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巴戟天多糖含药血清对体外培养成骨细胞凋亡的保护作用观察
目的:通过体外培养成骨细胞(osteoblast,OB),观察巴戟天多糖对细胞凋亡的保护作用,探讨巴戟天促进成骨细胞活性的机制.方法:取巴戟天多糖和巴戟天水提液制备含药血清,用含药血清进行细胞培养.取24 h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,取2代培养的成骨细胞,分为对照组(培养过程中仅加入大鼠血清)、诱导凋亡组(对照组中加入全反式维甲酸)、巴戟天水提物组(诱导凋亡组中加入巴戟天水提物药物血清)、巴戟天多糖组(诱导凋亡组中加入巴戟天多糖药物血清),通过荧光显微镜观察,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测Bcl-2/Bax基因表达,对巴戟天多糖在细胞凋亡过程中的作用进行评价.结果:诱导凋亡组12 h诱导的OB出现凋亡,细胞核或细胞质内可见致密的黄绿染色,染色质形成明亮的凝聚块,24 h单个凋亡细胞与周围的细胞分离,细胞皱缩呈圆形或卵圆形,细胞变小,胞浆致密,细胞器相互靠近,染色质浓缩,形成不同形状和大小的块状.巴戟天水提物组、巴戟天多糖组凋亡率显著低于诱导凋亡组(P＜0.01),且巴戟天多糖组低于巴戟天水提物组(P＜0.05).凋亡细胞Bcl-2 mRNA表达水平:对照组＞巴戟天多糖组＞巴戟天水提物组＞诱导凋亡组.Bax mRNA表达水平:诱导凋亡组＞巴戟天水提物组＞对照组＞巴戟天多糖组(P＜0.01).Bcl-2/Bax:对照组＞巴戟天多糖组＞巴戟天水提物组＞诱导凋亡组(P＜0.01).结论:巴戟天在一定程度上可抑制全反式维甲酸诱导的成骨细胞凋亡,且巴戟天多糖的这种作用显著优于巴戟天水提物,说明巴戟天多糖是巴戟天抑制成骨细胞凋亡的主要成分之一.
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巴戟天多糖对体外培养成骨细胞核心结合因子α1mRNA表达的影响
目的:观察巴戟天多糖对成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)表达的影响,并与巴戟天水提物相对照,阐述巴戟天补肾阳,强筋骨作用的实质.方法:取24h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,用巴戟天多糖及巴戟天水提物药物血清进行体外培养,72h后提取成骨细胞总BNA进行RT-PCR检测核心结合因子α1mRNA相对表达量.结果:巴戟天水提物组(1.3582±0.0966)与巴戟天多糖组(1.9073±0.1280)Cbfα1mRNA与对照组(0.7347±0.0327)相比具有非常显著差异,且巴戟天多糖组非常显著优于巴戟天水提物组.结论:巴戟天水提物与巴戟天多糖均能显著提高成骨细胞Cbfα1mRNA的表达,且巴戟天多糖的这种作用优于巴戟天水提物.提示巴戟天多糖是巴戟天提高成骨细胞(OB)活性的有效成分之一.
