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大孔树脂纯化知母总皂苷的工艺研究
目的:考察大孔树脂纯化知母总皂苷的工艺.方法:以知母总皂苷含量为指标,采用正交试验确定乙醇浓度、乙醇用量和提取时间；考察大孔树脂型号、上样浓度、吸附流速、上样体积、除杂溶媒、洗脱溶剂浓度及其体积对纯化结果的影响.结果:选取工艺为12倍量50％乙醇提取,每次2.0 h,提取2次,提取液过AB-8型大孔吸附树脂柱(树脂径高比为1∶8),吸附流速1 mL· min-1,6BV0.2 mol·L-1 NaOH溶液洗涤,再用蒸馏水洗至流出液呈中性,3BV 80％乙醇洗脱.结论:该工艺稳定可行,可用于知母总皂苷的提取与纯化.
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知母总皂苷对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞Bcl-2表达的影响
目的:观察知母总皂苷对β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)Aβ25-35诱导的PC12细胞中抗凋亡基因Bcl-2表达的影响.方法:培养PC12细胞,分为6组:正常组、模型组、知母低、中、高剂量组、盐酸多奈哌齐组.模型组加入终浓度为20 μmol·L-1Aβ25-35的培养基,作用48 h；知母低、中、高剂量组和盐酸多奈哌齐分别加入含有低、中、高剂量知母总皂苷(5,10,20 mg·L-1)及盐酸多奈哌齐(1 μmol·L-1)和Aβ25-35(终浓度为20 μmol·L-1)的培养基共同作用于PC12细胞48 h.然后采用MTT检测各组细胞活力的变化；采用RT-PCR检测各组细胞中Bcl-2的mRNA表达变化；采用Western blotting技术检测各组细胞中Bcl-2蛋白的表达变化.结果:和正常组比较,模型组细胞活力降低(P＜0.01)；和模型组比较,高、中、低剂量知母总皂苷能显著升高PC12细胞活力(P＜0.05)；和正常组比较(0.476±0.072,0.14±0.02),模型组抗凋亡基因Bcl-2的mRNA(0.316±0.026)和蛋白(0.08±0.01)表达水平降低(P＜0.01)；和模型组比较,高、中、低剂量知母总皂苷能显著性升高抗凋亡基因Bcl-2的mRNA(0.447±0.016,0.465±0.043,0.472±0.023)和蛋白(0.17±0.01,0.19±0.02,0.13±0.01)的表达水平(P＜0.05).结论:知母总皂苷能升高Aβ25-35诱导的PC12细胞的活力降低,其机制可能是升高Bcl-2的表达水平.
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知母总皂苷对INS-1胰岛β细胞功能的影响
目的:通过知母总皂苷药物干预INS-1胰岛β细胞评价知母总皂苷的对胰岛细胞功能的影响.方法:采用MTT法考察知母总皂苷对INS-1细胞增殖的影响,知母总皂苷不同剂量药物组干预不同状态INS-1细胞,ELISA试剂盒测定药物干预后胰岛素分泌量,SOD、GSH和MDA含量.结果:知母总皂苷在浓度为0.3～80μg/mL时,对 INS-1细胞有明显的促进增殖作用,并增强氧化损伤INS-1细胞胰岛素释放(P<0.01),显著增加氧化损伤模型细胞中SOD、GSH的含量(P<0.01),减少MDA的含量(P<0.01).结论:知母总皂苷能够保护INS-1细胞,减少其氧化损伤,促进其胰岛素释放.
关键词： 知母总皂苷 INS-1胰岛β细胞 氧化损伤 -
知母总皂苷对老年大鼠学习记忆行为和海马突触相关蛋白表达的影响
目的 探讨知母总皂苷(SAaB)对老年大鼠学习记忆能力及突触相关蛋白表达的影响.方法 ig 给予18个月龄SD大鼠SAaB 100和200 mg·kg-1,每天1次,连续9周,第8周开始进行Morris水迷宫实验,记录逃避潜伏期及各象限游泳时间.免疫组织化学法观察海马突触素蛋白(SYP)分布.Western印迹法检测CA3区SYP、突触后致密蛋白95( PSD95)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白分布.结果 与青年大鼠对照组比较,老年对照组大鼠逃避潜伏期显著增加,原平台象限游泳时间占总时间的百分比显著缩短(P＜0.05),海马SYP,PSD95,p-Akt和p-mTOR表达显著降低(P＜0.01).与老年对照组相比,给予SAaB后,青年大鼠逃避潜伏期显著缩短,原平台象限游泳时间占总时间的百分比显著增加(P＜0.05)；海马SYP,PSD95,p-Akt和p-mTOR表达显著增加(P＜0.01).结论 SAaB 能显著改善老年大鼠学习记忆能力,可能与上调SYP和PSD95表达及激活Akt/mTOR信号通路有关.
