复方中药益气祛白方对蘑菇酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的:运用血清药理学方法研究益气祛白方对体外酪氨酸酶(TYR)活性及多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.方法:分别以益气祛白方的水提物与醇提物制备含药血清,体外观察其对于TYR活性及多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.结果:益气祛白方水提物及醇提物均可以明显提高TYR活性和多巴色素自动氧化生成的黑素量,与正常对照组比较,差异具有显著意义(P＜0.05),其中益气祛白方水提组效果更好.结论:益气祛白方对TYR活性和多巴色素自动氧化生成黑素的上调作用在白癜风的治疗方面具有积极意义.

刺蒺藜在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成影响

目的：探讨刺蒺藜在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法：采用 MTT 法测定刺蒺藜对人表皮共培养细胞活力的影响，采用酶学方法测定酪氨酸酶活性，490 nm比色法测定黑素含量。结果：0.1 mg/ml、0.2 mg/ml和0.5 mg/ml刺蒺藜对于人表皮共培养体系中酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性激活作用，0.2 mg/ml及0.5 mg/ml刺蒺藜与对照组相比有显著差异（P＜0.01）。结论：刺蒺藜对于人表皮共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用。

紫草素在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的：探讨紫草素在人表皮共培养体系中对酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法在共培养体系中测定紫草素对酪氨酸酶活性和黑素生成的影响。结果0.25μmol/L、0.5μmol/L和1μmol/L紫草素对于人表皮共培养细胞增殖无影响,0.25μmol/L、0.5μmol/L和1μmol/L紫草素对于表皮共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性激活作用,0.5μmol/L及1μmol/L紫草素与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论紫草素对于人表皮共培养体系中酪氨酸酶活性和黑素生成有一定促进作用。

通过改变TYR性状抑制黑素生物合成的方法

酪氨酸酶(TYR)是黑素生物合成的关键限速酶.目前许多色素沉着性皮肤病治疗,是通过调节TYR活性来完成,较少关注TYR的稳定性.该酶的稳定性依赖于其在ER和高尔基体内加工和成熟、向黑素体的运送、通过泛激素-蛋白酶体途径和/或内涵体/溶酶体系统的降解.本文根据对TYR稳定性影响归类黑素生成抑制因子,总结目前所了解的如何控制,TVR质量而影响其自身稳定性和黑素生成.

高良姜提取物促进黑素生成的谱效关系分析

目的 建立高良姜提取物指纹图谱,考察其对B16鼠黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素量的影响,并分析其谱效关系.方法 HPLC法建立高良姜醇提物(G1)、G1水沉物(G2)、G2大孔树脂纯化物(G3)、G3聚酰胺精制物(G4)指纹图谱;MTT法检测各提取物对B16细胞增殖的影响;比色法检测其对酪氨酸酶活性和黑素量的影响;灰关联度分析法研究其谱效关系.结果 与对照组相比,G1浓度为1.00～5.00 μmol/L、G2浓度为0.50～5.00 μmol/L、G3浓度为0.25～5.00 μmol/L,G4浓度为0.25～ 10.00 μmol/L,能显著促进B16细胞增殖(P＜0.01); G1、G2浓度为0.50μmol/L,G3、G4浓度为0.50～ 1.00μmol/L,能显著增强酪氨酸酶的活性(P＜0.05、0.01);G1浓度为0.50、5.00 μmol/L,G2、G4浓度为0.50～5.00 μmol/L,G3浓度为0.25～5.00μmol/L时,促黑素合成作用显著(P＜0.05);在相同浓度下,G4促B16细胞增殖和增强酪氨酸酶活性的作用强.谱效关系分析表明,与药效关联度高的是高良姜素(7号峰).G1、G2、G3、G4含高良姜素分别为27.61、88.72、348.53、693.35 mg/g,验证实验结果表明高良姜素在0.25～10.00 μmol/L均有显著的促B16细胞增殖、增强酪氨酸酶活性和促进黑素量升高的作用.结论 随着高良姜素量的增加,高良姜各提取物对B16细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素量的作用逐渐增强,表明高良姜素是高良姜治疗白癜风的有效物质之一.

非洲草药中的高效酪氨酸酶抑制剂

酪氨酸酶又称多酚氧化酶(PPO),是一个含铜的酶.在黑素生成过程的初二步中起着催化作用,对昆虫蜕皮、色素沉着过度和防止皮肤黑色素沉着等都有一定影响,故在控制虫灾、化妆品配方和抗黑素生成等方面都有其应用价值.

