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PC12细胞作为氧化应激细胞模型的研究进展
在正常机体内,活细胞可以从不同来源持续产生自由基,如线粒体从电子传递链释放自由基,信号转导剂氧化亚氮等形成活性的亚硝基自由基,氧化还原反应中活化的金属通过Fenton反应和Haber-Weiss反应产生自由基,当种种原因导致体内过氧化氢( H2 O2)、一氧化氮(NO)、过氧自由基O2-等各种活性氧化物(reactive oxygen species,ROS)超过了机体内源性的抗氧化能力,则引起机体内氧化/抗氧化系统平衡失调,发生氧化应激损伤[1].多方面的神经病理学研究显示,神经退行性疾病的发生与供体的氧化产物水平增加有密切关系[2-5],因为脑和神经内含有大量的脂质、耗氧量较高,而神经元不能分裂,所以ROS蓄积引起的损伤有可能是疾病发生发展的重要诱因.
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光合细菌抗氧化特性的体外实验研究
目的 研究类球红细菌(Ⅱ)、沼泽红假单胞菌(2c)、深红红螺菌(rub)3株光合细菌(photosynthetic bacteria,PSB)的体外抗氧化特性,为PSB制品的功效定位提供资料和菌株材料.方法 用试剂盒测定由3株PSB分别制备的菌液、菌液破碎液、菌体、菌体破碎液样品体外产生T SOD,GSH,MDA水平,超氧阴离子和羟自由基的清除能力,以及总抗氧化能力及测定3株PSB菌悬液对3种活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的抗性.结果 体外试验结果表明,3株PSB制品对羟自由基、超氧阴离子自由基均具有抑制和清除作用,由高到低的趋势是:菌液破碎液→菌体破碎液→菌液→菌体,其之间的差异有显著性(P<0.05,P<0.01).同一菌株不同样品的总抗氧化能力,T SOD、GSH活性由高到低的趋势是:菌液破碎液→菌体破碎液→菌液→菌体,其之间的差异有显著性(P<0.05,P<0.01).菌株2c体外抗氧化作用强,菌液和菌液破碎液的T AOC分别是[(2.822±0.105)、(4.306±0.128)U/mg pro],在所有菌株中高.所有样品的MDA含量均较低.Fenton反应所产生的羟自由基对菌株rub、Ⅱ的活菌数有显著影响(P<0.05,P<0.01),对菌株2c活菌数无显著影响.结论 3种PSB菌株都具有抗氧化作用,但具有菌株特异性;PSB抗氧化特性能增加菌株对ROS的抗性.可将PSB制品的功效之一定位于抗氧化,选择菌株2c作为后续研发材料.
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水溶性抗氧化剂清除羟自由基能力的ESR评价方法
目的 建立评价水溶性抗氧化剂清除羟自由基能力的ESR方法。方法 通过加入水溶性的抗氧化剂，减弱DMPO自旋捕获Fenton反应产生的羟自由基的加合物（DMPO-OH*）信号强度，信号强度减弱的程度反映抗氧化剂清除羟自由基的能力。结果 ⑴信号指标采用DMPO-OH*加合物ESR谱第2峰的相对峰高；⑵当［Fe2+］为0.749 mmol*l-1、［H2O2］＞6.49mmol*l-1、DMPO取5μl、间隔时间严格控制在60s，方法可用于评价；⑶ 抗氧化剂清除羟自由基的能力可通过IC50来反映。结论 用ESR测量DMPO捕获Fenton反应产生的羟自由基的方法可用于评价水溶性抗氧化剂清除羟自由基的能力。
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病原体感染与铁代谢
铁(Iron)是人体必需的微量元素,广泛参与机体生命代谢活动,如通过催化氧化-还原反应参与细胞线粒体内电子传递和能量的代谢;参与构成血红蛋白、肌红蛋白在组织间协助氧和二氧化碳的运输;参与免疫反应、遗传物质DNA的合成等.铁缺乏会导致机体贫血和免疫系统的损害;而铁沉积通过Fenton反应可增强自由基介导的氧化应激对组织和细胞造成损伤.由此可见,铁代谢与机体的生命活动密切相关.铁代谢的变化与病原体感染导致的疾病之间的关系正受到更多的关注.
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吡咯啉氮氧自由基及衍生物抗大鼠不同组织脂质过氧化损伤
目的在体外研究新合成吡咯啉氮氧自由基及衍生物对大鼠肝细胞膜、线粒体、红细胞及卵黄磷脂脂质过氧化的保护作用,并探讨其作用机制.方法采用Fenton反应法诱导大鼠肝细胞膜、肝线粒体、卵黄磷脂脂质过氧化,通过硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量;415 nm处测定H2O2诱导的红细胞溶血作用;邻苯三酚自氧化法检测其对超氧阴离子(O*2)清除作用.结果带一个活性基团( NO*)的化合物A、B可明显地抑制MDA的产生(P<0.01),抗H2O2诱导的红细胞溶血作用,但并不影响O*2的产生;具有两个活性基团(NO*)的化合物C作用略为明显,IC50<31.25 mg*L-1;而不带活性基团(NO*)的化合物D无抗氧化能力.结论稳定性氮氧自由基化合物通过清除生物体系中羟基自由基(*OH)发挥其抗脂质过氧化作用,而对*OH的捕捉可能是通过活性基团NO*实现的.
