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不同生长时期人参中水溶性蛋白含量比较
目的:针对不同生长时期人参中水溶性蛋白的含量进行比较.方法:以5年生人参为供试材料,应用Bradford蛋白质定量试剂盒测定水溶性蛋白含量,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法得到人参水溶性蛋白的电泳胶片,并通过凝胶成像分析软件和Origin 7.5软件生成指纹图谱,导出重要技术参数,分析比较不同生长时期人参中水溶性蛋白的分布及含量差异.结果:不同生长时期的人参样品均显示12条水溶性蛋白谱带,且在人参果后参根生长中期直至枯萎期,水溶性蛋白含量达到高.结论:人参水溶性蛋白的含量在不同生长时期存在较大差异,与人参生长的形态建成密切相关.
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蝎皮蛋白质组分的提取分离及体外活性成分筛选
目的:为了证明蝎皮对免疫功能的影响并探讨蝎皮中含有的活性成分,通过提取分离蝎皮中的水溶蛋白质和角蛋白质组分,经过体外药理活性筛选,观察其对细胞或体液免疫系统的影响,以期获得具有生物活性的蛋白质组分.方法:采用水提与盐析法获得水溶性总蛋白(ST1),还原法获得总角蛋白(ST2),通过Sephadex G-50凝胶色谱对水溶总蛋白和总角蛋白进行分离,并对获得的各种蛋白组分进行了体外药理筛选.结果:发现蝎皮的蛋白质组分在体外药理实验中显示对T/B淋巴细胞转化具有显著促进作用,但对NK活性无明显作用.结论:蝎皮蛋白提取组分具有一定的免疫调节生物活性,研究结果对蛋白质药物开发提供了基础数据.
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C型凝集素在结核病发病机制中的作用
C型凝集素(G-type lectina)是一类非酶、非抗体蛋白质,其活性依赖于Ca~(2+),以跨膜蛋白和水溶性蛋白两种形式存在.C型凝集素的共同结构特征是具有1个或多个糖识别域,能选择性识别并结合病原微生物的糖结构域.C型凝集素根据糖识别域1级结构的不同可分为蛋白聚糖、I型跨膜受体、Ⅱ型跨膜受体、胶原凝集素、选凝素及自然杀伤细胞受体6个家族,其中胶原凝集素、I型跨膜受体和Ⅱ型跨膜受体与结核病的发病机制密切相关.
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CXCL12(SDF-1)/CXCR4信号传导通路及其肿瘤相关性研究进展
细胞因子是一组分子量为8～30 kD的小分子信号蛋白,多为水溶性蛋白和糖蛋白,在免疫系统中起核心作用,参与免疫和炎症反应[1].趋化因子是细胞因子中的一个亚家族,主要参与趋化作用.趋化因子的氨基酸序列中大多有4个保守的半胱氨酸(Cys),根据其N端Cys的个数和前两个Cys之间插入其他氨基酸的个数,可分为C(N端只有一个Cys)、CC(不插入其他氨基酸残基)、CXC(插入1个其他氨基酸残基)和CX3C(插入3个其他氨基酸残基)四类[2].而根据功能又可分为炎症型和自稳型两类.炎症型在组织炎症和损伤时控制白细胞的募集,而自稳型则维持基本"持家(housekeeping)"功能,如在血细胞生成过程中"导航"白细胞至淋巴样器官、骨髓及胸腺.