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知母总皂苷对血管性抑郁小鼠抑郁行为和脑组织病理学的影响
目的:探讨知母总皂苷对血管性抑郁小鼠抑郁行为、脑组织炎症因子及病理学的影响.方法:采用反复缺血再灌注方法制备血管性抑郁小鼠模型,灌胃给予知母总皂苷,实验2周后,观察血管性抑郁小鼠行为学变化,检测小鼠脑组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量以及脑组织病理学改变.结果:与模型组相比,知母总皂苷中剂量组和高剂量组小鼠水平运动得分、垂直运动得分均明显增加(P<0.05),明显缩短小鼠悬尾、游泳不动时间(P<0.05);与模型组比较,知母总皂苷三个剂量组均显著抑制小鼠脑组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量的升高(P<0.05).脑组织病理切片显示,与模型组相比,知母总皂苷各剂量组可显著减轻大脑皮质锥体细胞和脑实质神经细胞出现的核固缩、核溶解、核体不规则等情况.透射电镜结果显示,与模型组比较,知母总皂苷各剂量组能改善脑组织神经元细胞变小、突触泡扩张、血管周围有空白区等现象.结论:知母总皂苷对血管性抑郁小鼠具有显著的治疗作用.
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知母总皂苷对大鼠脑缺血及再灌注损伤的保护作用
目的观察知母总皂苷(SAaB)对于大鼠脑缺血及再灌注损伤的保护作用.方法大鼠灌胃给药7 d,采用双侧颈总动脉结扎法制备大鼠急性全脑缺血模型,测定脑组织含水量,制备脑匀浆测定脑超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;采用大脑中动脉栓塞法制作大鼠急性局灶缺血模型(MCAO),观察大鼠神经功能损害改变并评分,脑组织用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死容积.结果 SAaB低、高剂量组(50,100mg·kg-1)均能降低缺血损伤后脑组织含水量、增加缺血组织SOD活性,降低异常MDA含量;同时MCAO模型中SAaB各剂量组大鼠缺血再灌注后神经功能损害评分均低于对照组,其缺血侧脑组织梗死体积占半侧脑组织的百分比亦较对照模型组降低.所有组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 SAaB对于脑缺血再灌注后引起的脑损伤具有一定的保护作用.
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知母总皂苷大孔树脂纯化工艺研究
知母为百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.的干燥根茎.性苦、甘,寒,归肺、胃、肾经.具有清热泻火,生津润燥之功效.知母含有甾体皂苷、双苯吡酮类、木脂素类、多糖等成分.现代研究表明知母主要有效成分为皂苷,根茎含皂苷约6%,其皂苷的苷元均为菝葜皂苷元,其中知母皂苷A-Ⅰ(timosaponinA-Ⅰ)为菝葜皂苷元(sarsasapogenin)和1分子半乳糖结合的甙,知母皂苷A-Ⅲ为知母皂苷A-Ⅰ和1分子葡萄糖结合的甙,知母皂苷D-Ⅰ为菝葜皂苷元与1分子半乳糖和2分子葡萄糖结合的甙,知母皂苷A-Ⅱ、A-Ⅳ、B-Ⅱ的结构尚不明;还有伪原知母皂苷A-Ⅲ(pseudoprototimosaponin A-Ⅲ).
