病慢性腹泻患者隐孢子虫感染率分别为5.97％(4/67)、16.1％(24/149)和10.8％(4/37)，地区间差异有统计学意义(x2=4.431,P＜0.05)。男性和女性艾滋病慢性腹泻患者隐孢子虫感染率分别为11.2％( 16/1 43)和14.5％(16/110),差异无统计学意义（x2=0.634,P＞0.05）；城市和农村艾滋病慢性腹泻患者隐孢子虫感染率分别为6.5％(7/104)和16.8％(25/149)，差异有统计学意义(x2=5.596,P＜0.05)；夏秋季与其他季节的艾滋病慢性腹泻患者隐孢子虫感染率分别为14.0％(30/214)和5.1％(2/39)，差异无统计学意义(P＞0.05)；艾滋病慢性腹泻患者处于HIV感染无症状期、有症状期、艾滋病期隐孢子虫感染率分别为0％(0/7)、21.3％(19/89)、8.3％( 13/157),差异有统计学意义(x2=9.822，P＜0.01)；不同CD4+T淋巴细胞计数水平（cell/μl）艾滋病慢性腹泻患者隐孢子虫感染率有差异,＜200为20.4％ (20/98),200～499为9.23％(12/130)，≥500为0％( 0/25),差异有统计学意义(x2=10.33,P＜0.01)。艾滋病中晚期慢性腹泻患者，尤其是CD4+T淋巴细胞计数＜200 cell/μl的患者其感染率明显增加。结论3个地区艾滋病慢性腹泻患者隐孢子虫感染率与性别无关；患者来自农村地区、CD4+T淋巴细胞计数水平降低、疾病为中晚期患者易发生隐孢子虫感染。
关键词： HIV感染者和艾滋病患者 隐孢子虫 慢性腹泻 -
抗隐孢子虫子孢子ScFv-PE40免疫毒素表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达
用PCR方法扩增抗隐孢子虫子孢子ScFv片段,插入表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28-ScFv,然后,将绿脓杆菌外毒素(PE40)片段定向克隆到ScFv基因的下游,构建免疫毒素表达质粒pET28ScFv-PE40.经酶切分析、PCR检测和测序进行鉴定.成功地构建了免疫毒素表达质粒pET28 ScFv-PE40.将上述质粒转化受体菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,成功地表达了目的蛋白.免疫毒素ScFv-PE40大小约为66kDa,表达量约占菌体蛋白总量的14%.
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基于PNO基因序列分析隐孢子虫种系发育关系
本文以核基因组的功能蛋白丙酮酸:NADP+氧化还原酶(pyruvate:NADP+ oxidoreductase,PNO)编码基因作为研究对象,对本实验室分离保存的隐孢子虫虫株进行扩增测序,用ClustalX 1.81对扩增序列与GenBank相关参考序列进行比对,用Paup4.0程序中邻接法(Neighbor-joining method,NJ)、大简约法(Parsimonv,MP)和大似然法(Maximum Likelihood,ML)进行聚类分析,以确定不同隐孢子虫分离株之间的遗传进化关系,并以18S rRNA和HSP70基因构僵的基因树作参照,进而评价PNO这一基因座是否适合作为隐孢子虫基因分型和进化关系分析的基因座.结果表明通过PNO构建的进化树将隐孢子虫分为2大类:Cryptosporidium bailey和C.meleagridis处于一个分枝,C.hominis、C.parvum牛基因型和C.parvum鼠基因型处于另一个分枝上.不同隐孢子虫之间的同源性介于95.0%～100%,能有效区分隐孢子虫不同基因型.因此,PNO基因序列也适合作为隐孢子虫分离株种系发育的遗传标记.
关键词： 隐孢子虫 丙酮酸 NADP+氧化还原酶 基因分型 种系发育关系 -
两株人源隐孢子虫分离株的鉴定和种系发育分析
从郑州市某医院腹泻婴幼儿粪便中分离获得2个隐孢子虫分离株,应用巢式PCR扩增分离株SSU rRNA(18S rRNA)基因的特定片段,扩增产物分别用限制性内切酶SspⅠ和VspⅠ单酶切进行限制性片段多态性(RFLP)分析确定分离株种类或基因型.同时对扩增产物进行克隆和测序,并与GeBank上发表的相关参考序列进行同源性比较和种系发育分析.根据RFLP分析,2个分离株可初步确定为人隐孢子虫(Cryptosporidium hominis);种系发育分析表明2个分离株与C.hominis协的相应序列位于同一进化枝,序列同源性为100%.因此,本试验中获得的2个分离株应为C.hominis.
