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乌头汤对神经病理性疼痛模型小鼠抑郁及焦虑的影响
目的 观察乌头汤对L5脊神经结扎(spinal cord ligation, SNL)模型小鼠神经病理性疼痛(neuropathic pain, NP)诱发抑郁及焦虑的影响.方法 将小鼠按随机数字表法分为假手术组,模型组,乌头汤高、中、低剂量组,普瑞巴林组,每组24只.除假手术组外,其余各组小鼠制备 SNL 模型.造模成功后,乌头汤高、中、低剂量组灌胃乌头汤水煎液12.60,6.30,3.15 g/kg,普瑞巴林组灌胃普瑞巴林0.25 g/kg,假手术组及模型组灌胃等体积生理盐水.1次/d,连续给药21 d.给药后7、14、21 d,以糖水偏好实验、强迫游泳实验、旷场实验观察小鼠的抑郁、焦虑行为,并以免疫组化方法检测各组小鼠海马内磷酸化细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, p-ERK)阳性细胞数,以Western blot法检测小鼠海马内p-ERK及突触后致密蛋白95(postsynaptic density protein 95, PSD95)的蛋白表达水平.结果 给药后7、14、21 d,与模型组比较,乌头汤高剂量组小鼠50%缩足阈值[分别为(0.76±0.21)比(0.05±0.03)、(0.93±0.33)比(0.05±0.01)、(1.12±0.20)比(0.04±0.01)]增高(P<0.01),糖水消耗量[分别为(1.86± 0.44)g比(0.84±0.23)g、(1.84±0.10)g比(1.02±0.18)g、(1.63±0.31)g比(0.75±0.23)g]增加(P<0.01),强迫游泳后4 min不动时间[分别为(128.90±35.27)s比(180.30±21.81)s、(125.50±23.07)s比(195.30± 27.70)s、(169.50±23.07)s比(207.50±7.46)s]降低(P<0.01),旷场中央区停留时间[分别为(35.35±7.61)s比(13.90±2.27)s、(26.26±3.61)s比(13.08±1.98)s、(24.04±6.57)s比(10.62±3.38)s]增加(P<0.01);给药后21 d,乌头汤高剂量组小鼠海马组织p-ERK阳性细胞数[(11.00±4.89)个比(33.67±7.35)个]较模型组减少,海马 p-ERK[(0.15±0.09)比(0.54±0.04)]、PSD95[(0.32±0.04)比(0.57±0.09)]蛋白表达降低(P<0.01).结论 乌头汤可缓解SNL模型小鼠NP,并改善其诱发的抑郁及焦虑症状,调节NP病理后期小鼠海马p-ERK、PSD95的表达水平.
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天丝饮中多糖成分对H2O2损伤SH-SY-5Y的保护作用对比研究
目的:基于ERK1/2通路探讨巴戟天多糖提取物(MHP)、菟丝子多糖提取物(CCP)对H2O2损伤SH-SY-5Y细胞的保护作用.方法:采用SH-SY-5Y细胞为神经细胞体外研究模型,CCK8法检测不同浓度(50、100、200、400、800、l 600mg/L) MHP和CCP对细胞活力的影响和对H2O2损伤SH-SY-5Y细胞活力的影响,分为对照组、H2O2组、MHP+H2O2组、CCP+H2O2组、H2O2+MHP+CCP(1∶1)组.运用Western blot方法检测PSD-95、p-ERK和ERK等神经系统相关蛋白表达情况,分为:对照组、H2O2组、MHP+H2O2组、CCP+H2O2组、H2O2+MHP+CCP(1∶1)组和对照组、PD98059组、PD98059+MHP+CCP组、MHP+CCP组.结果:CCK8检测结果显示,与对照组比较MHP、CCP 1 600mg/L可以显著提高SH-SY-5Y细胞活力,对H2O2损伤SH-SY-5Y细胞有明显保护作用,其中MHP+CCP+H2O2(1∶1)组抗氧化损伤能力强.Western blot结果显示,与对照组比较,H2O2可显著抑制PSD-95表达(P＜0.05).与模型组比较,MHP和CCP可显著促进PSD-95表达(P＜0.05),其中MHP+CCP(1∶1)+H2O2组PSD-95表达量高(P＜0.05).MHP+CCP(1∶1)组可显著促进p-ERK表达(P＜0.05).与MPH+CCP组比较,ERK1/2阻断剂PD98059可显著抑制MHP+CCP(1∶1)组的作用(P＜0.05).结论:MHP+CCP(1∶1)应用对H2O2损伤SH-SY-5Y细胞PSD的保护作用好,可能与促进PSD-95蛋白和p-ERK1/2通路蛋白表达有关.