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天丝饮中多糖成分对H2O2损伤SH-SY-5Y的保护作用对比研究
目的:基于ERK1/2通路探讨巴戟天多糖提取物(MHP)、菟丝子多糖提取物(CCP)对H2O2损伤SH-SY-5Y细胞的保护作用.方法:采用SH-SY-5Y细胞为神经细胞体外研究模型,CCK8法检测不同浓度(50、100、200、400、800、l 600mg/L) MHP和CCP对细胞活力的影响和对H2O2损伤SH-SY-5Y细胞活力的影响,分为对照组、H2O2组、MHP+H2O2组、CCP+H2O2组、H2O2+MHP+CCP(1∶1)组.运用Western blot方法检测PSD-95、p-ERK和ERK等神经系统相关蛋白表达情况,分为:对照组、H2O2组、MHP+H2O2组、CCP+H2O2组、H2O2+MHP+CCP(1∶1)组和对照组、PD98059组、PD98059+MHP+CCP组、MHP+CCP组.结果:CCK8检测结果显示,与对照组比较MHP、CCP 1 600mg/L可以显著提高SH-SY-5Y细胞活力,对H2O2损伤SH-SY-5Y细胞有明显保护作用,其中MHP+CCP+H2O2(1∶1)组抗氧化损伤能力强.Western blot结果显示,与对照组比较,H2O2可显著抑制PSD-95表达(P＜0.05).与模型组比较,MHP和CCP可显著促进PSD-95表达(P＜0.05),其中MHP+CCP(1∶1)+H2O2组PSD-95表达量高(P＜0.05).MHP+CCP(1∶1)组可显著促进p-ERK表达(P＜0.05).与MPH+CCP组比较,ERK1/2阻断剂PD98059可显著抑制MHP+CCP(1∶1)组的作用(P＜0.05).结论:MHP+CCP(1∶1)应用对H2O2损伤SH-SY-5Y细胞PSD的保护作用好,可能与促进PSD-95蛋白和p-ERK1/2通路蛋白表达有关.
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巴戟天多糖对大鼠正畸牙移动过程中牙周组织和ODF表达的影响研究
目的 探讨巴戟天多糖在大鼠牙齿移动过程中对牙根吸收的影响.方法 选择36只健康雄性Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组,实验组于大鼠加力第1d开始注射巴戟天多糖溶液,对照组给予生理盐水,每3天1次.加力第3d、7d、14 d,两组大鼠随机选取6只处死,通过大鼠牙齿移动距离、HE染色及免疫组织化学染色探究巴戟天多糖的作用.结果 大鼠第一磨牙压力侧牙周膜出现不同程度的缩窄,牙周膜纤维排列紊乱,牙根及牙槽骨表面出现吸收陷窝.实验组牙齿移动距离及破骨细胞分化因子(ODF)的表达情况均低于对照组,且实验第7d、14 d时两组差异有统计学意义.结论 巴戟天多糖可抑制ODF的表达和牙移动距离,对正畸牙移动过程中所引起的牙根吸收有抑制作用.
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巴戟天多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化的影响
目的 通过观察巴戟天多糖对骨髓间充质干细胞骨髓间质干细胞(BMSCs)增殖和骨向分化的影响.方法 利用髓贴壁法分离培养BMSCs,并通过形态学、流式细胞仪检测细胞表面标志物以鉴定所取得的细胞;采用细胞计数(CCK-8)法检测不同浓度巴戟天多糖对BMSCs增殖情况的影响;对硝基苯磷酸盐法(pNPP)检测不同浓度巴戟天多糖对BMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,以确定其佳促分化的剂量.后续实验分空白组、巴戟天多糖组、成骨诱导组,在培养第7,14,21天分别收集各组细胞上清液,检测其ALP活性;培养第21天采用茜素红染色法检测各组BMSCs矿化情况.结果 随着培养时间的延长,巴戟天多糖高、中浓度组可显著提高BMSCs的增殖(P<0.05),其中高浓度组效果佳.与空白组相比,巴戟天多糖组可提高BMSCs上清液中ALP活性(P<0.05),增加其矿化结节数(P<0.05).结论 巴戟天多糖能促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化的能力.
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巴戟天水溶性多糖热裂解产物研究
目的 研究在无氧和有氧条件下,巴戟天多糖模拟卷烟燃烧(300、600、900℃)的热裂解行为.方法 利用GC-MS定性和半定量测定分析裂解产物.结果 比较了不同条件下裂解产物的差异.在无氧和有氧条件下,巴戟天多糖在同一温度时,裂解产物基本相同;其中5-羟甲基糠醛是主要的裂解产物.结论 首次对巴戟天多糖在不同温度下的热裂解行为进行研究.
