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  • 肝血流动力学对肝线粒体影响的实验研究

    作者:薛建国;王宇;魏常胜;李春林;周延忠

    目的探讨肝血流动力学对肝线粒体影响及活血化淤中药对肝血流动力学的作用机制.方法在大鼠肝硬变制备及肝硬变制备过程中同时服用活血化瘀中药,分别行肝胆显像,测定肝灌注液乳酸含量,肝组织匀浆SOD、MDA、ATP酶的水平,肝细胞流式细胞学检查,光镜及电镜检查.结果肝硬变组:肝胆显像:峰时延长,30秒排泄率明显下降,肝灌注液乳酸含量及肝匀浆MDA水平升高,肝组织匀浆S01D、ATP酶水平降低,肝细胞流式细胞学检查及电镜检查;线粒体膜结构破坏,线粒体数下降.中药组:肝胆显像:与肝硬变组比较峰时提前P<0.05,30秒排泄率升高P<0.01.肝灌注液乳酸含量及肝匀浆MDA水平降低,肝组织匀浆SOD、ATP酶水平升高,与肝硬变组比较P<0.05.肝细胞流式细胞学检查及电镜检查.线粒体数与肝硬变组比较P<0.01.光镜:与肝硬变组比较,肝纤维化程度P<0.05.结论肝有效血流下降,导致线粒体功能及结构受损,线粒体数下降.活血化瘀中药通过增加肝脏血液灌流,改善肝脏微循环和肝供氧,有力保护肝线粒体,延缓抑制肝纤维化形成.

  • 败血症大鼠肝线粒体ATP酶的变化与线粒体损伤

    作者:黄美蓉;王志强;尹刚

    目的:观察败血症大鼠肝线粒体ATP酶活性的变化,探讨败血症导致细胞变化的机制.方法:采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制败血症大鼠模型,比较各组死亡率、原线粒体ATP酶活性以及平均动脉压(MAP)的变化.结果:大鼠在复制内毒素休克模型后,24 h死亡率明显增高,肝线粒体钠钾ATP酶、钙ATP酶、镁ATP酶、钙镁ATP酶活性以及MAP均随术后时间延长而下降,且死亡率与各ATP酶活性的改变呈明显的正相关(P<0.05).结论:肝线粘体ATP酶活性降低,细胞内钙超载、镁降低所致的细胞损伤是内毒素休克的重要因素.

  • 葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和PEPCK,G6Pase表达的影响

    作者:郑丁;时昭红;郭洁;张书;付丽鹤;刘凡;涂蓓蕾

    目的:观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达的影响,并探讨其作用机制.方法:采用高脂饲料复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,并应用小于扰RNA(siRNA)技术抑制PGC-1α的表达,将60只大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组(50 mg·kg-1)、转染组、空转组、葱白加转染组.苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织组织结构;检测血液流变学及血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝脏PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白的表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;大鼠血浆黏度(低切、中切、高切)、全血黏度均不同程度升高(P<0.05,P<0.01);血清ALT,AST,TC,TG水平明显增高(P<0.05);PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达水平明显降低(P<0.05);给予葱白提取物干预后,葱白组大鼠肝脂肪变性明显减轻;血清ALT,AST,TC,TG水平均降低(P<0.05),PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05).PGC-1α转染的大鼠,即使给予同等剂量葱白提取物,与模型组比较,葱白加转染组肝脂肪变性未见明显改善;葱白加转染组PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达无明显差异.结论:葱白提取物能够改善NAFLD模型大鼠肝脂肪变性,其机制可能与增加PGC-1α的转录活性,促进PEPCK,G6Pase的表达进而增加线粒体合成有关.

  • 基于“有故无陨”理论探讨何首乌对肾阴虚大鼠肝线粒体能量代谢的影响

    作者:高峰;焦晨莉;余金花;欧莉;王丽萍;卫培峰

    目的:基于“有故无陨”理论探讨何首乌对肾阴虚大鼠肝线粒体能量代谢机制的影响.方法:将50只SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,肾阴虚高、中、低剂量组.肾阴虚高、中、低剂量组分别按照24、12、6g/kg剂量连续灌胃给药何首乌溶液3个月,空白对照组和模型组每天以同体积0.9%氯化钠溶液进行灌胃.实验结束,剪下肝脏制备大鼠肝线粒体,通过检测琥珀酸脱氢酶(SDH)、线粒体腺苷酸总含量(TAN)及能荷(EC)水平变化,探讨何首乌对肾阴虚大鼠肝线粒体能量代谢的影响.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠SDH、TAN及EC值均显著降低(P<0.05);与模型组比较,各给药组SDH、TAN及EC值均显著升高(P<0.05).结论:何首乌可明显改善肾阴虚大鼠肝线粒体能量代谢障碍.