6种中药组方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖和黑素生成的影响

目的 研究6种中药组方水提物、醇提物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响.方法 以MTF法测定各组方对B16细胞的增殖活性:NaOH裂解法测定各组方对B16细胞的黑素生成量.结果 组方1、2、3水提物和组方2、4、6醇提物具有明显促细胞增殖作用(P>0.05);水提物中细胞增殖率高的为组方2(0.625 mg/ml),增殖率为22.60%;醇提物中细胞增殖率高的为组方4(0.078 mg/ml),增殖率为11.60%.组方1、2、4、5、6水提物和6种组方醇提物均具有促进黑色素生成的作用(P<0.05).水提物中黑素增率高的为组方1(0.313 mg/ml),增率为75.38%;醇提物中黑素生成增率高的为组方1(1.25 mg/ml),增率为88.01%.结论 各组方对鼠黑素瘤B16细胞增殖及黑素生成均有一定的促进作用,但其作用强度与组方的组成密切相关.

皮肤创伤修复过程中表皮生长因子与黑素细胞及黑素生成关系的研究进展

创伤修复是一个复杂的过程,包括炎症反应、细胞增殖、基质沉积以及组织重塑过程.多种细胞及细胞因子共同参与促进创伤愈合.表皮生长因子被认为是其中的关键因素.表皮生长因子在创伤愈合中的积极作用已在动物实验及临床应用上得以证实,而在创伤修复过程中,表皮生长因子与黑素细胞及黑素生成的关系并不明确.近年来,研究发现,表皮生长因子可以抑制激光术后黑素细胞表达黑素,从而改善炎症后色素沉着.

在重建色素沉着表皮中角质形成细胞的黑素小体帽化——紫外线照射和异丁基甲黄嘌呤对黑素生成的影响

黑素细胞的生物学和黑素生成的新进展

近年来,已有少数新药用于治疗色素性皮肤病,已列出药理学干预黑素细胞和黑素生成的一些靶位.弄清皮肤生理性自然光防护、黑素细胞和黑素作用以及黑素生成的调控机理,以便采取新的安全措施来纠正异常肤色,增强皮肤预防长期过度Et晒后的有害作用.

威灵仙等4种中药抑制黑素生成作用的机制研究

目的:研究威灵仙等4种中药对melan-a小鼠黑素细胞酪氨酸酶(Tyr)活性、Tyr及酪氨酸酶相关蛋白(TRP)基因转录与蛋白表达的影响,对4种中药抑制黑素生成的作用机制进行初步探讨.方法:用中药提取物处理melan-a小鼠黑素细胞后进行黑素含量测定,左旋多巴染色、实时荧光定量反转录(RT)-PCR和Western blot分别测Tyr及TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平.以熊果苷作为阳性对照.结果:4种中药在20 μg/mL浓度时具有明确的抑制黑素生成的作用,并且都不同程度地抑制Tyr的氧化活性.威灵仙、五倍子可以同时降低Tyr及TRP-1、TRP-2的基因转录和蛋白表达量.而麦冬、白苏叶可以降低Tyr及TRP-1、TRP-2的合成,但是对基因表达无影响.结论:威灵仙及五倍子提取物可以通过抑制Tyr、TRP-1、TRP-2的基因表达及蛋白合成和Tyr的多巴氧化活性这三方面实现其抑制黑素产生的作用;麦冬、白苏叶在基因转录后的酶蛋白水平发挥抑制黑素生成的作用.

苦参碱及肉桂酸对体外培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响

目的:观察苦参碱和肉桂酸对melan-a小鼠黑素细胞黑素生成的影响.方法:用药物干预melan-a小鼠,观察黑素细胞的形态并测定各组黑素量及酪氨酸酶的活性.结果:肉桂酸干预melan-a小鼠黑素细胞2 d后就表现出明显的促进树突生成的作用.肉桂酸和苦参碱在高、中、低浓度(1.00、0.10、0.01 mmol/L)有抑制melan-a小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性的作用(除外0.01 mmol/L苦参碱),其抑制作用均弱于对照药氢醌(P＜0.01).苦参碱(0.001～1.000 mmol/L)和肉桂酸(0.001～1.000 mmol/L)均能使melan-a小鼠黑素细胞黑素量减少,但其抑制黑素合成的作用明显低于同浓度氢醌.Fontana-Masson染色表明,经苦参碱干预后的melan-a小鼠黑素细胞内黑素颗粒少于空白对照组.结论:苦参碱和肉桂酸均有抑制melan-a小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性的作用及使黑素合成量减少的作用,且苦参碱作用强于肉桂酸,而肉桂酸有促进黑素细胞树突形成的作用.

