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体外培养对小鼠植入前胚胎DNA甲基转移酶表达模式影响的研究
目的 研究小鼠植入前胚胎DNA甲基转移酶(Dnmt)1和3b的表达模式及体外培养对其表达的影响.方法 应用荧光免疫细胞化学法检测在体内和体外培养的小鼠植入前胚胎Dnmt1、Dnmt3b的表达.结果 Dnmt1、Dnmt3b在体内组2、4、8细胞胚胎和桑椹胚的胞浆内均呈高表达,在囊胚期则为胞浆内低表达,而核内均无明显表达;Dnmt1、Dnmt3b在体外组囊胚期前胚胎的表达模式均与体内组相似,为胞浆内高表达,而囊胚期则为胞核内低表达.结论 体外培养改变了小鼠囊胚期Dnmt1、Dnmt3b的表达模式,影响基因的表达水平和表达模式.
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培养脊髓神经元中微管相关蛋白5的表达
目的探讨初代培养脊髓神经元中微管相关蛋白(MAP5)的表达特征及其调节因素.方法应用荧光免疫细胞化学检测初代培养脊髓神经元中MAP5的表达.结果 MAP5在培养脊髓神经元中呈网状分布在胞浆及突起中.诺考达唑引起微管解聚及MAP5的结构破坏,荧光物质分布不均匀,突起呈串珠或断裂.PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate)能诱发微管及MAP5聚合,胞浆中荧光物质呈疏松的网状结构.结论 MAP5在初代培养脊髓神经元胞浆及突起中明显表达,且表达受微管解聚剂诺考达唑及微管聚合剂PMA的调控.
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α-synuclein-EGFP在体外培养SH-SY5Y细胞中过表达对包涵体形成及线粒体结构改变的影响
为了观察α-synuclein-pEGFP真核载体在SH-SY5Y细胞内表达状况及其对细胞的影响,本研究用LipofectAMINE法转染SH-SY5Y细胞,用荧光显微镜检测报告基因表达产物EGFP,用荧光免疫细胞化学法检测α-synuclein蛋白表达以及用H E染色、光学显微镜观察转基因表达产物在细胞内的积聚,电镜观察转基因细胞超微结构形态学变化,rhodamine 123染色、荧光显微镜检测线粒体跨膜电位变化.结果证明,该载体转染SH-SY5Y细胞后,在细胞内同时表达报告基因和目的基因;外源基因的表达产物可在细胞内积聚形成包涵体并引起线粒体结构和功能改变.本研究结果提示,本实验获得的细胞模型可模拟Parkinson病发生过程中一些基本的神经病理学特点,可为进一步探讨Parkinson病患者多巴胺能神经元变性缺失机制提供依据.
关键词： α-synuclein 绿色荧光蛋白 荧光免疫细胞化学 线粒体
