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清脑滴丸对急性脑缺血大鼠大脑皮层GFAP、NeuN蛋白表达的调节作用
目的 动态观察清脑滴丸对急性脑缺血大鼠大脑皮层胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(NeuN)表达的影响,探究其对急性脑缺血的保护作用.方法 将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、清脑滴丸组3组,7个亚组,采用改良的Zea Longa法建立急性脑缺血动物模型,采用HE染色和尼氏染色观察脑组织形态学变化和损伤状况,采用免疫组化法检测GFAP、NeuN的表达水平.结果 HE染色和尼氏染色发现,大鼠在缺血再灌注的不同时点大脑皮层均出现了不同程度的病理形态学改变,以缺血再灌注24h时较为显著,出现神经元水肿、细胞和血管间隙增宽、核固缩;免疫组化染色法发现再灌注3h神经元和星形胶质细胞出现损伤,24 ～72 h神经元损伤较重,星形胶质细胞突起断裂明显,细胞排列稀疏;清脑滴丸组缺血1.5h再灌注24 h和72 h神经元数量较模型组增多,细胞核着色较深.结论 清脑滴丸可减轻急性脑缺血大鼠大脑皮层组织损伤,上调皮层NeuN和GFAP蛋白的过低表达,可减轻急性脑缺血损害.
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黄芪糖蛋白对EAE小鼠的神经保护作用及其修复机制分析
目的:观察黄芪糖蛋白(HQGP)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的保护作用,并探讨其神经修复机制.方法:复制髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)多肽诱导的小鼠EAE模型,20只C57BL/6雌性小鼠随机分为EAE组和HQGP组.HQGP组于免疫后第3日起,按1 mg·kg-1 ·d-1腹腔注射HQGP,持续给药18d.通过五级临床症状评分和小鼠体质量变化观察HQGP对EAE小鼠的干预效应;取小鼠脊髓进行苏木精-伊红(HE)和固蓝(LFB)染色观察HQGP的神经保护作用;免疫组织化学法检测小鼠脊髓白细胞分化抗原(CD)68+巨噬细胞的浸润以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS),微管相关蛋白2(MAP-2)和神经元核抗原(NeuN)的表达;免疫荧光组织化学双染法检测小鼠脊髓CD11b+细胞和趋化因子配体-5(CCL-5)的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠脾脏单个核细胞(MNC)培养上清液中相关细胞因子的变化.结果:HQGP有效缓解EAE小鼠的临床症状,推迟发病时间,减轻中枢神经系统的炎性反应和髓鞘脱失;HQGP能减少小鼠脊髓CD68+巨噬细胞和CD11b+细胞的数量,抑制脊髓iNOS和趋化因子CCL-5的表达,增加MAP-2和NeuN的表达水平;HQGP能明显降低EAE小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-6的分泌,促进IL-10和γ-干扰素(IFN-γ)的分泌.结论:HQGP具有治疗EAE的潜在作用,其神经保护机制与抑制炎症反应、调控免疫细胞表达及细胞因子的分泌、减轻髓鞘脱失并促进轴突修复和神经元发育有关.