人参皂苷Rb1对人表皮黑素细胞黑素生成的影响

[目的]探讨人参皂苷Rb1对体外培养的人黑素细胞黑素生成的影响及其作用机制.[方法]人表皮黑素细胞取自小儿包皮环切术标本,取第2～5代细胞进行实验.采用MTT法测定体外培养的人黑素细胞增殖情况,分光光度计法测定酪氨酸酶的多巴氧化酶活性,氢氧化钠裂解法测定黑素含量,免疫蛋白印记法测定黑素细胞酪氨酸酶、小眼畸形相关转录因子(MITF)的表达及cAMP应答元件结合蛋白(CREB)的磷酸化.[结果]体外培养的人黑素细胞分别加入25、50、100 μ mol/L人参皂苷Rbl作用72 h后,黑素细胞存活率3组间差异无统计学意义(P＞0.05),黑素含量呈浓度依赖性增加(与溶剂对照组相比的相对黑素含量分别为112.4％±5.7％、155.7％±6.3％、217.2％±11.7％),酪氨酸酶活性增加(相对酪氨酸酶活性分别为117.9％±5.7％、158.2％±9.6％、182.6％±10.0％).100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h,黑素细胞酪氨酸酶(225.4％±12.8％)、MITF(313.5％±16.7％)蛋白表达明显升高(与溶剂对照组相比,P值均＜ 0.01),CREB磷酸化明显增加(322.5％±21.1％)(与溶剂对照组相比,P＜ 0.01).100 μmol/L人参皂苷Rb1作用黑素细胞8h,MITF蛋白表达无明显变化；作用24h后,MITF表达明显增加,与0时间点相比,P＜ 0.01.10 μmol/L的蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89预处理细胞,可明显抑制100 μmol/L人参皂苷Rbl引起的CREB激活、酪氨酸酶及MITF蛋白表达的增加,与100 μmol/L人参皂苷Rb1作用72 h比较,P值均＜ 0.01,进而抑制人参皂苷Rb1引起的酪氨酸酶活性作用增强及黑素合成增加.[结论]人参皂苷Rb1可促进正常人黑素细胞的黑素合成和酪氨酸酶活性.PKA/CREB/MITF/酪氨酸酶信号通路可能参与了人参皂苷Rb1的促黑素生成机制.

白术及茯苓提取物对豚鼠皮肤酪氨酸酶 mRNA基因表达水平的影响

哺乳动物黑素细胞黑素生成受多种因素调控。紫外线、促黑素、 8－甲氧补骨脂素等对黑素生成具有刺激作用 [1,2]，而氢醌、熊果苷、甘草酸等对黑素生成则有抑制作用。我们发现中药茯苓、白术能抑制酪氨酸酶活性 [3],使黑素细胞和黑素颗粒减少 [4]。为了研究它们对酪氨酸酶 (TYR) mRNA基因表达的影响，我们应用逆转录聚合酶链反应 (RT－ PCR)技术，检测药物干预前后豚鼠皮肤中 TYR mRNA表达水平。 一、材料与方法 (一 )动物：健康雄性棕黄色豚鼠 10只 (南京军区医学实验动物中心提供，普通级 )，体重 332～ 425 g，平均 380.2 g。每只实验动物背部取 6个相离区域， UVB照射后外涂药物。阳性对照外用 3％氢醌。

使用体外重建皮肤模型研究真皮成纤维细胞对皮肤色素沉着的重要调节作用：皮肤光老化的影响

已有大量研究强调了人类角质形成细胞在皮肤色素沉着中所起的作用。例如，角质形成细胞通过释放大量的促色素沉着旁分泌生长因子，如αMSH、内皮素1（ET?1）、干细胞因子（SCF）和多种细胞因子，参与紫外线（UV）急性照射诱导的黑素合成（晒黑）。然而，越来越多的证据显示，真皮内成分在皮肤色素沉着调控中的作用不容忽视。20世纪90年代中期，证实细胞外基质（ECM）可调节黑素细胞的增殖、凋亡抑制和黑素生成活性。有报道证实，真皮成纤维细胞可通过分泌可溶性因子对色素沉着起调控作用。另外，对于构成性肤色，研究发现在掌跖，由成纤维细胞产生的Dikkopf?1（DKK?1）对黑素细胞的生长、活性以及对黑素小体转移均有抑制作用，且认为是这两处身体部位颜色较浅的原因。反之，深肤色皮肤内成纤维细胞分泌的神经调节蛋白1（NGR?1）的促色素沉着效应提示，该特定信号分子在决定高度色素沉着的皮肤类型中发挥作用。此外，在各种先天性色素沉着过度障碍中，如系统性硬皮病、皮肤纤维瘤、多发性神经纤维瘤的咖啡牛奶斑和泛发性进行性色素异常症，已知真皮黑素生成生长因子数量增加；这些因子包括SCF、肝细胞生长因子（HGF）或角质形成细胞生长因子（KGF）。表皮与细胞间质之间紧密的互动也可能在黑素细胞内稳态中发挥作用。近已证实，层粘连蛋白332可通过调节L酪氨酸摄取来促进黑素生成。生长因子/细胞因子调节环也存在于真皮细胞和表皮细胞之间，并参与色素沉着的调控。

~(14)C-2-硫脲嘧啶掺入显示:人毛囊色素单位可作为黑素生成调节剂的直接靶点

毛发色素由拉于毛乳头上部基底层中的一群黑素细胞合成,这些有活性的黑素细胞在黑素小体内生成黑素并将其转运至毛发纤维的前皮质角质形成细胞田(precortical kerationcyted).