关键词： 隐孢子虫 ssu rRNA基因 PCR.RFLP 种系发育 -
抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体的制备及鉴定
利用牛源微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)超声粉碎物免疫BALB/C小鼠 ,取脾细胞与SP2/0细胞融合,经3～5次有限稀释克隆化,获得4株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D5,2E9,3D6和4G4.经检测,其分泌的抗体亚类3株为IgG1,1株为Ig M.通过免疫荧光鉴定,4株单抗均作用于子孢子抗原,其中2株针对子孢子表膜.对杂交瘤细胞株的染色体计数,结果染色体均数为90～98条.ELISA检测细胞培养上清效价分别为1∶ 160,1∶320,1∶320和1∶640,诱生小鼠腹水的抗体效价分别为1∶409,600,1∶819,20 0,1∶819,200和1∶1,638,400,特异性试验结果显示,4株单抗均不与贾第虫滋养体和结肠小袋纤毛虫发生交叉反应.
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抗微小隐孢子虫 Apple 结构域单克隆抗体的制备
采用PCR技术从已构建的微小隐孢子虫cDNA文库中扩增含Apple 结构域基因，构建pGEX-4T-1-Apple重组质粒，并进行原核表达及纯化，得到分子质量大小约为34 kDa的GST-Apple重组蛋白，以其为免疫原，免疫Balb/c小鼠，利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，测定其免疫球蛋白亚类及效价，并用蛋白质印迹法（Western-blot）鉴定其特异性。结果共筛选出能稳定分泌抗重组Apple单克隆抗体的2株杂交瘤细胞株，抗体亚类均为IgG1， Western-blot分析显示2株单抗均能与重组蛋白GST-Apple发生特异性结合。为研究Apple结构域在隐孢子虫侵入过程中的功能提供有效工具。
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抗隐孢子虫子孢子表膜单链抗体4G4的基因克隆及序列测定
应用RT-PCR技术,从分泌抗隐孢子虫表膜单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞4G4中,扩增出抗体VH和VL基因,用Linker(Gly4Ser)3基因,将VH和VL基因连接成ScFv基因,并将其克隆至pMD-18T载体中.经核甘酸序列分析证实,VH和VL基因及Linker基因拼接正确,基因全长717bp,经计算机分析,VH和VL基因均为新发现的基因序列,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征.
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人兽共患隐孢子虫种类及基因型
隐孢子虫(Cryptosporidium)目前已经成为一种重要的肠道病原体,备受关注.该病原具有广泛的宿主类型,可寄生于人和禽类、哺乳类、爬行类和两栖类等240多种动物.目前,人兽共患隐孢子虫共有8个种和1个基因型,即,人隐孢子虫(C.hominis)、微小隐孢子虫(C.parvum)、犬隐孢子虫(C.canis)、猫隐孢子虫(C.felis)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、小鼠隐孢子虫(C.muris)、猪隐孢子虫(C.suis)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)和微小隐孢子虫(C.parvum)鹿基因型.隐孢子虫的传播主要是粪-口途经或间接通过污染的环境、食物和水传播.发展中国家和发达国家腹泻病人的隐孢子虫感染率分别为4%～20%和0.6%～20%,我国腹泻病人的隐孢子虫感染率为1.4%～13.3%,儿童的感染率显著高于成年人.本文分别叙述了人兽共患隐孢子虫的各个种类和基因型的生物学特征和分子学特征,为进一步研究虫株的分布、进化特性以及隐孢子虫在人兽之间的传播途径提供了坚实的理论基础.
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隐孢子虫体外培养研究进展
隐孢子虫是一种重要的人兽共患寄生性原虫,可引起儿童和免疫低下人群以及幼龄动物发生严重胃肠道疾病.长期以来围绕建立隐孢子虫体外培养模型国外学者做了大量探索,国内则在该领域尝试不多.为了研究隐孢子虫详细的内生发育过程,快速筛选抗隐孢子虫的有效药物、研究功能基因表达和外源基因的有效表达等,需要建立有效的体外培养模型.本文就20多年来国内外隐孢子虫培养概况进行了综述.
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哈尔滨市污水处理厂原水中安氏隐孢子虫的分子鉴定
目的 对哈尔滨市污水处理厂原水中隐孢子虫进行分子鉴定.方法 提取污水处理厂原水中的隐孢子虫基因组DNA,对其18S rRNA基因进行巢式PCR扩增,通过序列分析确定隐孢子虫虫种,并与GenBank的参考序列进行同源性分析.结果 从哈尔滨市污水处理厂原水中分离鉴定出安氏隐孢子虫,该虫株18S rRNA基因序列与文献报道的安氏隐孢子虫序列(EU926592)同源性为100%.结论 哈尔滨市污水处理厂原水中存在安氏隐孢子虫,对当地畜牧业的发展构成严重威胁,但对当地人群危害较小.
关键词： 隐孢子虫 污水 18S rRNA基因 分子鉴定