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鞘内注射突触后致密蛋白95siRNA对神经病理性疼痛大鼠脊髓CaMKⅡα活性的影响
目的 探讨突触后致密蛋白95(PSD-95)基因沉默对神经病理性疼痛模型大鼠脊髓Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达及活性的影响.方法 用化学合成针对大鼠PSD-95基因的siRNA转染神经母细胞瘤/大鼠神经胶质细胞瘤杂交瘤细胞(NG108-15细胞),并观察干扰效果.选取91只成年SD大鼠随机分为3组:Naive组、假手术组(sham)与坐骨神经慢性缩窄损伤(CCI)手术组.CCI组大鼠进一步被分为4个亚组,分别于CCI术后第5天开始鞘内注射生理盐水(Control组)、转染试剂(Vehicle组)、阴性对照(mmRNA组)和PSD-95基因特异siRNA(siRNA组).连续给药3d,各组大鼠分别于鞘内给药后第1、3、7天评估机械缩足反射阈值(MWT)的改变,并留取腰4～6脊髓节段标本,以Western blotting方法观察脊髓背角PSD-95、CaMKⅡα蛋白表达水平及活性的变化.结果 大鼠PSD-95基因特异的siRNA可以有效地沉默NG108-15细胞中PSD-95基因表达.与生理盐水治疗组相比,鞘内注射PSD-95特异siRNA 3d后,大鼠脊髓背角PSD-95蛋白水平明显降低(P＜0.05),CCI大鼠神经病理性疼痛得到明显缓解(P＜0.05),同时脊髓背角pThr286 CaMKⅡα蛋白水平受到明显抑制(P＜0.05),而总CaMKⅡα蛋白水平无明显变化(P＞0.05).结论 PSD-95基因特异的siRNA可被成功导入大鼠中枢神经系统,引起脊髓PSD-95基因沉默,在缓解病理性疼痛的同时可抑制神经损伤导致的脊髓CaMKⅡα磷酸化水平的增加,阻断中枢敏化相关的信号通路.
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糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦PSD95和Synapsin-Ⅰ的表达和意义
目的:研究在糖尿病进程中突触后致密蛋白95(PSD95),突触蛋白-Ⅰ(synapsin-Ⅰ)及其磷酸化状态P-Synapsin-Ⅰ在胃窦的表达变化和作用,探讨肠神经系统(ENS)的可塑性.方法:将SD♂大鼠随机分为糖尿病组(n=32)和对照组(n=15).应用Real一time PCR、Western blot方法检测胃窦组织中PSD95,Synapsin-Ⅰ,P-synapsin-Ⅰ在糖尿病进程2,4,8,12wk时表达的变化.结果:从4 wk开始糖尿病大鼠组的PSD95,synapsin-Ⅰ mRNA表达相比同期对照组显著下降(t:2.92,3.15,4.21;t=3.01,3.74,4.53,均P<0.01);且随着病程进展逐渐降低(P<0.05).从4 w k开始糖尿病大鼠组的PSD95和P-Synapsin-Ⅰ蛋白表达比同期对照组均显著下降(t=2.87,2.95,3.37;t=2.97,3.11,3.23,均P<0.01);且随着病程进展逐渐降低(P<0.05).结论:在糖尿病的进程中,胃窦PsD95,synapsin-Ⅰ和P-synapsin-Ⅰ的表达降低可能与糖尿病胃轻瘫的发生有关,为胃轻瘫的治疗提供了新的前景.
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知母总皂苷对老年大鼠学习记忆行为和海马突触相关蛋白表达的影响
目的 探讨知母总皂苷(SAaB)对老年大鼠学习记忆能力及突触相关蛋白表达的影响.方法 ig 给予18个月龄SD大鼠SAaB 100和200 mg·kg-1,每天1次,连续9周,第8周开始进行Morris水迷宫实验,记录逃避潜伏期及各象限游泳时间.免疫组织化学法观察海马突触素蛋白(SYP)分布.Western印迹法检测CA3区SYP、突触后致密蛋白95( PSD95)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白分布.结果 与青年大鼠对照组比较,老年对照组大鼠逃避潜伏期显著增加,原平台象限游泳时间占总时间的百分比显著缩短(P＜0.05),海马SYP,PSD95,p-Akt和p-mTOR表达显著降低(P＜0.01).与老年对照组相比,给予SAaB后,青年大鼠逃避潜伏期显著缩短,原平台象限游泳时间占总时间的百分比显著增加(P＜0.05)；海马SYP,PSD95,p-Akt和p-mTOR表达显著增加(P＜0.01).结论 SAaB 能显著改善老年大鼠学习记忆能力,可能与上调SYP和PSD95表达及激活Akt/mTOR信号通路有关.
