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乌头汤对神经病理性疼痛模型小鼠抑郁及焦虑的影响
目的 观察乌头汤对L5脊神经结扎(spinal cord ligation, SNL)模型小鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain, NP)诱发抑郁及焦虑的影响.方法 将小鼠按随机数字表法分为假手术组,模型组,乌头汤高、中、低剂量组,普瑞巴林组,每组24只.除假手术组外,其余各组小鼠制备 SNL 模型.造模成功后,乌头汤高、中、低剂量组灌胃乌头汤水煎液12.60,6.30,3.15 g/kg,普瑞巴林组灌胃普瑞巴林0.25 g/kg,假手术组及模型组灌胃等体积生理盐水.1次/d,连续给药21 d.给药后7、14、21 d,以糖水偏好实验、强迫游泳实验、旷场实验观察小鼠的抑郁、焦虑行为,并以免疫组化方法检测各组小鼠海马内磷酸化细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, p-ERK)阳性细胞数,以Western blot法检测小鼠海马内p-ERK及突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein 95, PSD95)的蛋白表达水平.结果 给药后7、14、21 d,与模型组比较,乌头汤高剂量组小鼠50%缩足阈值[分别为(0.76±0.21)比(0.05±0.03)、(0.93±0.33)比(0.05±0.01)、(1.12±0.20)比(0.04±0.01)]增高(P<0.01),糖水消耗量[分别为(1.86± 0.44)g比(0.84±0.23)g、(1.84±0.10)g比(1.02±0.18)g、(1.63±0.31)g比(0.75±0.23)g]增加(P<0.01),强迫游泳后4 min不动时间[分别为(128.90±35.27)s比(180.30±21.81)s、(125.50±23.07)s比(195.30± 27.70)s、(169.50±23.07)s比(207.50±7.46)s]降低(P<0.01),旷场中央区停留时间[分别为(35.35±7.61)s比(13.90±2.27)s、(26.26±3.61)s比(13.08±1.98)s、(24.04±6.57)s比(10.62±3.38)s]增加(P<0.01);给药后21 d,乌头汤高剂量组小鼠海马组织p-ERK阳性细胞数[(11.00±4.89)个比(33.67±7.35)个]较模型组减少,海马 p-ERK[(0.15±0.09)比(0.54±0.04)]、PSD95[(0.32±0.04)比(0.57±0.09)]蛋白表达降低(P<0.01).结论 乌头汤可缓解SNL模型小鼠NP,并改善其诱发的抑郁及焦虑症状,调节NP病理后期小鼠海马p-ERK、PSD95的表达水平.
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肝胃百合汤对慢性应激与幽门螺杆菌双重损伤因素模型小鼠胃黏膜组织TFF1、p-ERK蛋白表达的影响
目的 观察肝胃百合汤对慢性应激与幽门螺杆菌(Hp)双重损伤因素模型小鼠胃黏膜组织三叶因子1 (TFF1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达的影响,探讨其治疗慢性应激性胃溃疡合并Hp感染的相关机制.方法 将60只BALB/c雄性小鼠随机分为空白组、应激组、单纯Hp组、双重因素组、肝胃百合汤组、雷尼替丁组,每组10只,选取10种不可预知刺激因素制备慢性应激小鼠模型,造模第7日给予单纯Hp组、双重因素组、肝胃百合汤组、雷尼替丁组灌胃Hp菌液;肝胃百合汤组给予肝胃百合汤灌胃,雷尼替丁组给予雷尼替丁灌胃,其余各组给予蒸馏水灌胃.采用免疫组化检测小鼠胃黏膜组织TFF1、p-ERK蛋白表达.结果 双重因素组溃疡指数与TFF1、p-ERK蛋白表达明显高于空白组(P＜0.01);与双重因素组比较,肝胃百合汤组和雷尼替丁组溃疡指数显著降低(P＜0.01),且肝胃百合汤组明显低于雷尼替丁组(P＜0.01);肝胃百合汤组和雷尼替丁组TFF1、p-ERK蛋白表达明显高于双重因素组(P＜0.05,P＜0.01),且肝胃百合汤组明显高于雷尼替丁组(P＜0.01).结论 慢性应激与Hp可协同致胃黏膜损伤,肝胃百合汤可促进TFF1、p-ERK的表达及胃黏膜的修复,达到促进溃疡愈合的目的.