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知母总皂苷大孔树脂纯化工艺研究
知母为百合科植物知母AnemarrhenaasphodeloidesBge.的干燥根茎.性苦、甘,寒,归肺、胃、肾经.具有清热泻火,生津润燥之功效.知母含有甾体皂苷、双苯吡酮类、木脂素类、多糖等成分.现代研究表明知母主要有效成分为皂苷,根茎含皂苷约6%,其皂苷的苷元均为菝葜皂苷元,其中知母皂苷A-Ⅰ(timosaponinA-Ⅰ)为菝葜皂苷元(sarsasapogenin)和1分子半乳糖结合的甙,知母皂苷A-Ⅲ为知母皂苷A-Ⅰ和1分子葡萄糖结合的甙,知母皂苷D-Ⅰ为菝葜皂苷元与1分子半乳糖和2分子葡萄糖结合的甙,知母皂苷A-Ⅱ、A-Ⅳ、B-Ⅱ的结构尚不明;还有伪原知母皂苷A-Ⅲ(pseudoprototimosaponin A-Ⅲ).
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知母总皂苷对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用
[目的]探讨知母总皂苷对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的保护作用.[方法]用10～40μMAβ25-35分别刺激PC12细胞48h,MTT法测定细胞活力改变.分组:正常组,模型组,知母保护组.用0.5～40mg/L知母总皂苷和20μMAβ25-35共同作用PC12细胞48h,倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化,MTT测其活力改变.[结果]MTT法显示不同浓度Aβ25-35可引起不同程度凋亡,成剂量依赖关系.不同浓度知母总皂苷保护PC12细胞,可抑制这种凋亡,5～20mg/L效果显著(P＜0.01).[结论]Aβ25-35能诱导PC12细胞凋亡,知母总皂苷对其诱导的细胞凋亡有明显保护作用.
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知母总皂苷对甲亢模型小鼠影响的实验研究
目的:探讨知母总皂苷对甲亢模型小鼠的影响.方法:小鼠每天皮下注射左旋甲状腺素钠350μg·kg-1造模,随机分为模型组、知母总皂苷(50、100、200 mg·kg-1)不同剂量组、阳性对照他巴唑(0.01 g·kg-1)组,另设正常对照组.观察并比较动物体重、心率、自发活动；RIA法测定血清T3、T4含量的变化.结果:与正常组比较,模型组动物体重增长明显减慢、心率加快、自发活动增加,血清T3、T4水平显著提高(P＜0.05).与模型组比较,知母总皂苷低、中剂量组及他巴唑组体重增长明显加快(P＜0.05),知母总皂苷中剂量组心率减慢、自发活动减少(P＜0.05),知母总皂苷中剂量组和他巴唑组血清T4水平明显降低(P＜0.05).结论:知母总皂苷在一定剂量范围内具有改善实验性甲亢动物模型症状、降低血清甲状腺素水平的作用.
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大孔树脂吸附知母总皂苷热力学研究
目的:考察SP825、XAD-16、LX-18、XDA-5四种大孔吸附树脂在15℃、25℃和35℃吸附知母提取液中总皂苷的热力学现象.方法:在3种不同温度和一定浓度范围内,通过树脂对知母提取液的静态吸附实验,以紫外分光光度法测定皂苷的含量并绘制吸附平衡线.吸附平衡数据用Langmuir方程和Freundich方程进行拟合,得到SP825、XAD-16、LX-18和XDA-5等大孔吸附树脂对知母总皂苷的吸附焓△H、自由能△G、吸附熵△S.结果:Langmuir方程可以描述4种树脂对知母总皂苷的吸附(R2大于0.98),平衡吸附量qm和KL随着温度的升高而减小,吸附吸附焓△H为负值.自由能△G为正值,吸附熵△S为负.结论:4种树脂吸附总皂苷过程为放热过程,低温有利于吸附,吸附为单分子层吸附,范德华力克服放热过程推动吸附主动进行.XDA-5饱和吸附量大,吸附效果好.
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知母总皂苷抗实验性抑郁作用及其机制的初探
目的 探讨知母总皂苷(total timesaponin,TT)抗实验性抑郁作用并分析其可能的作用机制.方法 以小鼠强迫游泳实验及悬尾实验为动物模型,考察TT抗实验性抑郁作用;以皮质酮诱导PC12细胞损伤为细胞模型,采用细胞形态学方法、MTT法、LDDH法观察TT对PC12细胞损伤的保护作用.结果 TT(25、50mg·kg-1)能显著缩短小鼠不动时间,且对自主活动无明显影响.TT(0.05、0.50、5.00mg·L-1)能明显改善皮质酮诱导的PC12细胞形态的改变,显著提高细胞存活率(P＜0.01),并减少LDH的外漏(P＜0.01).结论 TT具有一定的抗实验性抑郁作用,其机制部分可能是对抗皮质酮诱导的细胞损伤.