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慢性强迫游泳对大鼠行为及其脑内突触后致密蛋白95含量的影响向
目的 探讨慢性应激对大鼠行为及其脑内各部位PSD-95蛋白含量的影响.方法 以慢性强迫游泳法制作单纯应激(慢性强迫游泳应激)和药物干预慢性应激(每次强迫游泳应激前皮下注射MK801)大鼠模型；用Western blotting蛋白质定量方法分别检测对照(无应激)组、单纯应激组和药物干预组大鼠的海马、前额叶皮质、基底节的PSD-95含量.结果 在强迫游泳第14天时,单纯应激组大鼠的体质量增加明显慢于对照组和药物干预组；与对照组和药物干预组相比,单纯应激组大鼠的糖水消耗量明显减少,强迫游泳期间的不动时间显著延长；单纯应激组大鼠的海马、前额叶皮质的PSD-95含量均显著高于对照组和药物干预组,而基底节的PSD-95含量在3组之间差异无统计学意义.结论 慢性强迫游泳大鼠是有价值的慢性应激模型；脑细胞内NMDA受体介导的信息传递功能亢进可能是这个动物模型的神经机制之一.
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永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑内突触相关蛋白表达的免疫组织化学观察
目的 观察永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑缺血发作后2d、7d脑内突触相关蛋白表达的变化.方法 制作大鼠永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型.缺血动物术后随机分为缺血2d组、缺血7d组,另设假手术组.在术后2d、7d2个时间点采用HE染色观察动物神经病理学改变,同时采用免疫组织化学法观察动物的缺血侧脑组织突触素-Ⅰ( synapsin-Ⅰ)、突触后致密蛋白95( PSD-95)、α-突触核蛋白(α-synuclein)表达情况.结果与假手术组相比,缺血后,模型动物神经元大量变性坏死,数目减少,排列散乱.缺血后2d,synapsin-Ⅰ在CA1区、CA3区、皮层表达显著减少(P＜0.05或P＜0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P＜0.05或P＜0.01),α-synuclein在CA1区神经元产生显著积聚(P＜0.01)；缺血后7d,synapsin-Ⅰ在CA1区、皮层表达仍显著降低(P＜0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P＜0.05或P＜0.01),α-synuclein在CA1、CA3、皮层表达显著增加(P＜0.05或P＜0.01).结论 pMCAO模型大鼠在脑缺血发生后,神经突触有关蛋白的表达显著改变,并随缺血后不同时间点表达情况不同,这可能与神经元突触重塑有关.突触相关蛋白的表达与缺血损伤程度密切相关.
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抑郁小鼠模型脑突触体中突触蛋白表达的变化
目的:研究抑郁症发病过程中突触蛋白表达的变化.方法:小鼠随机分为对照组和造模组,使用社会失败模型对造模组小鼠造模,之后将其分为对抑郁症敏感组及对抑郁症不敏感组.将以上3组小鼠分别断头取前额叶皮层、海马、纹状体并提取突触小体,通过免疫印迹检测突触小体内突触后致密蛋白95 (PSD-95)、桥尾蛋白(gephyrin)及突触蛋白1(synapsin-1)蛋白表达的变化.结果:与对照组相比,在前额叶皮层,对抑郁症敏感组及对抑郁症不敏感组小鼠的PSD-95水平下降,而对抑郁症敏感组小鼠的synapsin-1表达增多;在海马,对抑郁症敏感组及对抑郁症不敏感组小鼠的PSD-95水平下降;在纹状体,对抑郁症不敏感的小鼠gephyrin、synapsin-1蛋白表达显著增加.结论:在抑郁症发病中突触体内兴奋性及抑制性蛋白发生了变化,这些可能与突触功能的紊乱相关.