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不同频率电针对神经病理性疼痛诱发焦虑大鼠ACC区磷酸化ERK水平的影响
目的 观察不同频率电针对神经病理性痛诱发焦虑大鼠前扣带回皮层(anterior cingulate cortex,ACC)细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)磷酸化(p-ERK)水平的影响,探讨电针治疗神经病理痛诱发焦虑的佳频率及其可能机制.方法 将48只SD大鼠随机分为空白对照组(8只)、假手术组(8只)、模型组(8只)、2 Hz电针组(8只)、15 Hz电针组(8只)和100 Hz电针组(8只).将其中32只大鼠建立L5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)模型,假手术组仅分离L5脊神经,但不进行结扎.2、1 5、100 Hz电针组在造模后选用双侧“环跳”、“阳陵泉”穴,并分别用2、1 5、100 Hz进行电针治疗,隔日1次,每次30 min,共1 3次.采用动态足底触觉仪检测大鼠双侧后足缩足阈(paw withdrawal thresholds,PWTs)作为机械痛阈;高架O型迷宫试验(elevated zero maze test,EZMT)评估大鼠的焦虑水平;Western blot法测ACC区的p-ERK水平.结果 PWTs:SNL术后第3天,模型组大鼠的患侧PWTs均明显低于假手术组(均P＜0.01);2、15、100 Hz电针组大鼠术后第8、12、16、20、28天的患侧PWTs呈持续升高趋势,均高于同时点的模型组(P＜0.01);且2 Hz电针组大鼠患侧PWTs较15 Hz电针组和100 Hz电针组高(P＜0.01).EZMT评分:与假手术组比较,模型组大鼠开放臂活动时间(open arm time,OAT)明显减少(P ＜0.05);15、100 Hz电针组OAT明显多于模型组(P＜0.05);而2 Hz电针组OAT与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).ACC内p-ERK蛋白表达:模型组患侧ACC区p-ERK蛋白表达水平明显高于假手术组(P＜0.01),而2、15、100 Hz电针组患侧ACC区p-ERK蛋白表达水平明显低于模型组(P＜0.01).且100 Hz电针组患侧ACC区p-ERK蛋白表达水平明显低于2、15 Hz电针组(P ＜0.01,P＜0.05).结论 电针干预神经病理痛和其诱发的焦虑情绪的佳频率不同.2 Hz电针治疗神经病理痛效果更好,但对于神经病理痛诱发的焦虑情绪,100 Hz疗效更优.其中,100 Hz电针对神经病理痛诱发焦虑情绪的改善与电针降低大鼠ACC区p-ERK水平有关.
关键词： 电针 神经病理痛 焦虑 磷酸化细胞外信号调节激酶 -
磷酸化细胞外信号调节激酶在海马提取液诱导神经干细胞向神经元分化过程中的表达
目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路在海马提取液诱导神经干细胞向神经元分化过程中的作用. 方法 切割12只SD大鼠右侧穹隆海马伞,14d后分别取切割侧和正常侧海马制成匀浆,离心收集上清液,蛋白定量后备用.将获取的鼠胚海马源性神经干细胞培养在24孔板中,分成3组,每组8孔,于无血清条件下,切割组加切割侧海马提取液;正常组加正常侧海马提取液;对照组不加上述海马提取液.培养14d后进行微管相关蛋白2(MAP-2)与p-ERK的免疫荧光双标检测. 结果 MAP-2阳性神经元数量、胞体面积和细胞周长在切割组、正常组和对照组中依次减少,3组之间均有显著性差异.MAP-2、p-ERK免疫荧光双标细胞数量在切割组、正常组、对照组中也依次下降,但双标记细胞数占MAP-2阳性神经元数的百分比却反而依次增加,两者3组之间均有显著性差异,双标细胞大多为欠成熟细胞. 结论 切割穹隆海马伞侧海马提取液较正常海马提取液有明显促使神经干细胞向成熟神经元分化的作用;形态学初步证实ERK信号转导通路可能与神经干细胞向神经元分化有关.