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知黄复方抗心肌肥厚的处方筛选及抗小鼠心力衰竭作用考察
目的 确定知黄复方中知母总皂昔与黄芪总皂苷合用抗心肌肥厚的佳配比,通过概率和法证明处方的合理性;进行初步药效学试验.方法 采用正交设计法.小鼠每天分早晚2次皮下注射盐酸异丙肾上腺素(isoprenaline)1 mg·kg-1,连续给药14 d造成心肌肥厚模型,测定通过正交配比;药效学试验采用知母总皂苷与黄芪总皂苷佳剂量配比为(25+100)mg·kg-1组成知黄复方,用前述方法造模.14 d后分别于不同时间测定各组小鼠的心率、跑步时间、游泳时间、缺氧存活时间和心指数.结果 从正交分析可知,知母总皂苷的极差(R)＞黄芪总皂苷的极差,知母总皂苷与知母总皂苷+黄芪总皂苷组成的复方相比P＞0.05,黄芪总皂苷与知母总皂苷+黄芪总皂苷组成的复方相比P＜0.05;知母总皂苷与黄芪总皂苷合用剂量组的心指数小,由金氏概率和法得到Q=1.17;知母总皂苷、黄芪总皂苷及知母总皂苷与黄芪总皂苷组成的复方均可减慢模型小鼠的心率;知母总皂苷与黄芪总皂苷组成的复方均可延长小鼠的跑步时间、游泳时间和缺氧存活时间,可显著降低模型小鼠心指数.结论 黄芪总皂苷对盐酸异丙肾上腺索所致小鼠心肌肥厚具有显著的抑制作用;知母总皂苷与黄芪总皂苷在所选择剂量范围内的理论佳配比为(25+100)mg·kg-1;知母总皂苷与黄芪总皂苷组成的复方有抗盐酸异丙肾上腺素所致小鼠心力衰竭作用.
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知母总皂苷对Aβ25～35诱导的PC12细胞Bax表达的影响
目的：观察知母总皂苷对Aβ25～35诱导PC12细胞凋亡及凋亡相关基因Bax表达的影响。方法培养PC12细胞，实验分为6组：正常组、模型组、知母低剂量组、知母中剂量组、知母高剂量组、西药组。20μmol/L Aβ25～35作用PC12细胞48 h，诱导其凋亡。采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率的变化；采用RT-PCR检测各组细胞中Bax mRNA表达水平的变化；采用 Western印迹技术检测各组细胞中 Bax蛋白的表达水平的变化。结果和模型组比较，知母总皂苷能显著降低Aβ25～35诱导的凋亡（P＜0.05），能显著性降低凋亡基因Bax mRNA 和蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论知母总皂苷能降低Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡率，其机制可能是降Bax mRNA及蛋白表达水平。
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大孔树脂吸附知母总皂苷的动力学与热力学研究
目的:研究大孔树脂吸附知母总皂苷的动力学与热力学特征.方法:通过静态和动态吸附解吸试验筛选出纯化知母总皂苷的大孔树脂类型,确定了AB-8树脂纯化知母总皂苷的吸附动力学模型、等温吸附模型和热力学参数.结果:可用拟二级动力学方程很好地描述吸附动力学过程,可用Langmuir方程较好地拟合等温吸附热力学过程.结论:吸附过程为吸热反应,自发进行,高温有利于吸附,吸附速率主要由颗粒内扩散控制.