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扎里奴思方干预骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤大鼠黏附分子及NeuN表达的影响
目的:观察扎里奴思方(扎方)干预骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠黏附分子及神经元核抗原(NeuN)表达的影响,并探讨其作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、扎方组、移植组和联合组;线栓法制备大鼠MCAO模型,体外全骨髓贴壁筛选法培养及扩增BMSCs;大鼠ig给药(14.6 g·kg-1·d-1),BMSCs悬浮液经颈内动脉移植人脑;移植后1,3,7,14 d取材,评价神经功能积分(NS),逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)和整合素α4mRNA表达,免疫组化法测NeuN表达.结果:MCAO模型大鼠NS及NeuN表达较假手术组显著降低(P＜0.01),VCAM-1及整合素α4mRNA表达显著增高(P＜0.01);与模型组比较,扎方1,3,14 d移植3,7,14 d及联合各组NS增加(P＜0.01,P＜0.05),扎方、移植及联合各组NeuN增加(P＜0.01),VCAM-1及整合素α4mRNA降低(P＜0.01);与移植组比较,扎方7d组NS减小(P＜0.05),联合1,3,14 d组NS增加(P＜0.01),扎方1,3d组VCAM-1mRNA减少(P＜0.01),扎方1,7,14 d组整合素α4mRNA减少(P＜0.01),联合各组VCAM-1及整合素α4mRNA均降低(P＜0.01),扎方及联合各组NeuN增高(P＜0.01);扎方与联合组比较,联合各组NS及NeuN表达增加(P＜0.01),VCAM-1和整合素α4mRNA表达降低(P＜0.01);同组间比较,各组NS,NeuN及VCAM-1 mRNA均以7d组变化显著,14 d有明显改善(P＜0.01),整合素α4mRNA以3d组变化显著,14 d可改善(P＜0.01).结论:脑缺血后神经功能及神经元均出现不同程度损伤;扎方和BMSCs移植均可不同程度改善脑缺血后神经功能及脑组织神经元状态,以二者联合作用显著,其机制可能与干预VCAM-1及整合素α4动态表达有关.
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康脑液对脑缺血再灌注大鼠GFAP和NeuN表达的影响
目的 观察康脑液对脑缺血再灌注大鼠胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元核抗原(NeuN)表达的影响.方法 将大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、高、中、低剂量康脑液组；用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型；再灌注后不同时间,用免疫组化方法检测GFAP、NeuN的表达.结果 脑缺血再灌注后第3,7,14,21 d,康脑液组可减少GFAP的表达,与模型组相比差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01),至缺血后21d,康脑液组GFAP表达已接近正常；康脑液组的NeuN表达增高,与模型组比较差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 康脑液可抑制缺血侧大脑皮质GFAP的表达,诱导神经干细胞向神经元分化,促进神经的再生及修复.
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金匮肾气丸对阿尔茨海默病大鼠模型海马神经元β淀粉样蛋白和神经元核抗原表达的作用
目的：探讨金匮肾气丸对阿尔茨海默病（AD ）模型大鼠海马神经元β淀粉样蛋白（Beta amyloid ）和神经元核抗原（NeuN ）表达的影响。方法清洁级健康SD大鼠24只，分成三组：对照组，AD模型组，中药组。采用在单侧海马注射Aβ2535建立AD大鼠模型，SABC免疫组化方法检测各组大鼠海马神经元中Beta amyloid和NeuN的表达。结果①AD模型组与对照组比较，大鼠海马Beta amyloid阳性细胞数增多（ P＜0.01），NeuN阳性细胞数减少（ P＜0.01）；②中药组与AD模型组比较，大鼠海马Beta amyloid阳性细胞减少（ P＜0.01），NeuN阳性细胞数增加（ P＜0.01）。结论金匮肾气丸能抑制Beta amyloid阳性细胞表达，促进NeuN阳性细胞的表达，从而起到防治AD的作用。
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新型大鼠脊髓打击器的制备及建模大鼠的功能与病理评价
[目的]制备一种简便、实用的急性大鼠脊髓损伤建模装置.[方法]用木板、新泡沫板、吸管、手术缝线及金属插销杆等制作新型大鼠脊髓打击器.取36只成年雌性SD大鼠,体质量为220～250 g,随机等分为假手术组(Sham组)、轻度打击组(SCI1组)和重度打击组(SCI2组),利用自制大鼠脊髓打击器建立大鼠脊髓损伤模型,SCI1组采用10 g×25mm打击规格进行垂直打击损伤,SCI2组采用10 g×50mm打击规格进行垂直打击损伤.各组大鼠于术前1d,术后1、3、7、14、21和28 d进行BBB运动学评分,观察大鼠后肢运动功能情况,术后28 d对各组大鼠受损脊髓组织进行HE染色、神经元核抗原(NeuN)免疫组化检测.[结果]Sham组各观察时间点的BBB评分均为21分,各SCI组术后1d时BBB评分为0分,之后BBB评分结果随时间延长呈逐步恢复趋势,从3d开始,SCI1组的BBB评分高于SCI2组(P＜0.05).各组大鼠后肢左右侧活动情况无明显差异,实验过程中无大鼠死亡.术后28 d HE染色、NeuN免疫组化结果显示SCI2组脊髓受损程度明显重于SCI1组(P＜0.05).[结论]该新型大鼠脊髓打击器制作简便、可行性高,建立的SCI模型具有稳定性高、可重复性强、损伤程度可调节等特点,适合相关科研人员使用.