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大鼠膈肌水溶性蛋白组的研究
本研究应用蛋白组的核心技术——高分辨率二维电泳对同属骨骼肌的膈肌和趾长伸肌水溶性蛋白组的二维电泳图谱进行了比较，并对两者在老化过程与年龄相关的水溶性蛋白进行了比较。我们发现：膈肌和趾长伸肌水溶性蛋白的二维图谱极为相似，大部分蛋白都能较好地重叠。我们未能找到持续而稳定且特异于膈肌的水溶性蛋白。同时我们发现了三个与年龄相关蛋白（S1，S2和S3），随增龄，蛋白S1只在24月龄趾长伸肌存在，而在8月龄和24月龄的膈肌中却不能被检测到。S2在8月龄的膈肌和趾长伸肌存在，而在24月龄的膈肌和趾长伸肌中不能被检测到。S3在8月龄的膈肌和趾长伸肌中不能被检测，而在24月龄的膈肌和趾长伸肌中能被检测到。本研究提示：膈肌和趾长伸肌水溶性蛋白在其成年时表达基本一致。老化而造成水溶性蛋白表达的变化在膈肌和趾长伸肌也较为相似。
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不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组成的差异分析
目的:探讨分析不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组成的差异.方法:根据水蛭不同的炮制方法,随机分为传统组和低温组,传统组采用传统炮制的方法,低温组使用低温炮制的方法,比较两组的水溶性蛋白组成的差异.结果:传统组的蛋白质大分子量为44.7KD附近,低温组为44.7KD,两组在31KD左右蛋白质的含量分别为54.5％和88.9％,两组的蛋白浓度分别为1.85mg/g和2.46mg/g,两组具均有显著差异(P＜0.05).结论:炮制工艺不同对自身的水溶性蛋白组成的差异具有较大的影响,值得深入研究和讨论.
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西洋参水溶性蛋白的提取工艺研究
目的:优化西洋参水溶性蛋白的佳提取工艺.方法:采用单因素考察和L9(34)正交试验,以西洋参水溶性蛋白的提取率为考察指标,优化优的提取工艺.结果:采用pH值为7的缓冲溶液,料液比(w/v) 1∶15,浸提两次,每次12h为西洋参水溶性蛋白的佳提取工艺.结论:优化得到的提取工艺合理,重复性良好,可为西洋参水溶性蛋白提取工艺的确定提供实验依据.
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SDS-PAGE凝胶电泳法对不同种鹿茸蛋白质差异化研究
目的:利用电泳方法研究市场上药典规定品种的鹿茸饮片及其混淆品中蛋白质的差异,为鹿茸的免疫鉴定技术研究提供研究依据.方法:采用蛋白溶解液法提取各鹿茸蛋白,以牛血清蛋白为对照,利用Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白的浓度,利用SDS-PAGE凝胶电泳法分析花鹿茸、马鹿、新西兰赤鹿及驯鹿的蛋白差异.结果:用7.5％分离胶系统分离花鹿茸、新西兰马鹿、马鹿及驯鹿的水溶性蛋白,四者蛋白条带有差异.结论:利用SDS-PAGE凝胶电泳法考察不同品种鹿茸的蛋白差异,为不同品种鹿茸的定性研究提供依据和研究基础.
关键词： 鹿茸 水溶性蛋白 Bradford法 SDS-PAGE凝胶电泳法 -
天然乳胶中过敏蛋白质的酶催化交联研究
天然乳胶中普遍存在引起人体过敏反应的水溶性蛋白质.用谷氨酰胺转氨酶催化天然乳胶中的蛋白质使其发生不同结构层次上的改变,致使水溶性蛋白质含量降低,在提高乳胶强度等性能的同时解决蛋白质过敏问题.通过响应面试验设计获得了MTGase催化天然乳胶蛋白交联的优化条件.
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不同产地人参中水溶性蛋白质含量的差异性研究
目的 针对长白山区15个不同产地人参中水溶性蛋白成分的含量进行比较研究,以鉴别人参质量的地域性差别.方法 采用SDS-PAGE获得人参中水溶性蛋白的电泳胶片,通过凝胶成像软件将胶片转化成浓度-比移值图谱,累计叠加不同产地的谱图,比较分析不同条带的浓度变化情况.结果 不同产地人参中水溶性蛋白的SDS-PAGE电泳谱带条数无明显差别,主要谱带为13条,但因浓度的不同而引起的谱带的指纹信息差异较大.结论 人参水溶性蛋白的含量在不同产地间存在差异,与地域性密切相关.
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肝硬化患者与载脂蛋白AI和载脂蛋白B100的相关性
载脂蛋白是一类结合脂类的水溶性蛋白,其检测多用于心血管疾病的预防、诊断、疗效观察和病因学研究,而对肝实质病变患者载脂蛋白变化的研究还较少.为此,我们对52例肝硬化患者的载脂蛋白A Ⅰ(ApoA Ⅰ)和载脂蛋白B100(ApoB100>)水平进行了检测,并与52例正常人作对照观察,以期了解它们之间存在的关系.