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巴戟天多糖对骨质疏松大鼠骨密度及血清微量元素的影响
目的 探讨巴戟天多糖对切除卵巢后骨质疏松大鼠骨密度及血清微量元素的影响.方法 切除大鼠双侧卵巢,建立骨质疏松模型,造模后分别给予巴戟天多糖(100,300 mg/kg)干预,给药30 d后检测大鼠骨密度及骨.矿物质、血清IL-6和TNF-α水平、血清微量元素水平.结果 巴戟天多糖组大鼠骨质密度及骨矿物质水平高于模型组,血清IL-6,TNF-α表达水平低于模型组,骨矿物质及血清微量元素水平高于模型组,并且高剂量作用显著.结论 巴戟天多糖能够提高切除卵巢后骨质疏松大鼠骨密度,其可能通过调节血清微量元素水平及IL-6,TNF-α表达水平发挥作用.
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巴戟天多糖提取工艺比较
目的:采用不同多糖提取方法提取巴戟天多糖,对比分析巴戟天多糖提取的优良方法.方法:采用水提醇沉法、水提取树脂分离法、超声提取法提取巴戟多糖,比较三种工艺提取巴戟天多糖提取率.结果:水提醇沉法的巴戟天多糖提取率为5.28%,水提取树脂分离法的巴戟天多糖提取率为4.62%,超声提取法的巴戟天多糖提取率为4.06%,水提醇法巴戟天多糖提取率高于其它方法.结论:水提醇沉法提取巴戟天多糖具有较高的的率,是巴戟天多糖提取的理想方法.
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巴戟天多糖及其水提取物对体外培养成骨细胞活性的影响
目的:体外培养成骨细胞,观察巴戟天多糖和巴戟天水提物对成骨细胞活性的影响.方法:实验于2004-09/2005-08在福建省骨伤研究所骨伤分子生物学实验室完成.①提取24 h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,分别用50,100,200 g/L巴戟天多糖及50,100,200 g/L巴戟天水提物药物血清进行体外培养.对照组用含50,100,200 g/L无药血清的DMEM培养液培养.培养72 h后进行相关指标检测.②通过MTT方法检测巴戟天多糖、巴戟天水提取物对成骨细胞增殖的影响.③检测碱性磷酸酶、细胞内骨钙素、转化生长因子β1基因表达等指标,观察巴戟天多糖、巴戟天水提取物对成骨细胞活性的影响.结果:①药物血清对成骨细胞增殖的影响:100 g/L巴戟天水提物组和100 g/L巴戟天多糖组吸光度大于对照组,差异有非常显著性(P＜0.01),且100 g/L巴戟天多糖组吸光度高于100 g/L巴戟天水提物组(0.430 2±0.019 3,0.382 9±0.022 8,P＜0.01).②药物血清对成骨细胞活性的影响:巴戟天水提物组与巴戟天多糖组碱性磷酸酶比活性、细胞内骨钙素含量、转化生长因子β1 mRNA相对表达量均高于对照组[碱性磷酸酶比活性:(16.89±2.09),(20.68±2.44),(11.23±2.40) μkat/g;骨钙素含量:(3.74±0.82),(3.97±0.69),(2.63±0.34) ng/106;转化生长因子β1 mRNA相对表达量:2.97±0.37,4.23±0.30,0.07±0.27,P均＜0.01].巴戟天多糖碱性磷酸酶比活性、转化生长因子β1 mRNA相对表达量高于巴戟天多糖组(P＜0.01).结论:巴戟天水提物与巴戟天多糖均能显著促进体外培养成骨细胞增殖、促进成骨细胞分泌碱性磷酸酶与骨钙素、促进成骨细胞转化生长因子β1 mRNA的表达,并且巴戟天多糖优于巴戟天水提物.