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黄蜀葵提取物灌胃对脑缺血再灌注损伤小鼠神经损伤的防治作用及其机制探讨
目的 观察黄蜀葵提取物灌胃对脑缺血再灌注损伤小鼠神经损伤的防治作用,并探讨其可能机制.方法 48只小鼠随机分为A、B、C、D组各12只,A、B组制模前灌胃30、10 mg/kg的黄蜀葵提取物,C、)组予等量生理盐水;A、B、C组均制备脑缺血再灌注损伤模型,D组只分离颈部两侧肌肉、血管,未作其他处理.比较各组神经功能缺损程度评分、脑梗死体积、神经元核抗原(NeuN)阳性细胞数及超氧化物歧化酶1(SOD1)、SOD2蛋白相对表达量.结果 与D组比较,A、B、C组的神经功能缺损程度评分、脑梗死体积增加,NeuN阳性细胞数减少,SOD1、SOD2蛋白相对表达量降低(P均＜0.05);与C组比较,A、B组的神经功能缺损程度评分、脑梗死体积减少,NeuN阳性细胞数增加,SOD1、SOD2蛋白相对表达量升高(P均＜0.05);与B组比较,A组的神经功能缺损程度评分、脑梗死体积减少,NeuN阳性细胞数增加,SOD1、SOD2蛋白相对表达量升高(P均＜0.05).结论 黄蜀葵提取物对脑缺血再灌注损伤小鼠神经损伤有防治作用,尤以30 mg/kg效果佳,机制可能与其可提高SOD1、SOD2蛋白水平有关.
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二十二碳六烯酸对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响及其机制
目的 观察二十二碳六烯酸(DHA)对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响,并探讨其可能的机制.方法 将60只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组和观察组,每组20只.模型组和观察组制备脊髓损伤模型,假手术组只暴露但不损伤脊髓.造模后0.5h,观察组经尾静脉注射DHA 1 000 nmol/kg,连用3天.各组分别于造模前1天(t0)及造模后1天(t1)、3天(t2)、7天(t3)、21天(t4),记录斜板试验大角度和脊髓损伤评分(BBB评分);于T1～T4分别取5只大鼠,观察脊髓病理形态,采用免疫组化法检测脊髓神经元核抗原(NeuN)与神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达.结果 模型组和观察组T1～T4斜板试验大角度及BBB评分均明显低于T0和假手术组同时间点,模型组T3、T4斜板试验大角度及BBB评分均明显低于观察组同时间点(P均＜0.05).与假手术组比较,模型组和观察组T1～T4脊髓形态均发生病理性改变,观察组较模型组病理性改变有所改善.与假手术组比较,模型组和观察组T1～T4脊髓背角和腹角NeuN表达均降低,但模型组降低更明显(P均＜0.05).与假手术组比较,模型组和观察组T1～T4 GFAP表达均升高,但模型组T3、T4升高更明显(P均＜0.05).结论 DHA能够减轻脊髓损伤大鼠的病理损伤,促进神经功能的恢复;升高脊髓NeuN表达、降低GFAP表达可能是其作用机制.