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白内障晶状体核蛋白质组学的初步研究
目的 研究年龄相关性白内障晶状体核不同组分晶状体蛋白的组成.方法 取12例年龄相关性白内障晶状体软核,提取晶状体核中的水溶性蛋白及尿溶性蛋白进行二维电泳及UPD-蛋白质染料染色试剂盒对凝胶染色后,用Image Master 2D Platinum 6.0软件对获得的蛋白图谱进行分析,再利用MALDI-TOF MS分析及数据库搜索对差异表达的蛋白质点进行鉴定.结果 二维电泳结果显示,年龄相关性白内障晶状体核中水溶性蛋白和尿溶性蛋白大部分为相对分子质量14 400～97 400,pI 5～9.高丰度蛋白质斑点相对分子质量分布在20 000～31 000,pI 6～8区域内.年龄相关性白内障晶状体核水溶性蛋白二维电泳图识别出31个蛋白质斑点,尿溶性蛋白二维电泳图识别出26个蛋白质斑点,相差2倍以上表达的差异点有14个.对选取的蛋白质斑点进行MALDI-TOF MS分析,经数据库检索后鉴定出6种蛋白质,其中3种蛋白质表达下调(γS-晶状体蛋白、βA3-晶状体蛋白、βA4-晶状体蛋白),1种蛋白质表达上调(βB1-晶状体蛋白),2种蛋白质表达缺失(截取的人βB1-晶状体蛋白A链、截取的人γD-晶状体蛋白X链).结论 年龄相关性白内障晶状体核不同组分晶状体蛋白中主要由β-晶状体蛋白组成,与尿溶性晶状体蛋白相比,水溶性蛋白鉴定出γD-晶状体蛋白,而βA4-晶状体蛋白阙如.
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人参水溶性蛋白的提取及SOD活性测定
目的 提取人参水溶性蛋白,测定其蛋白含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力.方法 采用缓冲溶液抽提及硫酸铵分级沉淀法制备人参水溶性总蛋白,采用Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量、SDS- PAGE法进行蛋白鉴定、邻苯三酚自氧化法进行SOD活力测定,并采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行活力显示.结果 通过Bradford蛋白含量试剂盒测定蛋白质含量达80％,蛋白收率达1％,SDS-PAGE电泳检测显示人参中主要含有8种蛋白亚基.邻苯三酚自氧化法测得SOD活力达16.048 U/mg蛋白,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条活性谱带.结论 人参中具有较丰富的水溶性蛋白,且这些水溶性蛋白具有较高的SOD活性.
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园参、野山参、西洋参中水溶性蛋白成分的比较研究
目的 对园参、野山参及西洋参中水溶性蛋白成分进行比较研究,为人参药材的鉴别和质量评价提供依据.方法 采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)及凝胶电泳图像分析软件,比较三者在蛋白分布及含量上的差异.结果 园参、野山参、西洋参的SDS-PAGE图谱及凝胶分析图谱存在很大差异.结论 可以通过SDS-PAGE法对园参、野山参、西洋参进行鉴别、质量评价及药效关系探究.
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基于SDS-PAGE技术的不同水蛭炮制品中水溶性蛋白的差异性研究
目的 考察不同水蛭炮制品中水溶性蛋白的差异性.方法 制备水蛭样品;采用考马斯亮蓝法测定水溶性蛋白质含量;SDS-PAGE法比较各样品中的蛋白的种类和丰度差异性;以生物检定技术为基础,检查水蛭及其炮制品的抗凝血酶活性.结果 所用水蛭及其炮制品的抗凝血酶活性有明显差异;SDS-PAGE结果表明水蛭及其炮制品的蛋白种类、含量皆有明显差异.结论 不同炮制方法中,动物药水蛭水溶性蛋白的含量差异明显,传统的高温炮制方法使水蛭中蛋白质发生了降解,其高温炮制的科学内涵有待深入的研究.
