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补体C3a、C5a在系统性红斑狼疮患者中的表达及与预后的相关性研究
目的 探讨补体C3a、C5a在系统性红斑狼疮患者中的表达及与患者预后的相关性.方法 选择2015年12月—2016年12月入院治疗的系统性红斑狼疮患者39例,设为观察组,患者均采用波尼松联合环磷酰胺治疗;选择同期入院治疗的健康体检者39名,设为对照组.采用酶联免疫吸附试验测定两组补体C3a、C5a水平;采用SPSS Pearson相关性分析软件对补体C3a、C5a表达水平与患者治疗预后进行相关性分析.结果 观察组系统性红斑狼疮患者补体C3a(864.62±16.77)p/(μg/L)、C5a水平(9.69±2.15)p/(μg/L),均高于对照组[补体C3a(700.04±12.10)p/(μg/L)、C5a水平(7.45±2.11)p/(μg/L)](t=15.893,18.242,P<0.05);39例系统性红斑狼疮患者均顺利完成治疗,治疗后32例患者治疗预后良好,7例患者治疗预后相对较差.预后良好患者补体C3a、C5a水平,均低于预后较差者(t=12.091,10.774,P<0.05);SPSS Pearson相关性分析软件结果表明:补体C3a、C5a表达水平与患者治疗预后呈正相关性(r=0.391,0.637,P<0.05).结论 补体C3a、C5a在系统性红斑狼疮患者中呈高表达,且与患者治疗预后呈正相关性.
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细菌伴侣蛋白Skp可通过C5a受体引起白细胞的趋化运动
目的证明大肠杆菌伴侣蛋白Skp可以诱导单核细胞和分叶核白细胞(PMN)产生趋化运动.方法分离提纯Skp,并通过分子质量测定和氨基端的氨基酸测序予以证实.使用S19核糖体蛋白和C5a的合成模拟肽链,进行受体拈抗试验.使用Skp的合成模拟肽链进行体外趋化实验分析其对白细胞的趋化作用.结果Skp对单核细胞和PMN具有趋化活性.其作用于C5a受体,也通过两步结合机制使受体活化.并推测Skp分子结构中-Gln83-Asp84-Arg85-及-Ser58-Asp59-Arg60-序列为可能的第二受体结合位点.结论C5a受体作为白细胞的趋化因子受体迄今为止被证明是两个内源性化学介质:C5a和S19核糖蛋白二聚体的受体.在此基础上,我们首次证明了大肠杆菌的伴侣蛋白Skp是一种来源于大肠杆菌的趋化因子.
关键词： C5a受体 C5a S19核糖蛋白二聚体 白细胞趋化运动 Skp -
血浆补体C5a预示创伤失血性休克大鼠肝脏损害严重性
目的 探讨血浆补体C5a和C5b-9是否能够预示大鼠创伤失血性休克时肝脏损害的严重程度.方法 50只雄性健康Wistar大鼠被随机(随机数字法)分为正常组、模型1,3,6,24 h组.用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测血浆中总补体活性CH50、补体活性片断C5a和膜攻击复合物C5b9,速率法检测血浆中谷草转氨酶.石蜡切片观察肝脏病理损害.结果 在模型1 h时,CH50显著上升并且达到高值,3 h开始下降,24 h时达到低点,1 h与3,6,24 h时点相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);在正常组血中可以检测到少量的C5b-9,在模型1 h时C5b-9显著上升达到峰值,与正常组、模型3,6,24 h相比较差异均具有统计学意义(P<0.05),3 h时C5b-9开始下降,模型24 h时降至低;模型组3,6,24 h时点血浆中C5a开始上升,与正常组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),模型24 h组达到峰值;谷草转氨酶在模型1 h显著上升,在24 h达到峰值,24 h组与其余模型组及正常组相比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 创伤失m性休克时存在补体的大量活化,早期CH50、C5b-9上升;后期C5a上升.可以认为C5b-9是肝脏损害的启动因素.早期低水平的C5a可能是机体的一种自我保护措施,后期高水平的C5a作为自身不能代偿后的一种表现,作为后期疾病严重程度的一项预测指标.