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电针百会、神庭对脑缺血再灌注损伤大鼠学习记忆能力及突触可塑性的影响
目的:探讨电针百会、神庭穴对脑缺血再灌注损伤大鼠学习记忆能力及突触可塑性的影响.方法:将36只清洁级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,其中12只仪分离血管作为假手术组,其余24只运用线栓法制备左侧大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,缺血时间为2h.造模成功后采用随机数字表法分为模型组和电针组各12只.电针组大鼠给予电针百会、神庭穴,1次/d,持续7d;其余2组同等条件抓取,不予干预.各组大鼠在造模成功后第3天开始采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,水迷宫试验共持续5d;采用透射电镜观察海马区突触超微结构的变化;免疫组化法检测突触后致密蛋白95(PSD-95)和突触囊泡膜蛋白-突触素(SYN)的表达.结果:水迷宫测试中,模型组与假手术组相比逃避潜伏期明显增加(P＜0.001),穿越平台次数减少(P＜0.01);电针组与模型组比较逃避潜伏期缩短(P＜0.01),穿越平台次数增加(P＜0.05),第5天的穿越平台轨迹较集中于平台附近,而模型组则较分散和不规则.通过透射电镜观察,模型组与假手术组相比突触数量显著减少(P＜0.001);电针组比模型组海马CA1区突触的结构更加清晰和完整,数量显著增加(P＜0.01).免疫组化发现假手术组比模型组海马区PSD-95及SYN表达显著增高(P＜0.001);与模型组相比,电针组海马区的PSD-95表达明显增高(P＜0.001),SYN表达也显著增高(P＜0.01).结论:电针百会、神庭穴可以改善脑缺血再灌注损伤大鼠学习记忆能力,其机制可能与增强突触可塑性,包括促进突触结构的完整,增加PSD-95和SYN的表达有关.
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小檗碱对三转基因阿尔茨海默病小鼠的学习记忆和海马PSD95突触相关蛋白表达水平的影响
目的 探讨小檗碱(BBR)对三转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠的学习记忆及海马组织 PSD95突触蛋白表达水平的影响.方法 将30只三转基因(APP/Tau/PS1)AD小鼠按随机数字表法分成3组,即AD对照组、AD+25 mgBBR组、AD+50 mgBBR,每组各10只,后2组以灌胃方式且剂量分别为25 mg·kg -1 ·d-1、50 mg·kg -1·d-1,对照组给予等剂量生理盐水连续3个月灌胃处理;采用Morris水迷宫方法探测各组AD小鼠行为学改变、空间记忆及探索情况;免疫荧光染色检测各组小鼠海马组织突触后致密蛋白95 (PSD95)阳性表达水平;Western blotting(WB)法检测各组三转基因AD小鼠海马脑组织PSD95蛋白、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平及微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)自噬水平.结果 AD+25 mgBBR组的逃避潜伏期的学习记忆能力、免疫荧光PSD95表达水平以及 PSD995、LC3-Ⅱ、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平与AD对照组比较均有明显差异(P<0.05);AD+50 mgBBR组逃避潜伏期的学习记忆能力、免疫荧光PSD95表达水平以及LC3-Ⅱ、p-Akt、p-mTOR表达水平与AD对照组比较差异均更明显(P<0.05,P<0.01).结论 应用50 mg小檗碱能较好改善三转基因AD小鼠的学习记忆、空间探索能力,其机制可能是通过增加自噬水平LC3-Ⅱ调控Akt/mTOR信号通路,增加突触蛋白PSD95的表达水平及突触数量,以改善AD相关临床症状.
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脱氢表雄酮对血管性痴呆小鼠学习和记忆能力的改善作用
目的:研究脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对血管性痴呆小鼠学习和记忆能力的改善作用及可能机制.方法:将小鼠随机分为假手术组、模型组及DHEA(20、40和60 mg/kg)组.采用夹闭小鼠双侧颈总动脉15 min再放开的方法,建立全脑缺血再灌注所致的血管性痴呆小鼠模型.通过Y迷宫和新物体辨别实验测试小鼠的学习和记忆能力;采用Western blot法检测小鼠海马组织神经元核抗原(NeuN)、突触小泡蛋白(SYP)和突触后致密蛋白95(PSD-95)的含量.结果:与假手术组相比,在Y迷宫和新物体辨别实验中,模型组小鼠出现显著的学习和记忆障碍,DHEA治疗能显著增加Y迷宫实验中小鼠自发交替反应率,同时还可显著提高小鼠新物体辨别实验的优先指数和辨别系数(P<0.05),其中DHEA中剂量组效果为显著(P<0.01).Western blot实验结果显示,模型组小鼠海马组织NeuN、SYP和PSD-95的表达水平与假手术组比显著降低(P<0.05);DHEA组小鼠海马组织NeuN、SYP和PSD-95蛋白的表达较模型组显著增多(P<0.05).结论:DHEA具有提高血管性痴呆小鼠学习和记忆能力的作用,其机制可能与减少神经元的丢失和改善突触的可塑性有关.