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鞘内注射维生素B_6对大鼠慢性神经痛的镇痛作用及对DRG神经元p-ERK表达的影响
目的:观察维生素B_6(VitB_6)对神经病理性疼痛大鼠机械痛敏、热痛敏及L4～L5背根神经节(DRG)磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)表达的影响.方法:选择6只正常SD大鼠作为对照组(control),另选择鞘内置管3天后无神经损伤症状的SD雄性大鼠54只,随机分为3组(n=18):假手术组(sham):只分离坐骨神经;CCI组:结扎坐骨神经;CCI+Vit B6组:坐骨神经结扎后鞘内注射VitB_610mg/kg/d,连续两周.各组术前2天和术后1、3、5、7、10、14天测定各组大鼠热缩足反射潜伏期(TWL)、机械缩足反射阈值(MWT).除control组外其余各组分别在术后3d、7d和14d处死大鼠,采用免疫组织化学法观察L4～5 DRG和p-ERK的表达.结果:与sham组比较,CCI组术后各天TWL、MWT明显降低(P＜0.01);与CCI组比较,CCI+VitB_6组术后3、5、7、10、14天TWL明显增高(3天P＜0.05,5、7、10、14天P＜0.01),而术后各天MWT无明显差别.术后3、7、14天,CCI组结扎侧L4,5背根节p-ERK阳性细胞率明显高于sham组(P＜0.01),CCI+Vit B_6组结扎侧L4,5背根节p-ERK阳性细胞率明显低于CCI组(P＜0.01).结论:背根神经节ERK活化参与神经病理性疼痛信号传递,鞘内注射Vit B_6抑制CCI大鼠热痛敏,其机制可能包括通过上游机制抑制ERK激活.
关键词： 维生素B_6 神经病理性疼痛 磷酸化细胞外信号调节激酶 -
磷酸肌酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的乳鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及机制研究
目的：观察磷酸肌酸钠对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的乳鼠心肌成纤维细胞(CF)增殖和胶原合成的影响，并初步探索磷酸肌酸钠抗心肌纤维化的作用机制。
方法：将20只Wistar乳鼠取出心脏，体外原代、传代培养CF。实验分4组（每组n=3），对照组：无血清的DMEM培养液培养CF；AngⅡ组：含AngⅡ1×10-6mol/L的无血清DMEM培养液；磷酸肌酸钠组：含磷酸肌酸钠10 mmol/L的无血清DMEM培养液；AngⅡ+磷酸肌酸钠组：含磷酸肌酸钠10 mmol/L 加AngⅡ1×10-6mol/L的无血清DMEM培养液。采用流式细胞术测定细胞周期分布，Van Gieson（VG）氏染色法测定胶原含量，免疫细胞化学法检测磷酸化细胞外信号调节激酶（pERK1/2）蛋白的表达水平。
结果：与对照组相比，AngⅡ组CF的S期细胞百分率明显增加，G0/G1期、G2/M期细胞百分率降低，胶原含量增加， pERK1/2蛋白表达增高，差异均有统计学意义（P均<0.01)。与对照组比较，磷酸肌酸钠组CF细胞周期、胶原含量和pERK1/2蛋白表达，差异均无统计学意义（P均>0.05)。与对照组比较，AngⅡ+磷酸肌酸钠组pERK1/2蛋白表达升高，差异有统计学意义（P<0.01)，CF细胞周期和胶原含量差异均无统计学意义（P均>0.05)。与AngⅡ组比较，AngⅡ+磷酸肌酸钠组G0/G1期、G2/M期细胞百分率升高，S期百分率降低，胶原含量减少，pERK1/2蛋白表达降低，差异均有统计学意义（P均<0.01)。
结论：磷酸肌酸钠可部分抑制AngⅡ诱导的CF增殖和胶原合成增加，其机制可能与抑制ERK1/2过度激活有关。这提示磷酸肌酸钠可以明显改善AngⅡ诱导的心肌纤维化。关键词： 磷酸肌酸钠 心肌 成纤维细胞 磷酸化细胞外信号调节激酶 -
索拉非尼对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其抑癌机制探讨
目的 研究索拉非尼对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,并对其抑癌机制进行初步探讨.方法 用终浓度为0.01,0.1,1.0,2.5,5.0 mg·L-1的索拉非尼干预宫颈癌HeLa细胞(实验组),无任何药物处理的宫颈癌HeLa细胞为对照组,培养1,2,3d后,用溴化四唑蓝比色(MTT)法检测各组宫颈癌HeLa细胞增殖情况,用细胞免疫荧光法检测及酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测各组血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达情况.结果 培养3d后,对照组、0.01,0.1,1.0,2.5,5.0 mg·L-1实验组的细胞增殖抑制率分别为(5.15±1.67)％,(9.16±1.58)％,(23.07±1.86)％,(30.86±2.67)％,(55.94±3.92)％,(68.75±4.48)％.实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).实验组细胞培养3d的增殖抑制率与培养1d比较,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞免疫荧光检测结果显示,对照组中绿色荧光明显增强,经不同浓度索拉非尼处理后,绿色荧光明显减弱.对照组、0.01,0.1,1.0 mg·L-1实验组的VEGF-C分别为(1326.54±139.57),(1305.64±119.82),(1235.57±102.34),(1083.33±89.61) pg· mL-1;对照组、0.01,0.1,1.0 mg·L-1实验组的p-ERK分别为(2.34±0.28),(2.21 ±0.22),(1.56±0.21),(0.96 s0.13) μg·mL-1.实验组的VEGF-C和p-ERK蛋白表达量明显低于对照组(P＜0.05),且VEGF-C和p-ERK的表达随药物浓度的增加而逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 索拉菲尼可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,且抑制率与其作用时间、浓度呈正比,其抑癌机制可能与其能够抑制宫颈癌HeLa细胞VEGF-C和p-ERK蛋白表达相关.