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2型糖尿病患者尿白蛋白排泄率与补体C5a的关系
目的 探讨2型糖尿病患者血、尿补体活化片段C5a含量的变化与糖尿病肾病的关系.方法 选2型糖尿病患者39例,健康体检者21名作为对照,检测血、尿C5a浓度以及血高敏C反应蛋白,测定尿白蛋白排泄率以及血糖控制情况,分析其关系.结果 与对照组比较,2型糖尿病患者尿C5a浓度升高(11.4±21.1 vs 76.3±144.4,P＜0.05),血C5a无明显变化,尿C5a与尿白蛋白排泄率正相关(r＝0.378,P＜0.05),糖尿病病程、尿C5a是尿白蛋白排泄率的独立预测因素.结论 补体活化可能与糖尿病肾病的发生有关.
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补体5a与急性肺损伤关系研究进展
急性肺损伤（ ALI）是多种原因诱发的肺部过度炎症反应，其发病率和死亡率均较高。由于其发病机制复杂且并未完全阐明，至今仍无特效救治药物。许多研究表明补体活性成分补体5a（ C5a）及其受体的激活在ALI的发生过程中是必需的，以C5a及其受体作为靶点的药物研发有望为ALI的治疗带来新的希望。该文对C5a参与ALI的实验证据和可能的作用机制进行了综述。
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补体C5a受体拮抗剂体外筛选平台的建立
目的建立稳定的补体C5a受体(C5aR)拮抗剂筛选平台.方法采集人外周静脉抗凝血,与不同浓度C5a、脂多糖及PMX-53孵育10～30min.通过流式细胞术检测中性粒细胞表面CD11b的表达,溶菌酶检测试剂盒观察中性粒细胞分泌溶菌酶的能力变化,罗丹明-123检测中性粒细胞呼吸爆发的变化,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-8的表达变化,Western Blotting检测胞外信号调节激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKB或AKT)含量及其磷酸化水平的变化,考察补体C5a刺激及使用阳性药物PMX-53后对各生化指标的影响.结果 C5a刺激人外周血可增强中性粒细胞CD11b的表达,促进溶菌酶释放和IL-8的分泌,激发呼吸爆发,上调ERK、AKT的含量和磷酸化水平,阳性药物PMX-53则能显著抑制C5a的上述生物学效应.结论成功建立C5aR拮抗剂人全血体外筛选平台,为C5aR拮抗剂筛选及功能研究奠定了基础.
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补体C5a在百草枯诱导急性肺损伤中的作用和机制
百草枯急性中毒受损严重的是肺组织，而急性肺损伤是百草枯中毒致死的主要原因。补体活化产物C5a通过诱导炎症细胞如中性粒细胞和巨噬细胞等在肺部聚集、活化，进而产生过量的氧自由基和细胞因子等介导百草枯中毒后所导致的急性肺损伤。本文对补体C5a在百草枯诱导急性肺损伤中的作用和机制予以详细的综述。
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C5a水平对中性粒细胞介导的重症获得性肺炎患者急性肺损伤预后的影响
目的 探讨C5a对中性粒细胞介导的重症获得性肺炎患者急性肺损伤改善程度的影响.方法 2016年5月至2017年5月该院收治的中性粒细胞介导的重症获得性肺炎患者95例,根据C5a水平,分为低分组51例与高分组44例.两组均采用联合应用头孢哌酮及左氧氟沙星治疗,比两组肺损伤改善程度.结果 低分组呼气峰流速、一秒用力呼气容积、用力肺活量低于高分组,肿瘤坏死因子-α、细胞间黏附分子-1、白介素-6及白介素-8低于高分组.结论 C5a在中性粒细胞介导的重症获得性肺炎发生发展过程中关系到患者的肺损伤,是评估患者预后的重要指标.
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C5a对内皮细胞表达血栓调节蛋白的影响
目的 探讨补体C5a对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血栓调节蛋白(TM)表达的影响.方法 体外培养HUVECs,以终浓度200 μg/L重组人C5a刺激HUVECs 8、12、16、20 h以及以终浓度100、200、300 μg/L的C5a刺激HUVECs 12 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分别检测TM的mRNA及蛋白表达变化;观察C5a对其表达TM的时-效和量-效关系.结果 C5a抑制了HUVECs在TM的mRNA和细胞膜表面蛋白水平表达.同时,C5a对TM表达的抑制作用存在时-效关系[8、12、16、20 h时蛋白为(93.11±1.57)×10-2、(71.05±3.39)×10-2、(65.48±4.28)×10-2、(62.69±4.03)×10-2,mRNA为(301.71±80.40)×10-6、(38.29±20.24)×10-6、(8.82±2.66)×10-6、(7.05±0.80)×10-6],且均于12 h后降低程度明显减缓(P均<0.05);并存在量-效关系[C5a 100、200、300 mg/L时蛋白为(113.25±3.97)×10-2、(80.18±2.56)×10-2、(73.22±4.36)×10-2,mRNA为(401.77±20.46)×10-6、(31.12±3.51)×10-6、(18.19±1.46)×10-6],TM蛋白在C5a 300 μg/L、mRNA在C5a 200 μg/L时刺激12 h降低程度明显减缓(P均<0.05).结论 C5a通过抑制TM的结构基因表达,进而减弱TM的蛋白翻译,从而参与了脓毒症时凝血亢进、炎症损害的病理生理过程.
