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氧调节蛋白150诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的研究
目的:探讨氧调节蛋白150(ORP150)是否能够通过调控内质网应激来对抗蛋白酶体抑制剂介导的甲状腺未分化癌细胞凋亡.方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO、8305C和8505C,分别设空白对照组、siORP150组、随机序列核酸(siRNA)组、ORP150组、siCHOP组和siORP150+ siCHOP组,加或不加蛋白酶体抑制剂MG132(2μmol/L)处理；利用微小RNA干扰技术封闭ORP150及CHOP的表达；实时定量PCR法、蛋白质印迹法及流式细胞仪(FCM)检测CHOP基因表达及各组甲状腺未分化癌细胞凋亡率.结果:FRO、8305C和8505C细胞中,ORP150表达载体组中CHOP mRNA较空白载体组显著降低,P＜0.01；siORP150组中CHOP mRNA较随机序列核酸siRNA组显著升高,P＜0.01.在FRO细胞中,蛋白质印迹法检测CHOP得到相似的结果.FCM检测结果显示,FRO细胞中siORP150组细胞凋亡率为87.72％,而这种增敏效应被siCHOP所抑制,其细胞凋亡率为56.96％,两组差异有统计学意义,P＜0.01;8305C和8505C细胞中也得到相似的结果.结论:氧调节蛋白150通过调节CHOP的表达调控蛋白酶体抑制剂MG132诱导甲状腺未分化癌细胞凋亡的作用.
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蛋白酶体抑制剂对甲状腺未分化癌细胞凋亡影响及其机制的探讨
目的:探讨蛋白酶体抑制剂对未分化甲状腺癌FRO细胞中氧调节蛋白150 (ORP150)表达的影响,以及ORP150在蛋白酶体抑制剂诱导FRO细胞凋亡中的作用.方法:选取人甲状腺未分化癌细胞系FRO,分别设空白对照组、蛋白酶体抑制剂Lactacystin、PSI、Epoxomycin和MG132处理组；利用微小RNA干扰技术,减少ORP150的表达,实时定量PCR法、蛋白质印迹法分别检测各组细胞中ORP150 mRNA和蛋白表达；流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果:与空白对照组相比,蛋白酶体抑制剂Lactacystin、PSI、Epoxomycin和MG132均显著增加FRO细胞系中ORP150基因表达水平,P＜0.01；与空白对照组和随机序列核酸siRNA组相比,siORP150处理组中ORP150mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.01),其凋亡率显著增加,P＜0.01.结论:蛋白酶体抑制剂能够上调甲状腺未分化癌FRO细胞系中ORP150基因的表达水平,siOPR150具有特异性降低OPR150基因表达的作用,同时增加蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌FRO细胞凋亡作用.