关键词： 索拉非尼 宫颈癌 Hela细胞 血管内皮生长因子-C 磷酸化细胞外信号调节激酶 -
银杏内酯诱导嗜铬细胞瘤细胞表达低氧诱导因子-1α
目的研究银杏内酯(ginkgolides,Gin)对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导分化的嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的影响以及与其相关的信号通路.方法通过MTT比色法观察不同浓度Gin对PC12细胞活性的影响,RT-PCR和Western Blot法分析Gin对PC12细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达以及MAPK信号通路的影响.结果一定浓度范围的Gin可促进PC12细胞的活性,在37.5 mg·L-1作用24h效果明显.37.5mg·L-1Gin单独处理PC12细胞24h可诱导HIF-1α mRNA表达增强和蛋白水平上调.Gin还引起p-ERK水平的明显提高.Gin增加PC12细胞HIF-1α蛋白的稳定性存在一定的时间和剂量依赖关系,PD98059可部分抑制Gin的增强作用,金雀异黄素可完全阻断之;与此相对应的是,Gin以时间和剂量依赖方式诱导PC12细胞p-ERK水平的增高,PD98059和金雀异黄素均能完全阻断Gin的诱导作用.结论Gin可诱导PC12细胞表达HIF-1α,主要与MEK-ERK信号通路激活有关,可能是其促进分化的PC12生长的原因.
关键词： 银杏内酯 低氧诱导因子-1α 嗜铬细胞瘤细胞 磷酸化细胞外信号调节激酶 -
乳腺癌气虚血瘀证小鼠模型的建立及益气活血法的干预研究
目的 建立气虚血瘀证乳腺癌荷瘤4-T1小鼠模型,并予益气活血中药干预,分析在气虚血瘀状态下中药干预对肿瘤微环境的影响.方法 雌性BALB/c小鼠48只,随机平均分为6组:空白对照组、单纯荷瘤组、气虚血瘀证荷瘤模型组(复合模型组)、复合模型低剂量组、复合模型中剂量组、复合模型高剂量组.单纯荷瘤组小鼠注射4T1单细胞悬液,复合模型组在单纯荷瘤组基础上注射利血平.从实验第15天起,复合模型低剂量组、中剂量组、高剂量组分别灌胃相应剂量中药(四君子汤合血府逐瘀汤),每日1次,连续28 d.分别于实验第7、14、21、28、35、42天对复合模型组及各中药干预组予症状量化评分表评估,第42天测量各组耳缘、脚趾、腹壁静脉微循环血流量,West-ern blot法测定肿瘤组织基质金属蛋白酶2(MMP2)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)的表达.结果 复合模型组、复合模型低剂量组、复合模型中剂量组、复合模型高剂量组均出现气虚血瘀症状,低剂量组量化评分值自第28天低于复合模型组(P＜0.05),中剂量组自第21天分值低于复合模型组(P＜0.05).空白对照组静脉微循环血流量大于其余各组(P＜0.05),复合模型组小于单纯荷瘤组(P＜0.05),各中药干预组均比复合模型组提高(P＜0.01或P＜0.05).复合模型组原位瘤MMP-2表达高于单纯荷瘤组(P＜0.05),各中药干预组均低于复合模型组(P＜0.05).复合模型低剂量组、中剂量组原位瘤p-ERK1/2表达均低于复合模型组(P＜0.05或P＜0.01).结论 通过注射4T1单细胞悬液结合注射利血平方法建立的气虚血瘀证乳腺癌小鼠模型稳定可靠,符合中医证候特点.气虚血瘀证小鼠肿瘤组织内MMP-2、p-ERK1/2表达上调,益气活血中药干预后能纠正气虚血瘀状态同时下调MMP-2、p-ERK1/2的表达,抑制肿瘤生长.