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巴戟天多糖对去卵巢大鼠核因子－κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响
目的：观察巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨组织核因子－κB受体激活因子配体（ RANKL）和骨保护素（ OPG） mRNA表达的影响。方法成年雌性SD大鼠30只，随机分为假手术组、模型组、巴戟天多糖组，采用摘取双侧卵巢法建立骨质疏松模型，造模2 w后开始给药，给药3个月后观察各组大鼠骨密度（ BMD），骨钙、骨磷含量，RANKL、OPG mRNA的表达水平。结果给药3个月后巴戟天多糖组能显著提高去卵巢大鼠的 BMD和骨钙、磷的含量，上调OPG mRNA表达，下调RANKL mRNA表达，使RANKL／OPG值下降。结论巴戟天多糖对去卵巢所致的大鼠骨质疏松具有良好的防治作用，其机制可能与调控RANKL和OPG mRNA的表达，降低RANKL／OPG值有关。
关键词： 绝经后骨质疏松 巴戟天多糖 核因子-κB受体激活因子配体 骨保护素 -
巴戟天多糖对肝星状细胞片细胞中MCP-1、IL-8蛋白表达的影响
目的 研究巴戟天多糖对肝星状细胞片细胞中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素(IL-8)蛋白表达的影响.方法 采用乙醛造模,形成肝星状细胞片细胞,作为酒精性肝纤维化的体外研究模型.以巴戟天的提取物巴戟天多糖给Begle犬进行灌胃给药,取给药后2.5 h的血清作为实验药物血清,采用免疫细胞化学法检测肝星状细胞片细胞中MCP-1、IL-8的表达.结果 造模后的肝星状细胞片细胞中MCP-1、IL-8的表达较正常组细胞减小(P<0.05),药物血清组给药后的肝星状细胞片细胞中的MCP-1、IL-8的表达较模型组细胞显著增加(P<0.05).结论 巴戟天多糖可能通过影响MCP-1、IL-2等基因的表达,对机体免疫功能发挥调节作用.
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巴戟天多糖对骨质代谢相关基因的影响
目的 研究巴戟天多糖对骨质代谢相关基因的影响.方法 使用双能量x射线吸光测定法(DEXA)测定骨矿质元素含量(BMC)和使用一个Hologic QDR 1000和Hologic's小动物程序测定骨矿质元素密度(BMD).按照RNA分离试剂盒的说明分离RNA.结果 药理学分析表明能显著提高鼠骨的矿质元素密度和含量,巴戟天多糖处理能够增加骨相关基因(BMP-2、Cbfal、Dmp1、rRANKL、rALP、rOPG、rPPARγ2 mRNA)的表达.结论 药理学试验表明巴戟天多糖能刺激骨代谢相关基因的表达及提高骨矿质元素密度和含量.
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巴戟天多糖含药血清对体外成骨细胞DKK -1表达的影响
目的 探讨巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖、分化及DKK -1蛋白表达的影响.方法 源于大鼠颅盖骨的原代成骨细胞中加入不同浓度的巴戟天多糖含药血清进行干预.MTT法观察巴戟天多糖含药血清对成骨细胞增殖的影响,用硝基苯磷酸盐(P - nitrophenyl phosphate,PNPP)偶氮法观察含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响,用蛋白印记法观察含药血清对成骨细胞DKK -1蛋白表达的影响.结果 巴戟天多糖含药血清可使体外培养成骨细胞的增殖率明显提高(P＜0.01),并能提高成骨细胞ALP活性(P＜0.01).此外,巴戟天多糖含药血清可以下调成骨细胞DKK -1蛋白的表达.结论 巴戟天多糖含药血清可促进成骨细胞的增殖能力和ALP活性,并可通过下调成骨细胞DKK -1蛋白的表达影响骨代谢.