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知母总皂苷对Aβ1-42引起的老年大鼠学习记忆能力及海马炎症反应的影响
目的 观察知母总皂苷(SAaB)对淀粉样β蛋白片段1-42( Aβ1-42)引起的老年大鼠学习记忆能力改善作用及其对海马炎症反应的影响.方法 脑室注射A1β1-42后第2天进行Morris水迷宫训练,连续训练5d,在第6天进行空间探索实验,训练期间继续给药,记录逃避潜伏期及各象限游泳时间;Nissl染色观察海马CA1区锥体神经元改变及免疫组织化学染色观察胶原纤维酸性蛋白(GFAP)改变;Western blot检测GFAP表达水平改变.结果 Aβ1-42组大鼠出现明显的空间学习障碍,表现为逃避潜伏期较对照组明显延长,在原平台象限游泳时间占总游泳时间的百分比明显降低;海马CA1区锥体神经元的排列较对照组不整齐且稀疏;GFAP阳性细胞数明显增多,染色增强,突起增多并延长.GFAP蛋白表达明显增加.SAaB可明显抑制Aβ1-42引起的这些变化,呈明显剂量依赖性.结论 SAaB能够明显的改善Aβ1-42引起的老年大鼠学习记忆能力障碍及海马神经元损伤.
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知母中总皂苷的提取及含量测定
目的：采用中药提取浓缩机组从知母中提取总皂苷，并对其含量进行测定。方法取知母饮片适量，加8倍量75％乙醇，回流提取2次，每次1．5h，收集浓缩滤液。经AB－8或D－101大孔吸附树脂分离、纯化，冷冻干燥后制成知母总皂苷提取物粉末。提取物经乙醇和盐酸混合物水解成萨尔萨皂苷元，用氯仿萃取；萨尔萨皂苷元经浓硫酸氧化、显色后，紫外分光光度法法测定光密度值，计算总皂苷的纯度。结果得到3批知母总皂苷提取物粉末，得药率依次为2．6％、6．2％和6．8％，纯度分别为65．3％、59．1％和61．4％。结论中药提取浓缩机组提取知母总皂苷容量大且得率高，2种大孔吸附树脂分离知母总皂苷效果相似。
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淫羊藿总黄酮对皮质酮诱导免疫功能低下大鼠的保护作用及配伍研究
目的 探讨淫羊藿总黄酮、知母总皂苷和甘草次酸及其组合物对皮质酮所致的肾阳虚大鼠肾脏和免疫功能的保护作用.方法 采用皮质酮所致的大鼠肾阳虚模型,测定不同配伍方式的淫羊藿总黄酮、知母总皂苷、甘草次酸及其组合物对其肾脏和免疫功能的保护作用.结果 淫羊藿总黄酮、知母总皂苷和甘草次酸配伍使用,对皮质酮所致大鼠激素副作用的拮抗效应佳.结论 具有滋阴、温补肾阳作用的中药组合物能够有效保护外源性皮质激素作用下的肾脏和免疫功能,具有开发为新药的潜力和应用价值.
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知母总皂苷对老年大鼠海马突触相关蛋白表达的影响
有些人认为AD样痴呆是正常脑衰老的结果,皮质失联络是其重要基础.在20~100岁的正常衰老过程中,新皮质突触密度的下降趋向于（但未达到）AD发病的水平,如果出生时突触有缺陷或缺少教育,将引起突触过早下降到出现痴呆的水平.这种突触丧失的影响可能比斑块和神经原纤维缠结大［1］.近年来研究发现AD患者早期即可出现突触的丧失,其认知障碍程度与突触结构和功能的改变密切相关.
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知母总皂苷干预T2DM大鼠的药效学研究
目的 通过知母总皂苷药物干预2型糖尿病大鼠(T2DM)评价知母总皂苷的降糖降脂药效作用.方法 采用链脲佐菌素(STZ)结合高脂饲料喂养法建立T2DM大鼠模型,知母总皂苷高、中、低剂量等药物组干预T2DM大鼠,测定前后空腹血糖、糖耐量、胰岛素水平、血脂指标、TNF-α含量,统计学处理数据进行比较分析.结果 知母总皂苷可显著降低T2DM糖尿病大鼠的空腹血糖,显著改善T2DM大鼠的糖耐量异常及高血脂症状,能够下调T2DM大鼠肝脏的TNF-α表达.结论 知母总皂苷具有显著的降血糖降血脂药效作用,这可能与知母总皂苷增加了T2DM大鼠的胰岛素敏感性,改善其胰岛素抵抗状态有关.