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补体成分在支气管哮喘气道表达及对结构细胞的作用
目的 探求补体成分过敏毒素C3a和C5a在支气管哮喘(简称哮喘)气道表达及对结构细胞的作用.方法 利用免疫组织化学的方法对补体成分C3、C3d、C5b-9、C3aR和C5aR在健康和哮喘气道黏膜的表达/沉积进行比较.结果 发现在哮喘患者气道黏膜标本中,上述成分在气道黏膜层、黏膜下层、平滑肌及腺体的表达/沉积明显增加.体外实验表明补体C3a和C5a均可刺激气道组织结构细胞(上皮、内皮、平滑肌和成纤维细胞)的增殖.结论 结果提示补体系统活化及过敏毒素C3a和C5a可能参与哮喘发病过程.
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C5a反义肽对肺血管内皮细胞与中性粒细胞粘附的影响
目的:探讨补体C5a反义肽在C5a过敏毒素介导的肺血管内皮细胞与中性粒细胞粘附中的阻断作用.方法:采用流式细胞术,检测C5a与其反义肽相互作用后再刺激人肺血管内皮细胞(PVEC),对细胞表面粘附分子P选择素(P-Selectin)表达的影响;同时通过测定粘附于血管内皮细胞表面的PMN中髓过氧化物酶(MPO)活性,间接反映血管内皮细胞表面粘附的PMN数量的变化.结果:发现反义肽R4可以剂量依赖关系抑制C5a介导的PVEC上粘附分子P-Selectin的表达,当R4浓度为5 000 ng/ml时,可使P-Selectin的表达量下降20%左右,进一步增加R4的浓度,P-Selectin表达量无显著性改变;另外,反义肽R4对PVEC与PMN的粘附也有明显抑制作用,表现为PVEC上粘附的PMN中MPO活性的降低,当R4的浓度增加到5 000 ng/ml,MPO的活性可降低近40%左右.结论:C5a反义肽对C5a过敏毒素的生物学活性具有一定的拮抗作用.
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C5a对中性粒细胞和肾小球内皮细胞粘附行为的影响
目的:为揭示C5a和C5aR对肾小球内皮细胞(GVEC)-中性粒细胞(PMN)粘附的影响及其影响程度.方法:采用免疫组化胶体金银染色检测C5aR在人GVEC上的表达,并用微管吸吮技术定量测定了经C5a诱导后,GVEC和PMN细胞对间的粘附力,同时通过测定粘附的PMN中髓过氧化物酶(MPO)含量变化,观察不同剂量C5a对粘附的影响.结果:发现GVEC上分布C5aR,经2 000 ng/ml C5a刺激,GVEC-PMN间粘附力(Fa)达0.014 dyn,相对粘附应力(S1)为1 720.0 dyn/cm2,与对照组Fa(0.001 dyn)和S1(339.9 dyn/cm2)均有非常显著差异(P＜0.01).MPO测定结果表明GVEC-PMN粘附的发生依赖于C5a剂量.结论:从生物力学角度直接定量阐明了C5a-C5aR对GVEC-PMN粘附行为的重要影响.
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利用光学生物传感技术筛选C5a拮抗多肽
目的:筛选人过敏毒素C5a的拮抗反义多肽,并进一步研究其分子间相互作用的动力学特性.方法:借助于生物分子相互作用分析技术(BIA),筛选可与C5a特异性结合的反义肽,并对其分子间的相互作用进行动力学分析.结果:在设计合成的4条反义肽中,筛选出一条反义多肽(R4),其与C5a分子间相互作用的解离平衡常数值(KD)o6.62×10-6mol/L;与其对应的功能活性区片段L2间的KD值为7.02×10-7.结论:光学生物传感器是一种研究生物大分子间相互作用的理想工具,可用于弱亲和力分子间结合与解离的动力学分析及拮抗效应多肽的筛选.