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甲苯胺蓝光度法测定Fenton反应产生的羟自由基
目的:提出检测Fenton反应产生羟自由基的新方法.方法:羟自由基与甲苯胺蓝发生氧化反应后,甲苯胺蓝的颜色发生变化,用分光光度计测定其ΔA值的变化,可间接测定羟自由基的生成量.通过对测定条件的研究,得到佳测定方案.结果:甲苯胺蓝,FeSO4,H2O2与ΔA612 在一定范围内呈明显的量效关系.此外发现抗氧化剂药物甘露醇、抗坏血酸、硫脲与羟自由基清除率也呈明显的量效关系.结论:甲苯胺蓝光度法稳定性好,操作简便,测定快速,是一种简便的筛选抗羟自由基的清除剂和有效抗氧化剂药物的方法.
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荧光分析法测定水发食品中过氧化氢残留量
过氧化氢是一种强氧化剂,具有消毒、杀菌和漂白等功能,被广泛使用.在食品中,根据我国<食品添加剂使用卫生标准>的规定,只允许在袋装豆腐干和生鲜牛奶的生产过程中使用,但成品中不得有过氧化氢残留[1].近年来,食品中残留的过氧化氢引起的食物中毒事件时有发生[2],而我国目前尚无定量的标准检测方法,文献报道多用滴定分析法、分光光度法[3],且费时、容易受混杂因素的影响,选择上受到一定限制.作者基于Fe(Ⅱ)与H2O2在酸性介质中,经Fenton反应产生羟基自由基,与苯甲酸发生羟基化反应产生羟基苯甲酸,在碱性介质中可产生很强的荧光,而苯甲酸本身几乎不产生荧光[4],在优化的条件下,荧光强度的增加与过氧化氢的含量有定量关系,据此建立荧光分析法测定水发食品中过氧化氢残留量.
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茶色素体外抗氧化作用研究
目的 研究茶色素(TP)体外抗氧化作用.方法 通过邻苯三酚自氧化和抗体外氢氧根法分别测定TP与阳性对照药维生素C的抗氧化作用,比较两者作用程度.结果 0.1％,0.2％,0.3％TP对邻苯三酚自氧化平均抑制率分别为每分钟7.022％,13.427％,16.910％;0.1％,0.2％维生素C分别为16.340％,32.850％.TP与维生素C对邻苯三酚自氧化平均抑制率呈剂量依赖式增加.0.1％,0.3％,0.5％,0.7％,1.0％ TP对体外羟自由基(·OH)生成的平均抑制率分别为(11.00±0.70)％,(20.68±0.60)％,(27.04±0.07)％,(32.70±0.30)％,(42.90±0.70)％；0.1％,0.3％,0.5％,0.7％,1.0％维生素C对体外·OH生成的平均抑制率分别为(4.50±0.30)％,(7.40±1.00)％,(11.42±0.23)％,(14.80±0.40)％,(16.80±0.60)％.TP和维生素C对体外·OH生成抑制率均呈剂量依赖性增加.TP和维生素C对体外·OH生成均有一定抑制作用,TP抑制作用较维生素C显著.相同剂量维生素C和TP抑制作用差异有统计学意义(P＜0.01)；不同剂量TP对体外·OH生成的抑制作用差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TP体外具有抗氧化作用,尤其是在体外抗氢氧根作用方面.
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食品中过氧化氢残留量的荧光测定
目的 建立一种新的测定食品中过氧化氢残留量的方法.方法 用荧光分析方法检测食品中的过氧化氢残留量.结果 本实验大激发波长301nm,大发射波长为405nm,线性范围为(8.74×10-7)～(5.25×10-6)mol/L,检出限(2.13×10-8)mol/L,回收率为96.3%～102.8%.结论 此法快速,灵敏,准确度高,可用于食品中过氧化氢残留量的测定.
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1-(5'-溴阿魏酰基)-4-苄基哌嗪盐酸盐类似物体外清除羟自由基活性研究
目的:研究1-(5'-溴阿魏酰基)-4-苄基哌嗪盐酸盐类似物(BFP,L1～9)在体外清除羟自由基(·OH)的活性.方法:采用邻二氮菲-Fe2+氧化法测定BFP、阿魏酸(FA)、抗坏血酸(Vc)在体外对Fenton反应产生·OH的清除能力,计算表观清除率(CL).结果:L5的大·OH表观清除率(CLmax)大,L8小,L1、L3、L5、L7的CLmax都比FA、Vc大.结论:BFP苄基苯环上2-Cl、3-Cl、2-CH3、4-CH3、3-OCH3取代,可增强体外清除·OH活性;3-CH3取代,体外清除·OH活性基本不变;2-OCH3、4-OCH3取代,体外清除·OH活性降低.
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百合多糖对羟自由基的清除作用
目的研究百合多糖对羟自由基的清除作用.方法以Fenton反应产生羟自由基,用邻二氮菲-Fe2+氧化比色法测定百合多糖对羟自由基的清除率.结果百合多糖抑制羟自由基(·OH)50%所对应的质量浓度IC50是1.04mg.mL-1,对照品苯甲酸钠的IC50是3.95mg.mL-1.结论百合多糖具有较强的清除羟自由基的能力.