关键词： 脊髓损伤 二十二碳六烯酸 神经元核抗原 神经胶质纤维酸性蛋白 大鼠 -
缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织pCaMKⅡα表达和空间学习记忆的变化
目的 观察缺氧缺血性脑病新生小鼠脑组织神经元核抗原(NeuN)、磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(PCaMKⅡα)表达和空间学习记忆的变化.方法 7 d新生小鼠,随机分为两组:假手术组(n=19)与模型组(n=23).采用右侧颈总动脉结扎,并给予8%低氧100 min制备新生小鼠缺氧缺血性脑病模型;DAPI染色观察脑组织病理变化;荧光免疫组织化学法检测脑组织NeuN和pCaMKⅡα的表达;Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆力.结果 假手术组小鼠脑组织细胞排列致密整齐,NeuN阳性细胞数[(106.50±20.07)个]和pCaMKⅡα阳性细胞数[(87.17±16.55)个]较多,逃避潜伏期短;与假手术组相比,模型组小鼠患侧脑组织可见大量细胞坏死脱落、细胞间隙变大,NeuN阳性细胞数[(19.17±3.60)个]和pCaMKⅡα阳性细胞数[(13.33±3.62)个]明显减少(P<0.01),逃避潜伏期延长(P<0.01).结论 缺氧缺血性脑病模型小鼠空间学习记忆力差,可能与脑组织神经元上pCaMKⅡα表达减少有关.
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神经元核抗原NeuN在C57BL/6小鼠垂体表达及分布
目的 观察神经元核抗原(NeuN)在C57BL/6小鼠垂体的表达及分布.方法 8周龄C57BL/6小鼠4只, 经心脏灌注取垂体,常规固定石蜡包埋切片,行NeuN及ACTH免疫荧光染色.脑组织冰冻切片,行NeuN免疫荧光染色.另有2只小鼠垂体行蛋白质印迹检测NeuN.结果 NeuN表达在垂体前叶细胞核膜及核仁,在垂体中叶则位于细胞核内,而在垂体后叶无明显表达;NeuN在皮质神经元则主要表达于胞质.蛋白质印迹显示皮质中46 kD、48 kD及66 kD水平三条带,垂体组织可见一66 kD分子量水平条带.结论 66 kD NeuN为较特异表达于小鼠垂体组织细胞核的NeuN,其表达和分布差异可能与垂体前叶、中叶衍化和功能分化有关.
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脱氢表雄酮对血管性痴呆小鼠学习和记忆能力的改善作用
目的:研究脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对血管性痴呆小鼠学习和记忆能力的改善作用及可能机制.方法:将小鼠随机分为假手术组、模型组及DHEA(20、40和60 mg/kg)组.采用夹闭小鼠双侧颈总动脉15 min再放开的方法,建立全脑缺血再灌注所致的血管性痴呆小鼠模型.通过Y迷宫和新物体辨别实验测试小鼠的学习和记忆能力;采用Western blot法检测小鼠海马组织神经元核抗原(NeuN)、突触小泡蛋白(SYP)和突触后致密蛋白95(PSD-95)的含量.结果:与假手术组相比,在Y迷宫和新物体辨别实验中,模型组小鼠出现显著的学习和记忆障碍,DHEA治疗能显著增加Y迷宫实验中小鼠自发交替反应率,同时还可显著提高小鼠新物体辨别实验的优先指数和辨别系数(P<0.05),其中DHEA中剂量组效果为显著(P<0.01).Western blot实验结果显示,模型组小鼠海马组织NeuN、SYP和PSD-95的表达水平与假手术组比显著降低(P<0.05);DHEA组小鼠海马组织NeuN、SYP和PSD-95蛋白的表达较模型组显著增多(P<0.05).结论:DHEA具有提高血管性痴呆小鼠学习和记忆能力的作用,其机制可能与减少神经元的丢失和改善突触的可塑性有关.