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银杏内酯诱导原代培养神经元低氧诱导因子1α的表达及与ERK通路的关系
目的:研究银杏内酯(Gin)对氯化钴(CoCl2)诱导的化学性缺氧原代培养神经元低氧诱导因子-a(HIF-1α)表达的影响及其与细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路之间的关系.方法:以CoCl2(125 μmol/L)诱导的原代培养胚胎小鼠大脑皮层神经元为缺氧模型,观察Cin(终浓度37.5 mg/L)对神经细胞形态和活力的影响,Western blot HIF-1α和磷酸化ERK(p-ERK)的表达.运用ERK特异性抑制剂PD98059观察HIF-1α表达与ERK通路之间的关系.结果:Gin能明显提高CoCl2处理的神经细胞的活力.在正常培养的皮层神经元中HIF-1α和p-ERK的表达水平较低,CoCl2处理4 h后表达水平明显上调;Gin预处理24 h其表达强度进一步提高.PD98059能部分抑制CoCl2诱导的HIF-1α的表达,显著抑制p-ERK的表达;预加Gin能完全阻止该抑制作用.结论:Gin对CoCl2诱导的化学性缺氧损伤神经元有保护作用,该作用与HIF-1α表达上调、ERK通路的激活有关.
关键词： 银杏内酯 低氧诱导因子-1α 原代培养神经元 磷酸化细胞外信号调节激酶 -
大鼠局灶性脑缺血再灌注后P-erk 表达及神经元凋亡的变化
目的 研究磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-excelluar signal-regulated kinase,P-erk)在局灶性脑缺血再灌注中的作用. 方法 建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型;HE染色观察脑组织形态病理学变化;免疫组化法检测大鼠脑缺血再灌注不同时间磷酸化ERK的表达;TUNEL染色检测神经元凋亡. 结果在脑缺血再灌注大鼠检测到磷酸化ERK在梗死中心灶和缺血半暗带都存在阳性表达,于再灌注6 h达到峰值,12 h后逐渐下降;而凋亡细胞于再灌注24 h开始有明显的阳性细胞增加,48 h细胞凋亡达到高峰(P<0.01). 结论 局灶性脑缺血再灌注后磷酸化ERK表达增加,提示缺血再灌注损伤可能导致ERK活性上调,参与缺血后神经细胞凋亡和非程序性死亡过程.
关键词： 脑缺血再灌注 磷酸化细胞外信号调节激酶 细胞凋亡 -
NSAIDS药萘普生钠通过ERK途径促进乳腺癌细胞凋亡
目的 研究不同浓度的萘普生钠对乳腺癌细胞凋亡的影响,探讨该药物对乳腺癌细胞促凋亡作用途径和方式.方法 分别用0mmol/L、1mmol/L、5mmol/L和10mmol/I浓度的萘普生钠处理乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231后,应用Annexin V/PI双染色法,流式细胞仪(BD FACScalibur)检测凋亡细胞,应用WesternBlot方法 检测各处理组乳腺癌细胞中ERK及p-ERK的表达情况.结果 流式细胞仪结果 显示MCF-7和MDA-MB-231细胞凋亡率随萘普生钠浓度的增大而增加(P＜0.05),而在这两种乳腺癌细胞间无明显差异(P＞0.05).Western Blot结果 显示随萘普生钠浓度的增大,ERK的表达无明显变化,而p-ERK的表达下降(P＜0.05),同时药物浓度与p-ERK表达具有明显负相关.结论 萘普生钠可能通过抑制ERK磷酸化途径,减少p-ERK的表达,促进乳腺癌细胞的凋亡.