  • 四物汤对血虚证模型大鼠肝线粒体蛋白质组的影响

    作者:龚文君;沃兴德;卢德赵;丁慧登;李毅

    目的 探讨四物汤治疗血虚证的机理.方法 Wistar大鼠随机分为模型组、治疗组、正常组各6只.模型组和治疗组大鼠在第1、4、7d皮下注射2%乙酰苯肼生理盐水注射液,第4d起模型组生理盐水灌胃,治疗组给予四物汤灌胃,正常组给予生理盐水,连用7d后,检测外周血象、肝脾湿重;提取肝脏线粒体蛋白质,用双向电泳等蛋白质组学技术测定大鼠肝线粒体中有影响的蛋白质.结果 模型组大鼠出现萎靡、苍白等血虚症状,肝脾明显肿大,红细胞数和血红蛋白量明显降低,白细胞、网织红细胞计数明显升高(P<0.01);四物汤治疗后外观较快恢复,红细胞、血红蛋白、网织红细胞数较上升(P<0.01);模型大鼠肝线粒体蛋白质与正常相比有14个能量代谢相关蛋白质的水平发生改变,四物汤可使这些改变的蛋白质水平有所恢复.结论 四物汤可以调节肝线粒体内一些酶和伴侣分子,清除自由基和过氧化物,稳定线粒体结构,保护线粒体功能;改善糖、脂类、蛋白质代谢,从蛋白质分子水平改善血虚动物的虚损状况.

  • β-羧乙基锗倍半氧化物和还原型谷胱甘肽及维生素B1配伍抗氧化作用

    作者:阎月;葛蒙梁;阎明;刘冬玲;段绍瑾

    目的:探讨β-羧乙基锗倍半氧化物(Ge-132)与还原型谷胱甘肽(GSH)和维生素B1(VB1)联合应用在体内抗氧化的作用。方法:观察这些药物对乙醇诱发大鼠氧应激态作用下的抗氧化酶活性变化。结果:肝线粒体总超氧化物歧化酶和铜锌超氧化物歧化酶活性,乙醇组与正常对照组比较,其活性显著下降(P<0.05);乙醇+Ge-132+VB1+GSH组与乙醇组比较,肝线粒体酮锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)活性上升(P<0.05)。结论:Ge-132与GSH和VB1联合应用对乙醇导致的自由基损伤有协同保护作用。

  • 硫普罗宁(诺宁)治疗酒精性肝病临床疗效观察

    作者:李英;李未华

    诺宁(硫瞢罗宁)硫普罗宁是一种与青霉胺性质相似的含巯基药物,具有保护肝脏组织及细胞的作用.动物试验显示,硫普罗宁能够通过提供巯基,防止四氧化炭、乙硫氨酸、对乙酰氨基酚等造成的肝脏损害,并对慢性肝损伤的甘油三酯的蓄积有抑制作用.硫普罗宁可以使肝细胞线粒体中ATP酶的活性降低,从而保护肝线粒体结构,改善肝功能.而酒精性肝病常伴明显肝损伤,对此大多给予高蛋白饮食及支持治疗.

    关键词: 肝线粒体 ATP酶 活性
  • 大豆异黄酮对去卵巢大鼠肝线粒体的抗氧化作用

    作者:蔡美琴;张岚;杨科峰;毛洵霞;马蓓蕾;高蓓君

    目的:探讨大豆异黄酮(soybean isoflavones,SI)对去卵巢大鼠肝线粒体抗氧化能力的影响.方法:3月龄SD雌性大鼠随机分为3组,每组10只,假手术对照组和模型组给予去离子水,干预组给予SI提取物,灌胃.于第13w末处死大鼠,电镜观察肝线粒体形态结构变化,氧电极法测定肝线粒体呼吸功能,并测定肝线粒体、胞浆及肝组织匀浆MDA的含量,肝组织匀浆GSH-Px活性.结果:与对照组比较,模型组和干预组大鼠肝线粒体结构和抗氧化功能均有显著下降,与模型组比较,干预组肝线粒体结构较完整,肝线粒体琥珀酸和NADH氧化呼吸链Ⅳ态呼吸速度(R4)显著下降,呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)和氧化磷酸化效率(OPR)有明显增加;干预组肝脏线粒体、胞浆及肝组织匀浆MDA含量明显下降或有下降趋势;干预组肝组织匀浆GSH-Px活性明显增强.结论:大豆异黄酮能够提高去卵巢大鼠肝组织的抗氧化能力.