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C3a、C5a受体缺失减轻IgA肾病肾损伤
目的：探讨C3a、C5a及其受体在IgA肾病发病中作用及潜在机制。方法：6～8周清洁级雌性BALB／c小鼠28只，阴性对照组、野生型组、C3 a受体敲除组、C5 a受体敲除组各7只，采用有活性的仙台病毒滴鼻经鼻黏膜感染联合尾静脉注射建立小鼠IgA肾病模型，测定24 h尿蛋白量、血清尿素氮、血清肌酐；留取肾组织标本，通过直接免疫荧光法检测肾组织IgA、C3沉积；采用PAS染色光镜下观察肾组织病理改变；采用RT-qPCR法检测肾组织中TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 mRNA相对表达量。结果：15周后野生型组、C3a受体敲除组、C5a受体敲除组（实验组）24 h尿蛋白量高于阴性对照组，野生型组高于C3 a受体敲除组及C5 a受体敲除组，差异具有统计学意义；血清尿素氮及血清肌酐差异无统计学意义；实验组小鼠可见肾脏组织病理改变，且野生型组重于C3 a受体敲除组及C5 a受体敲除组，阴性对照组肾脏组织病理则无明显异常。实验组小鼠肾组织TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 mRNA相对表达量高于阴性对照组，同时野生型组高于C5a受体敲除组及C3a受体敲除组，另外IL-1β、IL-6、MCP-1的mRNA相对表达量C5a受体敲除组高于C3a受体敲除组。结论：C3a及C5a受体缺失可减轻IgA肾病肾损伤，并且C3a受体缺失作用更加显著。
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C5a及C5aR拮抗剂在阿尔茨海默病中的研究进展
阿尔茨海默病(AD)是一类常见的神经变性疾病[1],随着年龄的增长其发病率也显著上升.AD典型的神经病理学标志包括神经元和突触的损伤,细胞外β-淀粉样蛋白沉淀(Aβ)大量聚集形成的老年斑(SP)[2,3],细胞内神经纤维缠结(NFTs),神经胶质增生[4],和某些补体蛋白以及这些蛋白聚合物的上调[5],以及一系列的炎症反应.其临床表现为进行性的认知障碍,主要的是记忆力的减退,以及行为和个性的改变,并随着病理进程逐渐丧失日常生活自理能力,以至在疾病晚期阶段的病人可能卧床不起,大小便失禁,终导致死亡[6].AD正严重威胁着全世界范围内超过2千万老年人的生命[7].
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透脓散对浅部化脓性炎症趋化因子补体5a、白三烯4的影响
目的 研究透脓散对浅部化脓性炎症血中趋化因子补体5a(C5a)、白三烯4(LTB4)及局部愈合情况的影响,探讨透脓散扶正托毒的作用机理.方法 将Wistar大鼠分为病模对照组,透脓散高、中、低剂量组、头孢拉定组,采用金黄色葡萄球菌局部注射致大鼠背部浅部化脓性炎症模型,分别给予相应药物灌胃,观察脓肿大小及愈合情况,于3、6、9 d取血检测C5a、LTB4.结果 透脓散可使脓肿缩小,促进脓肿愈合;透脓散6 d小组能降低血C5a水平,9 d小组升高血C5a水平,且与头孢拉定组比较差异显著;透脓散3 d小组明显降低血LTB4水平,6 d小组与9 d小组可升高血LTB4水平,且与头孢拉定组比较差异显著.结论 透脓散能使浅部化脓性炎症缩小局限,加快愈合,并且可以影响血C5a、LTB4水平,具有双向调节作用.
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增加衰变加速因子可改善实验性自身免疫性脑脊髓膜炎
衰变加速因子(Decay accelerating factor,DAF)作为一种位于细胞膜表面的补体调节成分,不仪可阻止C3和C5转化酶的装配,并且可通过诱导催化亚单位C2a的快速解离而使已形成的C3、C5转化酶失去稳定性,进而抑制C3a和C5a(前炎性成分)的产生.而C3a和C58在体内不仅可以介导炎症反应,而且可以通过与位于抗原提呈细胞和(或)T细胞表面的受体相结合而促进Th1和Th17的产生和存活.