关键词： 萘普生钠 细胞外信号调节激酶 磷酸化细胞外信号调节激酶 乳腺癌 凋亡 -
肺复康合剂对大鼠肺纤维化的抑制作用及相关机制
目的：探讨肺复康合剂对大鼠肺纤维化的抑制作用及相关机制。方法40只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、造模＋肺复康组、单纯肺复康组。模型组、造模＋肺复康组气管灌注博莱霉素（5 mg／kg），而对照组和单纯肺复康组气管灌注同等剂量无菌生理盐水，随后对照组和模型组生理盐水灌胃28 d，造模＋肺复康组、单纯肺复康组肺复康合剂灌胃（12 ml／kg）28 d。给药28 d后麻醉处死，计算各组肺系数、肺干重／体重变化，检测肺组织羟脯氨酸（ HYP）、一氧化氮（ NO）、肺动脉血浆NO2-／NO3-含量、丙二醛（ MDA）水平，以及Western印迹法检测诱导型NO合酶（ iNOS）、结缔组织生长因子（CTGF）、磷酸化细胞外信号调节激酶（ ERK）表达水平。结果与对照组相比，模型组肺系数、肺干重／体重、HYP、NO、NO2-／NO3-、MDA、iNOS、CTGF、p-ERK表达均明显增高（P＜0.05）；与模型组相比，造模＋肺复康组肺系数、肺干重／体重、HYP、NO、NO2-／NO3-、MDA、iNOS、CTGF、p-ERK表达水平均明显降低，肺纤维化指标均明显改善；单纯肺复康组与对照组相比，上述指标没有明显变化（ P＞0.05）。结论肺复康合剂通过抑制促纤维化因子iNOS、CTGF表达及ERK信号通路，减少博莱霉素所致的应激损伤、病理变化、胶原合成，发挥抑制肺纤维化的药理作用。
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不同标本制备法对小鼠小肠组织中ERK1/2和pERK1/2免疫组织化学定位的影响
目的:本研究针对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族成员细胞外信号调节激酶(ERK1/2),以及磷酸化的ERK1/2(pERK1/2),探讨不给任何刺激时,用不同标本制备法检测ERK1/2在小鼠小肠组织中的免疫组织化学定位.方法:分别应用灌流固定脱水法(PF-DH),浸泡固定脱水法(IM-DH),快速冻结-冻结置换法(QF-FS)制备的标本,通过免疫组织化学显色检测ERK1/2和pERK1/2在肠上皮中的定位.结果:应用PF-DH法,ERK1/2位于几乎所有上皮细胞的核中,而pERK1/2在上皮细胞中很难检测到.应用IM-DH法,ERK1/2位于所有上皮细胞的胞质和核内,pERK1/2仅位于小肠绒毛顶部的上皮细胞内,而不存在于肠隐窝区域的上皮细胞中.应用QF-FS法制备的标本中,ERK1/2定位于所有上皮细胞的胞质中,而pERK1/2主要存在于肠隐窝部位和肠绒毛顶部的上皮细胞中.结论:本研究结果提示,用不同的标本制备方法会影响ERK1/2的免疫组织化学定位.通过比较不同标本制备方法取材的小鼠小肠组织中的ERK1/2和pERK1/2的免疫组织化学定位,得出QF-FS法可能为接近活体状态的小鼠小肠组织中的ERK1/2和pERK1/2定位的方法.
关键词： 小肠 细胞外信号调节激酶 磷酸化细胞外信号调节激酶 免疫组织化学 小鼠 -
三七总皂苷预处理对炎性内脏痛大鼠磷酸化细胞外信号调节激酸表达的影响
目的:研究三七总皂苷(PNS)预处理对磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)在炎性内脏痛大鼠脊髓及背根节的表达影响,探讨PNS对炎性内脏痛影响的可能机制.方法:SD大鼠随机分为正常对照组、PNS预处理组、生理盐水(NS)预处理组,处理后15 d行乙酸腹腔注射造模,每15min记录内脏痛指数;取小肠组织进行H-E染色,光镜下计数粒细胞数目;应用免疫组织化学检测脊髓及背根节p-ERK的表达.结果:乙酸腹腔注射后,小肠炎性反应明显增强,小肠黏膜下层增厚,但各时间点与对照组比较,实验组粒细胞数无差异;120 min时PNS预处理组内脏痛指数明显低于NS预处理组;两预处理组脊髓后角p-ERK表达较正常组明显增高,30、60 min时PNS预处理组脊髓后角及相应背根节p-ERK表达明显高于NS预处理组.结论:PNS预处理缓解乙酸致炎性内脏痛可能是通过调节中枢神经系统起作用的,且可能与抑制p-ERK表达有关.