  • 二氧化硫对大鼠肝线粒体的损伤作用

    作者:杜青平;孟紫强

    二氧化硫(SO2)是一种常见的大气污染物,主要通过人和动物的呼吸系统进人机体,并以SO2- 3和HSO- 3形态随血液分布全身而发挥生物学作用.SO2吸入可引起小鼠各种组织器官的氧化损伤作用[1],但有关SO2对亚细胞组分的影响尚未见报道.在真核生物中线粒体是进行氧化磷酸化的细胞器,是细胞内能量供应的场所,同时线粒体的氧化磷酸化极易产生自由基,是自由基产生的主要途径[2].我们以大鼠肝线粒体为材料,研究SO2吸入后大鼠肝线粒体及SO2体内衍生物亚硫酸盐对分离线粒体损伤的影响,从亚细胞水平来阐明SO2的毒作用机制.

  • 单四氢呋喃型番荔枝内酯类化合物对大鼠线粒体复合酶Ⅰ活性的影响

    作者:苗筠杰;徐晓芳;陈勇;陈建伟;李祥

    目的 探讨单四氢呋喃型番荔枝内酯类(单THF型ACGs)化合物对大鼠肝线粒体复合酶Ⅰ活性的影响.方法 选用6个结构不同的单THF型ACGs,通过测定其对大鼠肝线粒体复合酶Ⅰ的抑制活性,明确这些化合物结构中四氢呋喃环与内酯环之间碳数、取代羟基个数以及四氢呋喃环的核心构型对大鼠肝线粒体复合酶Ⅰ活性的影响.结果 6个单THF型ACGs对大鼠肝线粒体复合酶Ⅰ均有一定的抑制活性,构效关系分析可见,在单THF型ACGs中,四氢呋喃环与内酯环间碳链越短,化合物活性越强,取代羟基个数并非是影响活性的决定性因素.结论 四氢呋哺环的核心构型为苏式/反式/赤式时比苏式/反式/苏式构型的抑制线粒体复合酶Ⅰ的活性强.

  • 5种黄连生物碱大鼠体外肝代谢特征比较

    作者:李志慧;薛宝娟;张玉杰;苏瑾;叶静;魏宝红

    目的 探讨黄连中5种结构相似异喹啉生物碱大鼠体外肝代谢的选择性.方法 采用大鼠体外肝微粒体温孵方法,通过考察温孵时间、微粒体蛋白浓度以及底物浓度对小檗碱、巴马汀、黄连碱、表小檗碱和药根碱代谢的影响,求得代谢反应动力学参数Km、Vmax和CLint.结果 5种黄连生物碱成分的体外肝代谢动力学参数Km和CLint间差异明显(P<0.05).结论 黄连中5种异喹啉生物碱大鼠体外肝代谢存在显著选择性.

  • 解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠肝线粒体的保护作用

    作者:毛德文;邱华;马银瑶;农朝赞;余晶

    目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠肝线粒体的保护作用,并从抗脂质过氧化探讨其作用机制.方法:采用皮下注射硫代乙酰胺(TAA)法复制暴发性肝衰竭大鼠模型,SPF级wistar大鼠84只,随机分为空白组,模型组,解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组,安宫牛黄丸组,乳果糖组.造模前3天开始灌胃给药,2次/天,间隔12h,共给药5天12h;测定各组大鼠肝线粒的肿胀度、肝脏坏死面积及肝线粒体内MDA、SOD、GSH、NO.结果:模型组肝线粒体对外源性钙离子引发肿胀的敏感性下降、肝细胞大量坏死,肝线粒体内MDA含量急剧升高,SOD活性及CSH、NO含量显著下降,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);解毒化瘀Ⅱ方各组能提高肝线粒体对外源性钙离子引发肿胀的敏感性、减少肝脏坏死面积,抑制肝线粒体内脂质过氧化物MDA的生成,恢复SOD的活力及GSH、NO含量,并呈现量效关系.结论:在暴发性肝衰竭致病过程中,肝线粒体内的NO主要起保护性作用;解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭肝线粒体具有较强的保护作用,可能是通过拮抗脂质过氧化来实现.