细菌基序对黑素细胞及前列腺素E2的影响

目的:研究细菌基序(CpG-ODN)对黑素细胞形态、黑素生成及前列腺素E2(PGE2)的影响.方法:用CpG-ODN处理体外培养的B16黑素瘤细胞和melan-α黑素细胞,分别用MTT法、多巴氧化法、NaOH裂解法和ELISA法检测B16细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量以及上清中PGE2的水平,另外,观察CpG-ODN干预后melan-α细胞形态的变化.结果:干预24 h后,5 μg/ml CpG-ODN促进B16细胞增殖,10 μg/ml对细胞增殖的影响与空白对照组无差异,而15 μg/ml CpG-ODN则抑制细胞增殖.48 h后,不同浓度CpG-ODN组的细胞增殖率趋于稳定,与正常对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).10 μg/ml CpG-ODN提高酪氨酸酶活性和黑素生成,作用近似于α-MSH(P＞0.05).另外,此浓度CpG-ODN作用48 h后的细胞上清液中PGE2含量也有所升高,但与对照组差异无统计学意义(P＞0.05),推测为检测时间滞后所致.10 μg/ml CpG-ODN 作用于melan-α细胞24 h后,细胞树突数目增加,并有二级以致三级树突出现.结论:CpG-ODN作用于鼠黑素细胞的适宜浓度为10 μg/ml,此浓度对黑素细胞的作用有时间依赖性.该实验为CpG-ODN作用于正常人黑素细胞的研究奠定了基础.

欧前胡素抑制人表皮黑素细胞黑素生成

目的:评价欧前胡素对培养人表皮黑素细胞黑素生成的作用.方法:体外分离、纯化培养人表皮黑素细胞.随机分为空白组、熊果苷组和欧前胡素组(12.5 μM,25 μM和50 μM),作用48 h,观察黑素细胞形态,检测黑素细胞活力、酪氨酸酶活性和黑素含量,免疫荧光显微镜观察欧前胡素对黑素细胞酪氨酸酶的影响.结果:不同浓度(0、12.5 μM、25 μM和50 μM)欧前胡素作用于黑素细胞48 h后,细胞活力分别为100%、107.8%、87.5%和59.7%.低浓度欧前胡素不影响黑素细胞形态,高浓度(50 μM)对黑素细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量有抑制作用,呈剂量依赖性.欧前胡素对酪氨酸酶蛋白在细胞内定位未见明显影响,但酪氨酸酶荧光强度降低.结论:欧前胡素抑制体外培养人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性而降低黑素生成.

山奈素对melan-a黑素细胞株黑素生成的影响

目的:观察山奈素对melan-a黑素细胞株黑素生成的影响.方法:山奈素干预melan-a后,观察对黑素细胞增殖率的影响并测定各组酪氨酸酶活性大小及黑素量.结果:山奈素表现出轻度的促melan-a增殖作用(P＜0.01),当山奈素浓度在0.001 mmol/L至0.1 mmol/L之间时,细胞增殖率和浓度呈指数关系,而浓度高于0.1 mmol/L后进入平台期.山奈素在1 mmol/L浓度时,促黑素合成的作用与同浓度8-MOP类似(P＞0.05).Fontana-Masson染色后与空白对照比较,经山奈素干预的细胞内,黑素颗粒染成黑色,融合成片,明显多于空白对照.结论:山奈素能够激活melan-a黑素细胞酪氨酸酶的活性,并具有促进黑素细胞增殖、使黑素合成量增加的作用.

中药赤菟酊治疗白癜风临床疗效观察

酪氨酸酶(TYR)不仅是黑素细胞(MC)黑素生成的主要限速酶,还是黑素细胞分化成熟的一个特征性标志.黑素细胞破坏是白癜风发生皮肤脱色斑的主要原因.白癜风皮损复色有赖于白斑区残存表皮黑素细胞黑素生成能力增强以及毛囊外毛根鞘无功能黑素细胞活化.使用上调酪氨酸酶活性加速黑素生成的药物可促进黑素细胞分裂、增殖,提高白癜风的治疗效果.为了寻找治疗白癜风的有效药物和方法,我们选择上调酪氨酸酶活性的中药赤芍、川芎、菟丝子、刺蒺藜、补骨脂等组成中药复方,采用其乙醇提取液(赤菟酊)外用治疗白癜风并与对照组外用0.1%8-MOP酊比较,取得满意疗效,报道如下.