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髓过氧化物酶-抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎活动期血清标志物的研究
目的：抗中性粒细胞胞浆抗体（ antineutrophil cytoplasmic antibodies， ANCA）相关性血管炎（ ANCA-associated vasculitis， AAV）是一组累及全身小血管的致死性疾病，髓过氧化物酶（ myeloperoxidase， MPO）为ANCA识别的主要抗原之一。文中通过检测活动期MPO-AAV患者外周血中MPO、活化补体C5a片段及铜蓝蛋白（ceruloplasmin， Cp）水平的变化，进一步探索上述血清标志物的临床意义。方法选取活动期MPO-AAV患者132例为病例组，健康志愿者30例为对照组。通过间接免疫荧光法及ELISA法分别检测病例组的p-ANCA及MPO-ANCA；ELISA法检测并比较2组的MPO、C5a及Cp水平；根据伯明翰血管炎活动性评分（birmingham vasculitis activity score， BVAS）量表，记录患者的BVAS，分析病例组中MPO、C5a、Cp及MPO-ANCA间的相关性，并探讨上述各指标与BVAS的关系。结果外周血MPO、C5a、Cp水平在病例组中分别为400．7（333．5～506．1）IU／L、336．7（277．6～403．5）ng／mL、481．1（387．9～535．9）ng／mL，在对照组中分别为286．9（225．5～329．1）IU／L、236．8（204．2～304．1）ng／mL、326．9（177．1～405．5）ng／mL，病例组上述各指标均明显高于对照组，差异均具有统计学意义（P＜0．05）。病例组MPO与Cp呈显著正相关（ r＝0．663，P＜0．001）；C5a与MPO、Cp的相关系数分别为0．792、0．637，均呈显著正相关（ P＜0．001）；MPO-ANCA与总BVAS、肾BVAS及肺BVAS的相关系数分别为0．247、0．339、0．191，均呈显著正相关（ P＜0．05）；p-ANCA与肾BVAS呈正相关（ r＝0．208，P＜0．05）；C5a与肾BVAS呈负相关（ r＝－0．207，P＜0．05）。结论活动期MPO-AAV患者周围血中MPO、Cp及C5a水平均明显升高，相互之间及与ANCA之间复杂的相互作用可能共同影响MPO-AVV的临床损害，其中，MPO-ANCA存在较明显影响，C5a对肾损害影响较明显。
关键词： 抗中性粒细胞胞质抗体 髓过氧化物酶 C5a 铜蓝蛋白 相关性血管炎 -
补体系统参与抗中性粒细胞胞浆抗体相关性血管炎发病机制研究进展
抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophil cyto-plasmic antibodies，ANCA）相关性血管炎（associated vasculitides，AAV）是由一组自身免疫性疾病组成，包括肉芽肿性多血管炎（granulomatosis with polyangii-tis，GPA）、显微镜下型多血管炎（microscopic polyangiitis，MPA）和嗜酸细胞性肉芽肿性多血管炎（eosinophilic granulomatosis with polyangiitis，EGPA，之前被称为Churg-Strauss综合征）[1]。我国AAV以MPA为主，约占80%，GPA约占20%，而EGPA则相对少见[2]。这类疾病病理表现以小血管壁的炎症和纤维素样坏死为特征，可累及多个系统器官，肾脏常受累，是以少/无免疫沉积为组织病理学特点的坏死性新月体肾小球肾炎（necrotizing crescentic glo-merulonephritis，NCGN），临床以血尿、蛋白尿和肾功能受损为主要表现，进展迅速，预后凶险。有研究[3]表明，20%~40%的 AAV 患者发展成为终末期肾病（end-stage renal disease，ESRD）。ANCA是其特异性血清学标志物，ANCA的检测可以分为间接免疫荧光法（IIF）和酶联免疫吸附（ELISA），IIF法又分为胞浆型（C-ANCA）和环核型（P-ANCA），C-ANCA的主要靶抗原为蛋白酶3（proteinase 3，PR3），而 P-ANCA的主要靶抗原为髓过氧化物酶（myelopero-xidase，MPO)。
关键词： 血管炎 抗中性粒细胞胞浆抗体 补体系统 C5a 发病机制 -
小鼠哮喘模型中补体C5a对IL-17表达的调节作用
目的 探讨小鼠哮喘模型中补体C5a对IL-17表达的调节作用.方法 用卵清蛋白(OVA)致敏、激发的方法 建立Balb/C小鼠哮喘模型.用体内抗体中和试验,观察致敏前中和炎症介质补体C5a的功能是否影响小鼠肺泡灌洗液中IL-17细胞因子的表达水平,并探讨其机制.结果 病理结果 显示模型组小鼠的肺组织出现肺泡腔扩张、腔内大量炎性细胞的浸润.小鼠致敏前给予抗C5a抗体干预上调了肺部IL-17及IL-6 的表达,导致肺炎症明显加重.结论 小鼠哮喘模型中体内C5a分子对IL-17表达具有负调节作用.