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巴戟天多糖通过p38 MAPK信号通路促间充质干细胞成骨分化的体外研究
目的:探讨巴戟天多糖对间充质干细胞(BMSCs)促成骨作用的影响及该作用与p38 MAPK信号通路的相关性.方法:体外骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原.实验分为3组:1)对照组(经典成骨诱导),用地塞米松,β-甘油磷酸钠,VitC和无药血清的DMEM/F12培养基体外培养第3代的BMSCs;2)巴戟天多糖(MOP)组,用含巴戟天多糖药物血清的DMEM/F12培养基体外培养第3代的BMSCs;3)阻滞剂组(MOP+SB203580),用p38 MAPK的特异阻滞剂SB203580预干预细胞1h后,加入含巴戟天多糖药物血清的DMEM/F12培养基体外培养第3代的BMSCs.体外培养3d,蛋白印迹法检测p38及其磷酸化产物的蛋白表达及用SB203580阻断p38MAPK信号后巴戟天多糖对RUNX2,OPN的影响;体外培养14 d,ALP活性试剂盒检测BMSCs的成骨分化情况;体外培养21d,茜素红染色检测BMSCs钙结节的情况.结果:100 g/L巴戟天多糖药物血清培养基为促(BMSCs)成骨的佳浓度,差异有统计学意义(P＜0.01);MOP组钙结节数量明显高于对照组和阻滞剂组,差异有统计学意义(P＜0.01);与对照组比较,巴戟天组能提高细胞RUNX2,OPN的蛋白表达,差异有统计学意义(P＜0.01),提高了p38蛋白磷酸化表达,差异有统计学意义(P＜0.05);p38特异性阻滞剂SB203580阻断p38 MAPK信号后巴戟天多糖促成骨作用明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:巴戟天多糖能促进BMSCs成骨分化,其作用可能与激活p38蛋白的表达有关.
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巴戟天多糖的降血糖和抗氧化作用研究
目的:研究巴戟天多糖的降血糖和抗氧化作用.方法:采用肾上腺素所致高血糖小鼠模型及四氧嘧啶所致高血糖小鼠模型,观察巴戟天多糖对实验性高血糖小鼠的降血糖作用;采用D-半乳糖致小鼠衰老模型,观察巴戟天多糖对小鼠血浆、肝、心和脑中SOD活性及MDA含量的影响.结果:巴戟天多糖能降低肾上腺素和四氧嘧啶所致高血糖小鼠的血糖,能提高D-半乳糖衰老型小鼠血浆、肝、心和脑中SOD的活性并降低MDA的含量.结论:巴戟天多糖具有降血糖及抗氧化作用.
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巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用
目的：观察巴戟天多糖对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响。方法成年雌性SD大鼠30只，随机分为假手术组、模型组、巴戟天多糖组，每组10只。采用摘取双侧卵巢法建立骨质疏松模型，造模2周后开始给药，给药3个月后观察巴戟多糖天对大鼠骨密度、骨矿物质含量、血清雌二醇、骨钙素及1，25-二羟基维生素D3的影响。结果给药3个月后，与模型组比较，巴戟天多糖组能显著提高去卵巢大鼠的骨密度、骨矿物质、1，25-二羟基维生素D及骨钙素的含量。结论巴戟天多糖对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症具有良好的防治作用。
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巴戟天多糖对梗阻性黄疸大鼠T细胞免疫平衡影响研究
目的:研究巴戟天多糖对梗阻性黄疸大鼠T细胞免疫平衡的影响,为临床用药提供依据.方法:将30只Wistar 大鼠随机平均分成3组,每组10只,假手术组(S组),胆总管结扎手术组(D组),巴戟天多糖注射+胆总管结扎组(B 组).手术15 d后处死大鼠,进行穿刺心脏取血,用流式细胞术检测各标本血液中的T淋巴细胞(CD4+、CD8+)分类及胆红素的含量.结果:胆总管结扎后10 d,大鼠血胆红素升高显著,CD4+减少,CD4+/CD8+下降;巴戟天多糖注射+胆总管结扎组的CD4+、CD4+/CD8+下降不明显,与胆总管结扎组比较有统计学差异(P＜0.01).结论:巴戟天多糖对梗阻性黄疸大鼠T细胞免疫功能具有改善作用,从而为临床上巴戟天的合理用药提供实验依据.