关键词： 炎性内脏痛 三七总皂苷 磷酸化细胞外信号调节激酶 内脏痛指数 -
GRP78和pERK在胃癌及非胃癌组织中的表达及临床意义
背景与目的：在胃癌的发生、发展过程中，内质网应激、细胞的修复及凋亡是重要的病理生理过程，而GRP78与pERK在其中发挥了重要的作用。研究葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated proteins 78，GRP78)和磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)在胃腺癌、慢性萎缩性胃炎及浅表性胃炎组织中的表达，研究它们与胃癌发生、发展的关系。方法：RT-PCR法检测各25例胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和浅表性胃炎新鲜组织中GRP78、pERK基因表达；免疫组化法分别检测各60例胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和浅表性胃炎组织中GRP78、pERK蛋白表达，并分析其蛋白表达与临床病理参数间的相关性。结果：RT-PCR半定量结果显示，胃癌组织中GRP78及pERK mRNA的相对表达水平(1.26±0.18、2.35±0.36)均明显高于慢性萎缩性胃炎组织(0.89±0.25、1.18±0.25)及浅表性胃炎组织(0.29±0.09、0.68±0.10)，差异有统计学意义(P＜0.01)。免疫组织化学结果显示，GRP78及pERK蛋白在胃癌组织中的表达率(78.3%、88.3%)亦均高于慢性萎缩性胃炎(46.6%、43.3%)及浅表性胃炎组织(6.7%、5.0%)，差异有统计学意义(P＜0.01)。胃癌组织中GRP78及pERK蛋白表达与胃癌分化程度、分期、淋巴结转移等有明显相关性。GRP78及pERK基因及蛋白表达水平在胃癌中均呈正相关(基因：r=0.307，P=0.000；蛋白：r=0.368， P=0.000)。单因素分析结果显示：组织学分级、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移、GRP78高表达及pERK高表达与胃癌预后有关(P均＜0.05)。浸润全层、低分化、TNM分期晚、有淋巴结转移、GRP78高表达及pERK高表达患者生存时间短。多因素生存分析结果结果显示：GRP78高表达与GRP78低表达相比生存时间差异有统计学意义(P＜0.001)。GRP78高表达的胃癌患者生存时间短，提示GRP78是负性的预后因子。结论：GRP78和pERK在胃癌中高表达，GRP78和pERK在正常细胞向恶性细胞转化的过程中可能扮演了重要角色，检测pERK和GRP78的表达可能有助于对胃腺癌的预防、早期诊断及预后判断，同时为胃癌治疗寻找新的靶点。
关键词： 葡萄糖调节蛋白78 磷酸化细胞外信号调节激酶 胃癌 -
B细胞淋巴瘤/白血病-2过表达对大鼠全脑缺血/再灌注后海马回磷酸化细胞外信号调节激酶的影响
目的 观察B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2)过表达对大鼠全脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphor-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)蛋白在海马回表达的影响.方法 90只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为:假手术(SO)组,I/R组,Bcl-2过表达(Bcl-2)组.采用改良四血管法(four vessels occlusion method,4-VO)建立全脑I/R模型.应用HE染色,免疫组化染色及原位末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)方法观察海马回神经元形态改变,凋亡细胞及p-ERK在CA1区和CA3区的不同表达.结果 HE染色显示I/R组再灌注后48 h CA1区神经元数目减少,排列紊乱,核膜界限不清,结构模糊,CA3区较CA1区变化轻微 ;Bcl-2组变化不明显.TUNEL染色显示,SO组可见到少量凋亡细胞 ;I/R组再灌注后48 h凋亡细胞数达高峰,CA1区(110±13)明显多于CA3区(145±18)(P＜0.05);Bcl-2组较I/R组凋亡细胞数量明显减少(CA1区:143±15,CA3区:165±10)(P＜0.05).免疫组化染色显示:p-ERK在SO组CA1区、CA3区的表达基本呈阴性 ;I/R组再灌注后2h于CA3区开始弱表达,24 h达高峰,然后逐渐下降,CA1区(150±14)表达弱于CA3区(125±9) (P＜0.05) ;Bcl-2组表达明显强于I/R组(CA1区:123±13,CA3区:100± 10)(P＜0.05).结论 Bcl-2过表达可增加脑I/R后海马区p-ERK的表达,抑制细胞凋亡,其抗凋亡机制与ERK信号转导通路有关.