  • 菟丝子醇提液对衰老模型小鼠肝线粒体保护作用的实验研究

    作者:王志军;欧芹;魏晓东;王跃新

    目的 探讨菟丝子醇提液对衰老模型小鼠肝脏线粒体的保护作用及机制.方法 将纯系昆明种小鼠50只,随机分为青年组、衰老模型组、给药15 d组、给药30 d组和给药45 d组. D-半乳糖制作衰老模型,经胃灌服菟丝子醇提液.采用比色分析法测定呼吸链复合体Ⅳ活性,PCR法检测线粒体DNA缺失,RT-PCR法检测COⅠmRNA的表达水平;同时观察不同给药天数对上述指标的影响.结果 D-半乳糖可诱导小鼠肝线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性降低(P<0.01),肝mtDNA的缺失增加,呼吸链复合体Ⅳ COⅠ亚基mRNA的表达水平增高.菟丝子醇提液可提高呼吸链复合体Ⅳ活性,减少mtDNA缺失,降低呼吸链复合体Ⅳ COⅠ亚基mRNA的表达.结论 菟丝子醇提液可提高衰老模型小鼠呼吸链复合体Ⅳ活性,降低COⅠ亚基mRNA表达,减少mtDNA缺失,而发挥保护肝脏线粒体的作用,并随给药时间的延长作用更显著.

  • 肉苁蓉醇溶成分对致衰大鼠肝线粒体的保护作用

    作者:徐辉;魏晓东;欧芹;张鹏霞

    目的:研究肉苁蓉醇溶成分对D-半乳糖所致衰老大鼠模型肝线粒体的保护作用.方法:用D-半乳糖制备衰老模型大鼠,连续灌服肉苁蓉醇溶成分6周,测定肝脏Ca2+-ATP酶活性、肝线粒体MDA含量、膜流动性、PLA2活性.结果:肉苁蓉醇溶成分显著提高衰老模型大鼠肝脏Ca2+-ATP酶活性,肝线粒体膜流动性(P<0.01),显著降低肝线粒体MDA含量、PLA 2活性(P<0.01),但各指标不能恢复到青年组水平.结论:肉苁蓉醇溶成分对衰老模型大鼠肝线粒体具有保护作用,是其抗衰老作用的有效成分.

  • 肉苁蓉不同成分抗衰老作用的研究

    作者:徐辉;魏晓东;欧芹;李莹;徐晓霞;王景涛;田国忠

    目的:研究肉苁蓉不同成分对致老大鼠增龄性变化的影响.方法:用D-半乳糖制备衰老模型大鼠,连续灌服肉苁蓉不同成分6周,测定肝脏Ca2+-ATP酶活性、肝线粒体MDA含量、膜流动性、PLA活性.结果:肉苁蓉各成分显著提高衰老模型大鼠肝脏Ca2+-ATP酶活性,肝线粒体膜流动性,显著降低肝线粒体MDA含量、PLA2活性,肉苁蓉水提液的效果明显.结论:肉苁蓉不同成分可以通过提高肝脏抗氧化能力,减少肝线粒体氧化损伤,起到延缓衰老的作用,且肉苁蓉水提液的作用优于醇溶成分和多糖.

  • “双固一通”电针法对老年阳虚证模型大鼠肝线粒体结构及ATP酶活性的影响

    作者:刘建民;吕景芳;王华;刘静;陈明扬;王静芝

    目的:探讨“双固一通”电针法对老年阳虚证模型大鼠肝线粒体形态结构及 ATP 酶活性的影响。方法选用5月龄SD雄性大鼠40只,随机分为A组、B组、C组和D组,每组10只。A组为正常对照组,其余3组大鼠均皮下注射D-半乳糖40 d后再肌肉注射氢化可的松7 d制作老年阳虚证大鼠模型。C组采用“双固一通”电针法,电针关元、足三里、百会穴;D组采用电针中极、阴陵泉、印堂穴治疗。每星期治疗6次,共治疗4星期。治疗后以游泳力竭时间判定各组大鼠抗疲劳能力,并采用透射电镜观察肝线粒体结构、比色法检测各组大鼠肝组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果与A组比较,B组和D组大鼠平均游泳力竭时间明显缩短(均P<0.01),肝线粒体内外膜模糊不清,嵴变形、断裂或消失,肝线粒体出现肿胀等改变,Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均下降(P<0.01,P<0.05)。C组比B组游泳力竭时间明显延长(P<0.01),肝线粒体形态结构得到明显改善,Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均明显提高(P<0.01,P<0.05);D组与B组比较,大鼠平均游泳力竭时间缩短(P<0.05),肝粗面内质网有脱颗粒,肝Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低(P<0.05)。结论“双固一通”电针法可改善老年阳虚证模型大鼠阳虚抗疲劳能力,改善肝线粒体超微结构,提高肝Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,促进肝脏能量代谢。