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缺氧预处理对大鼠颅脑损伤后海马神经元和行为学的影响
目的：探讨缺氧预处理对创伤性颅脑损伤大鼠海马神经元活性的影响及其机制。方法将72只SD大鼠,随机分为对照组(n=6)、缺氧预处理组(HPC组,n=6)、创伤性颅脑损伤组(TBI组,n=30)、缺氧预处理+创伤性颅脑损伤组(HPCT组,n=30)。采用改良Freeny’s法制作TBI模型,在低压氧舱内对大鼠进行缺氧预处理。伤后3 h、12 h、1 d、7 d、14 d,对四组大鼠进行神经功能评分(NSS),采用免疫组化染色检测海马CA1区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和神经元核抗原(NeuN)的表达水平。结果与对照组比较,TBI组伤后3 h~7 d MMP-9表达增加,3 h~14 d NSS评分增加而NeuN表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05)；HPCT组12 h~7 d MMP-9表达增加,3 h~14 d NSS评分增加,12 h~14 d NeuN表达减少(P＜0.05)。与TBI组比较,HPCT组3 h~7 d MMP-9表达明显减少而NeuN表达明显增加,12 h~7 d NSS评分明显减少(P＜0.05)。结论缺氧预处理能减少TBI后海马区MMP-9的表达,减轻海马神经元的损伤程度。
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急性有机磷酸酯类化合物中毒对大鼠神经元的损伤作用
目的 探讨有机磷酸酯类化合物对大鼠神经元的急性损伤作用及其可能的机制.方法 18只SD大鼠按照随机数字表法分为2组,分别是染毒组(12只)和对照组(6只).染毒组选择沙林作为有机磷酸酯类化合物代表.大鼠肌肉注射沙林,1 min后腹腔注射氯解磷定和阿托品,出现典型中毒症状者入组.对照组在相应时间点给予注射生理盐水.24h后取脑组织行HE染色、神经元核抗原(NeuN)免疫组化酶染色分析,观察大鼠脑组织梨状皮质、海马CA1区、纹状体区神经元的变化. 结果 HE染色发现中毒大鼠梨状皮质、纹状体区可见较多变性、坏死的神经细胞.并且NeuN阳性细胞数明显减少,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05). 结论 在急性大剂量有机磷酸酯类化合物暴露情况下.可以引起大鼠神经元的大量坏死,从而产生一系列的神经功能缺损.这种作用可能与细胞毒性作用、氧化应激等非胆碱能机制有关.
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胚胎发育不良性神经上皮性肿瘤的临床病理分析
目的 提高对胚胎发育不良性神经上皮性肿瘤(DNET)临床表现、病理形态学、免疫组织化学及影像学特征的认识.方法 回顾性分析39例DNET的临床表现、病理形态改变、免疫组织化学检测及影像学表现,并对患者进行随访.结果 39例DNET患者均在25岁以前发病,以局灶性难治性癫痫发作为主要临床表现.肿瘤由神经元和特异性胶质神经元成分(SGE)构成,基质为黏液伴微囊形成,周围有少突胶质细胞样细胞(OLC).单纯型DNET 33例,复杂型DNET 5例,非特殊型DNET 1例.OLC示S-100及少突胶质细胞转录因子-2(Oligo-2)阳性,神经元核抗原(NeuN)、突触素(Syn)及神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阴性;神经元示NeuN及Syn阳性.CT检查示病变为不规则低密度影,少数有囊性改变或钙化;磁共振成像(MRI)检查示病灶T1加权像(T1WI)呈低信号,T2加权像(T2WI)呈高信号,无强化,无瘤周水肿及占位效应.随访无肿瘤复发及死亡.结论 DNET具有独特的临床、病理及影像学特征.
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七宝美髯口服液对SAMP8小鼠海马神经元凋亡的影响
目的:考察七宝美髯口服液对SAMP8小鼠学习记忆功能及海马NeuN、Nampt和Aβ和表达的影响.方法:SAMP8小鼠灌胃给予七宝美髯口服液,SAMR1小鼠平行对照,连续干预60d,采用Morris水迷宫法考察小鼠学习记忆功能,采用免疫组化法考察小鼠海马NeuN、Aβ和Nampt的表达.结果:与模型对照组比较,七宝美髯口服液(1.44g/kg)能显著提高SAMP8小鼠的学习记忆能力,缩短逃避潜伏期,增加小鼠进入平台象限次数,提高进入平台象限百分比;能显著促进海马NeuN和Nampt的表达,提高其平均光密度值;能显著抑制小鼠海马Aβ的表达,降低其平均光密度值.结论:七宝美髯口服液能够改善SAMP8小鼠的学习记忆功能,该作用与其增强SAMP8小鼠海马NeuN和Nampt表达,抑制Aβ的表达有关.
关键词： 七宝美髯口服液 SAMP8 神经元核抗原 尼克酰胺磷酸核糖转移酶 β淀粉样蛋白