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腺病毒介导的HIF-1α基因对缺血心肌作用机制的初步探讨
目的:研究腺病毒介导的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因转染入兔急性心肌梗死(AMI)边缘区缺血心肌后,HIF-1α、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的蛋白表达情况,初步探讨HIF-1α的作用机制.方法:建立兔AMI模型,随机分为4组,分别于心肌内注入腺病毒介导的HIF-1α基因(Ad-HIF-1α)、不含HIF-1α基因腺病毒颗粒(Ad-Blank)、HIF-1α核酶基因(Rz-HIF-1α),假手术组为对照,免疫组化和免疫印迹(Western blot)方法检测HIF-1α、ERK及P-ERK的蛋白表达.结果:AMI后1天外源性HIF-1α蛋白及p-ERK蛋白表达开始升高,7天达高峰,14、28天逐渐下降,56天时外源性HIF-1α蛋白及p-ERK蛋白均无表达,ERK在各时间点均有表达.在各组中,ERK含量基本无差异,p-ERK的蛋白含量在Ad-Blank组较Sham组升高,较Ad-HIF-1α组降低,Rz-HIF-1α组低.结论:腺病毒介导的HIF-1α基因在缺血心肌能够有效表达,并能促进ERK的磷酸化,HIF-1α核酶基因能有效阻断缺血心肌HIF-1α的保护作用.
关键词： 腺病毒 低氧诱导因子-1α 细胞外信号调节激酶 磷酸化细胞外信号调节激酶 核酶 -
pERK在胃癌中的表达及临床意义
[目的]研究磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)在胃腺癌、慢性萎缩性胃炎及浅表性胃炎组织中的表达及意义.[方法] RT-PCR法检测胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和浅表性胃炎新鲜组织中pERK mRNA表达;免疫组化法分别检测胃腺癌、慢性萎缩性胃炎和浅表性胃炎组织中pERK蛋白表达,并分析其蛋白表达与胃癌临床病理参数间的相关性.[结果]RT-PCR半定量结果显示,胃癌组织中pERK mRNA的相对表达水平(2.35±0.36)明显高于慢性萎缩性胃炎组织(1.18±0.25)及浅表性胃炎组织(0.68±0.10)(P均＜0.01).免疫组织化学结果显示,pERK蛋白在胃癌组织中的阳性表达率(88.3％)高于慢性萎缩性胃炎(43.3％)及浅表性胃炎组织(5.0％)(P均＜0.01).胃癌组织中pERK蛋白表达与胃癌分化程度、分期、淋巴结转移等明显相关.[结论]pERK在胃癌中高表达,pERK在正常细胞向恶性细胞转化的过程中可能扮演了重要角色,检测pERK表达可能有助于胃腺癌的预防及早期诊断.
关键词： 磷酸化细胞外信号调节激酶 胃癌 慢性萎缩性胃炎 浅表性胃炎 -
复元活血汤对大鼠损伤坐骨神经组织p-Src、p-Erk表达的影响
目的:研究大鼠坐骨神经离断吻合术后,复元活血汤对其修复的影响,并探讨其可能机制.方法:将60只SD大鼠实施右侧坐骨神经离断吻合术,术后大鼠随机分为复元活血汤给药组、甲钴胺给药组和模型组,每组20只.复元活血汤组给予复元活血汤,按9 g·kg-1·d-1灌胃;甲钴胺组给予甲钴胺,按6.25×10-4g·kg-1 ·d-1灌胃;模型组按复元活血汤的溶液剂量,给予等量溶剂灌胃;灌胃2～8周.假手术组大鼠20只,暴露右侧坐骨神经后,不做任何处理缝合切口.给药3d后,ELISA法检测大鼠血清中IL-1β和TNF-α含量,给药2周后,RT-PCR法检测吻合口近、远端2 cm神经组织的IL-1β和TNF-α mRNA的表达,Western blot法检测p-Src、p-Erk1/2蛋白的表达;分别于给药2周、4周、8周后,检测大鼠坐骨神经功能指数;于给药8周后,观察坐骨神经和其支配肌肉的病理学改变.结果:与模型组比较,复元活血汤组和甲钴胺组大鼠坐骨神经功能指数显著改善,神经纤维生长良好,腓肠肌肌纤维直径和截面积显著改善,复元活血汤组大鼠血清中IL-1β和TNF-α含量显著降低,吻合口神经组织的IL-1 β和TNF-αmRNA的表达显著减少,p-Src、p-Erk1/2蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论:复元活血汤可通过减轻大鼠损伤坐骨神经吻合口炎症反应,抑制Src、Erk的磷酸化,促进神经的修复.
关键词： 复元活血汤 坐骨神经离断吻合 炎症反应 磷酸化Src 磷酸化细胞外信号调节激酶