  • 天然牛磺酸对肝纤维化大鼠肝线粒体微粒体脂质过氧化的影响

    作者:邓鑫;梁健;李益忠;张锡流

    脂质过氧化是肝维化发生和发展的主要原因[1].有害物质通过攻击肝组织脂质细胞膜、细胞器,造成脂质过氧化损伤,从而形成脂质过氧化物,引起细胞代谢及功能障碍,甚至死亡.线粒体及微粒体是脂质过氧化作用损伤的主要部位,本实验采用四氯化碳(CCl4)肝纤维化模型,从线粒体、微粒体探讨天然牛磺酸抗肝纤维化脂质过氧化作用.

  • 丙泊酚对鼠肝线粒体能量转换功能的影响

    作者:隋波;俞卫峰;王学敏;马永德

    丙泊酚的化学结构属烷基替代苯.由于其他替代苯结构的物质在线粒体脂膜中具有质子活性,起着解偶联氧化磷酸化的作用[1],因此,探讨丙泊酚对离体鼠肝线粒体能量转换功能的影响,对了解其肝细胞毒性作用具有重要意义.

  • 吡咯啉氮氧自由基及衍生物抗大鼠不同组织脂质过氧化损伤

    作者:王书芳;王勤;潘静;张燕;张自义

    目的在体外研究新合成吡咯啉氮氧自由基及衍生物对大鼠肝细胞膜、线粒体、红细胞及卵黄磷脂脂质过氧化的保护作用,并探讨其作用机制.方法采用Fenton反应法诱导大鼠肝细胞膜、肝线粒体、卵黄磷脂脂质过氧化,通过硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量;415 nm处测定H2O2诱导的红细胞溶血作用;邻苯三酚自氧化法检测其对超氧阴离子(O*2)清除作用.结果带一个活性基团( NO*)的化合物A、B可明显地抑制MDA的产生(P<0.01),抗H2O2诱导的红细胞溶血作用,但并不影响O*2的产生;具有两个活性基团(NO*)的化合物C作用略为明显,IC50<31.25 mg*L-1;而不带活性基团(NO*)的化合物D无抗氧化能力.结论稳定性氮氧自由基化合物通过清除生物体系中羟基自由基(*OH)发挥其抗脂质过氧化作用,而对*OH的捕捉可能是通过活性基团NO*实现的.

  • 葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和线粒体生物合成的影响

    作者:时昭红;郑丁;郭洁;张书;付丽鹤;刘凡;涂蓓蕾

    目的 观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠PGC-1α、核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF-1)、线粒体转录因子A(transcription factor A,TFAM)表达的影响,并探讨其作用机制.方法采用高脂饲料复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,并应用小干扰RNA(SiRNA)技术抑制过氧化物酶体增殖物激活受体α辅助激活因子-1α(peroxisome proliferator activated receptor-γ coactivator 1 α,PGC-1α)的表达.将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组、转染组、空转组、转染加葱白组.光镜下观察肝组织HE染色组织结构;检测血清AST、ALT、TC、TG水平;ReahimePCR和Western-blot分别检测大鼠肝脏PGC-1α mRNA及PGC-1α、NRF-1、TFAM蛋白质的表达.结果 模型组出现明显肝脏脂肪变性;血清ALT、AST、TC、TG水平也高于正常组(P<0.05);相较于模型组,葱白组肝内脂肪变性明显减轻;血清ALT、AST、TC、TG水平均降低(P<0.05).PGC-1α、NRF-1、TFAM表达情况:与正常组比较,模型组的PGC-1α和NRF-1、TFAM蛋白的表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,葱白组的PGC-1α和NRF-1、TFAM蛋白表达升高(P<0.05);与空转组比较,转染组的PGC-1α和NRF-1、TFAM蛋白表达水平下降(P<0.05);与葱白组比较,转染加葱白组的PGC-1α和NRF-1、TFAM蛋白表达水平下降(P<0.05).结论 辛温通阳中药葱白提取物可能通过提高PGC-1α的转录活化水平,促进NRF-1、TFAM的表达从而促进肝线粒体生物合成改善肝脂肪变性.

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