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米诺环素对大鼠脑缺血再灌注损伤后学习记忆能力及海马神经元PSD-95蛋白表达的影响
目的:探讨静脉用低剂量米诺环素对局灶性脑缺血再灌注大鼠认知功能障碍及缺血侧海马生长相关蛋白-43(growthassociated protein-43,GAP-43)和突触后致密物质-95 (postsynaptic density 95,PSD-95)表达的影响.方法:采用线栓法建立Sprague-Dawley大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,将45只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组及米诺环素组(n=15).分别采用免疫组织化学及免疫印迹法检测术后2周大鼠缺血侧海马GAP-43和PSD-95蛋白的表达,Morris水迷宫实验评价大鼠的行为学改变.结果:同假手术组相比,模型组大鼠缺血侧海马GAP-43(0.49±0.03)和PSD-95(0.92±0.04)表达明显增高(P=0.000);大鼠逃避潜伏期明显延长[(44.2±10.0)s],穿过原平台次数(2.6±0.9)和在目标象限探索时间百分率明显降低[(19.2±2.1)％,P=0.000)].同模型组相比,尾静脉给予3 mg/kg米诺环素治疗后,大鼠缺血侧海马GAP-43(0.72±0.05)表达明显增加,PSD-95表达降低(0.67±0.05,P=0.000),大鼠逃避潜伏期明显缩短[(30.8±7.6)s,P=0.020]、穿过原平台次数(4.4±1.1,P=0.012)和在目标象限探索时间百分率明显增加[(30.4±2.7)％,P=0.000)].结论:低剂量米诺环素能显著改善脑缺血再灌注后大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调GAP-43和下调PSD-95表达有关.
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知母皂苷对Aβ1-42诱导的皮层神经元突触损伤的保护作用
目的:探讨知母皂苷(SAaB)对Aβ1-42诱导的皮层神经元损伤是否有保护作用.方法:MTT法测皮层神经元细胞存活率;免疫荧光染色法检测神经元突触素(SYP)、突触后致密蛋白95(PSD-95)表达的改变.Western印迹法检测神经元SYP、PSD-95、p-Akt473、p-mTOR蛋白表达水平表达的改变.结果:Aβ1-42作用48 h可使大鼠大脑皮层神经元细胞存活率明显降低,使神经元SYP、PSD-95、p-Akt473和p-mTOR蛋白表达明显降低.SAaB(0.01,0.1,1,5,10 μmol/L)可明显对抗Aβ1-42引起的神经元细胞存活率下降,并呈一定浓度依赖性.SAaB也可使SYP、PSD-95、p-Akt473和p-mTOR蛋白表达明显增加.结论:知母皂苷能够抑制Aβ142诱导的皮层神经元突触损伤,这种作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号转导通路有关.
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HIV-1gp120通过影响NR2B、PSD-95表达损伤神经元
目的 研究HIV-1病毒的表面包膜糖蛋白gp120对大鼠皮质神经元的毒性机制.方法 实验用SD胎鼠来源的原代培养的皮层神经元,用免疫细胞化学染色和Western blot法检测gp120对含2B亚基的NMDA受体(NR2B)和突触后致密蛋白95(PSD-95)表达的影响,用MTT法检测gp120对神经元的毒性.结果 gp120对神经元有剂量依赖性的毒性作用,其毒性能被NR2B特异拮抗剂美金刚阻断.gp120能明显增加大鼠皮层神经元总NR2B的表达,而降低PSD-95的表达量.结论 gp120可通过使神经元NR2B表达增加及PSD-95的表达减少来损伤神经元,NR2B特异受体拮抗剂能阻止gp120诱导的神经元损伤.
关键词： gp120 皮层神经元 NR2B 突触后致密蛋白95 HIV相关的神经退行性疾病