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鹿角托盘水溶性蛋白的提取分离与鉴定
目的:对鹿角托盘中的水溶性蛋白进行提取分离和鉴定.方法:采用中性缓冲液浸提和中空纤维膜过滤技术提取鹿角托盘水溶性总蛋白.经采用SDS-PAGE电泳、BCA蛋白浓度测定法,基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱技术及数据库(NCBI)检索进行蛋白分析鉴定.结果:鹿角托盘水溶性总蛋白的收率为8%,蛋白纯度为86%.在水溶性总蛋白中鉴定出5种蛋白,分别为:β-3亚型血红蛋白、抗茵肤1、肽聚糖识别蛋白、β-c亚型血红蛋白、Pre-pm血清白蛋白.结论:鹿角托盘中的水溶性蛋白与药材临床疗效密切相关.
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新风胶囊中水溶性蛋白的SDS-PAGE分析方法研究
目的:建立新风胶囊中水溶性蛋白SDS-PAGE的分析方法.方法:采用SDS-PAGE电泳方法,根据分子量大小不同,分离新风胶囊中水溶性蛋白;电泳条件:1.0 mm ×25齿试样格,浓缩胶浓度为4.5％,分离胶浓度为12.5％,分离电压100V,上样量5μL,染色2h,脱色4h.结果:新风胶囊中水溶性蛋白成分含量不均,其中主带有2条,分子量为16.38、17.07 kDa左右.结论:SDS-PAGE电泳方法可以用于新风胶囊中水溶性蛋白成分测定,为建立该制剂电泳特征图谱提供依据.
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水溶性蛋白盐析的一维结晶
目的:研究水溶性蛋白质盐析结晶的形态,揭示水溶性蛋白盐析一维结晶的物理机理.方法:选择白蛋白标准液,人血清,人血红蛋白,乙肝丙种球蛋白,卵清蛋白等水溶性蛋白质进行二维盐析,用显微摄影技术得到显微摄影图片,再对结晶的显微图像进行分析.结果:水溶性蛋白质盐析结晶的形态一般情况下具有无标度区间,具有屏蔽效应,具有典型的分形特征;但是,在蛋白质浓度较低,并直接滴在载玻片时,也观察到非分形结构的一维结晶.结论:水溶性蛋白涂片盐析结晶显微图片的分析发现,水溶性蛋白涂片盐析结晶一般形成分形结晶,但在特定情况下可形成一维结晶,通过对水溶性蛋白盐析的一维结晶进行理论分析,用电偶极子模型从理论上解释了蛋白质一维结晶形成机理.
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水溶性蛋白盐析结晶的动力学过程分析
目的:通过水溶性蛋白质即卵清蛋白、白蛋白标准液、人血清蛋白、人血红蛋白、乙肝丙种球蛋白盐析过程的观察和盐析涂片的分析,揭示水溶性蛋白盐析结晶的动力学过程.方法:对五种水溶性蛋白质溶液(卵清蛋白、白蛋白标准液、人血清蛋白、人血红蛋白、乙肝丙种球蛋白)盐析过程进行动态观察,拍摄蛋白质结晶图片,并用二维图片分维测量软件Fractalfox测定不同蛋白质结晶图片的无标度区间、盒维数值、表面分维值、密度相关函数法分维值,分析水溶性蛋白结晶的分形性质.结果:得到蛋白质盐析涂片结晶普遍具有分形性质,结晶的无标度区间为5.00 μm ～125 μm,盒维数值为1.69,表面分维值为2.69,密度相关函数法分维值为1.81.结论:通过结晶过程观察和结晶图片测量分析发现,在无标度区间范围内,所有水溶性蛋白盐析涂片结晶都具有分形性质,产生这一性质的原因是在水溶性环境中蛋白质分子的布朗运动和蛋白质之间的相互作用.水溶性蛋白盐析涂片结晶具有分形性质是蛋白质一个新的物理性质.
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补体在外科感染中的作用
补体系统由大约30种水溶性蛋白和膜结合蛋白组成.通过不同的补体激活途径(经典途径、旁路途径、凝集素途径和新近发现的第4途径),补体蛋白被相继活化,形成一系列生物效应分子,如C3a、C5a,C5b-9等,在血浆或病原体中发挥免疫作用[1].
