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尾静脉注射C3a高表达腺病毒对自发性免疫性心肌炎的影响
目的 通过对自发性免疫性心肌炎的Balb/c小鼠尾静脉注射C3a高表达腺病毒来观测C3a对心肌炎症及心肌细胞凋亡的影响.方法 将所购得的60只小鼠随机分为实验组和对照组,两组各30只.实验组皮下注射猪心肌球蛋白和尾静脉注射C3a高表达腺病毒;对照组仅皮下注射猪心肌球蛋白和PBS.21 d后处死动物并制作切片,观测炎症浸润程度,并取眼球血测心肌坏死标志物cTnI及IgG、IgM抗体.结果 免疫后第21天,两组小鼠心肌组织HE染色见有不同程度的急性炎性细胞浸润和心肌细胞变性坏死,毛细血管扩张,周围可见炎性细胞渗出,以淋巴细胞为主,炎症评分显著高于对照组(P<0.05).血清cTnI的水平采用免疫发光法来检测,21 d时实验组小鼠血清cTnI、IgG和IgM明显高于对照组水平(P<0.05).结论 补体成分C3a参与了自发性免疫性心肌炎的发生发展.
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补体成分在支气管哮喘气道表达及对结构细胞的作用
目的 探求补体成分过敏毒素C3a和C5a在支气管哮喘(简称哮喘)气道表达及对结构细胞的作用.方法 利用免疫组织化学的方法对补体成分C3、C3d、C5b-9、C3aR和C5aR在健康和哮喘气道黏膜的表达/沉积进行比较.结果 发现在哮喘患者气道黏膜标本中,上述成分在气道黏膜层、黏膜下层、平滑肌及腺体的表达/沉积明显增加.体外实验表明补体C3a和C5a均可刺激气道组织结构细胞(上皮、内皮、平滑肌和成纤维细胞)的增殖.结论 结果提示补体系统活化及过敏毒素C3a和C5a可能参与哮喘发病过程.
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C3a、C5a受体缺失减轻IgA肾病肾损伤
目的：探讨C3a、C5a及其受体在IgA肾病发病中作用及潜在机制。方法：6～8周清洁级雌性BALB／c小鼠28只，阴性对照组、野生型组、C3 a受体敲除组、C5 a受体敲除组各7只，采用有活性的仙台病毒滴鼻经鼻黏膜感染联合尾静脉注射建立小鼠IgA肾病模型，测定24 h尿蛋白量、血清尿素氮、血清肌酐；留取肾组织标本，通过直接免疫荧光法检测肾组织IgA、C3沉积；采用PAS染色光镜下观察肾组织病理改变；采用RT-qPCR法检测肾组织中TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 mRNA相对表达量。结果：15周后野生型组、C3a受体敲除组、C5a受体敲除组（实验组）24 h尿蛋白量高于阴性对照组，野生型组高于C3 a受体敲除组及C5 a受体敲除组，差异具有统计学意义；血清尿素氮及血清肌酐差异无统计学意义；实验组小鼠可见肾脏组织病理改变，且野生型组重于C3 a受体敲除组及C5 a受体敲除组，阴性对照组肾脏组织病理则无明显异常。实验组小鼠肾组织TNF-α、TGF-β、IL-1β、IL-6、MCP-1 mRNA相对表达量高于阴性对照组，同时野生型组高于C5a受体敲除组及C3a受体敲除组，另外IL-1β、IL-6、MCP-1的mRNA相对表达量C5a受体敲除组高于C3a受体敲除组。结论：C3a及C5a受体缺失可减轻IgA肾病肾损伤，并且C3a受体缺失作用更加显著。
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C3a分泌性表达载体及过表达C3a肾小管上皮细胞株的构建
目的：已有的研究表明包括糖尿病肾病在内的多种肾病患者肾小管上皮细胞存在C3a／C3aR轴过度活化现象，但有关C3 a／C3 aR轴过度活化在肾小管上皮细胞中的病理意义未知。文中构建分泌性过表达C3 a的肾小肾小管上皮细胞株，为探讨各种病理情况下C3a／C3aR轴过度活化的病理意义提供细胞模型。方法设计合成人C3a 分泌性表达单元，将其克隆到慢病毒表达载体pLenti6．3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点，构建成C3a分泌性表达载体pLenti6．3-C3a-IRES2-EGFP；将pLenti6．3-C3a-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞，包装成C3a表达重组慢病毒LV-C3a；以LV-C3a感染人肾小管上皮细胞系HK2，根据LV-C3a上带有杀稻瘟菌素抗性基因的特点，以杀稻瘟菌素筛选稳定转染细胞克隆；利用荧光定量PCR和ELISA方法对稳定转染细胞克隆的C3a表达水平和分泌情况进行分析，从中鉴定出稳定分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株。结果①成功构建了序列完全正确的C3a分泌性表达载体pLenti6．3-C3a-IRES2-EGFP；②成功进行了重组慢病毒包装，得到了高滴度（5×108个／mL）的C3a表达重组慢病毒LV-C3a；③成功进行了LV-C3a对HK2细胞的转染，得到了稳定转染LV-C3a的HK2细胞株；基于荧光定量PCR和ELISA的分析证实，与HK2细胞比较，HK2-C3a细胞株中C3a mRNA表达水平显著升高[（1．0±0．5） vs （1321．0±18．0）， P＜0．01]，分泌的C3a水平显著升高[（0．3±0．2）ng／mL vs （249．0±37．0） ng／mL， P＜0．01]。结论成功构建的C3a分泌性慢病毒表达载体和分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株为进一步研究各种病理情景中C3a／C3aR过度活化在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型，也为进一步开展C3a／C3aR过度活化在其他细胞中的病理意义创造了条件。
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C3a、C5a在局灶节段肾小球硬化症小鼠发病中的作用
目的:探讨C3a、C5a在局灶节段肾小球硬化症发病中的作用.方法:雄性BALB/c小鼠分为正常对照组、野生型组、C3aR敲除组、C5aR敲除组,每组15只.野生型组、C3aR敲除组、C5aR敲除组小鼠一次性注射阿霉素(10 mg/kg)造模,正常对照组给予等体积的生理盐水,注射阿霉素后第0、1、4、8、12周观察小鼠一般状况,检测24 h尿蛋白和血清白蛋白、甘油三酯、胆固醇、肌酐.另取15只小鼠,于第4、8、12周每组处死5只小鼠,观察肾脏组织病理学变化.结果:与正常对照组比较,注射阿霉素4、8、12周后,模型小鼠24 h尿蛋白和血清甘油三酯、胆固醇、肌酐水平增加(P＜0.05),而血清白蛋白水平下降(P＜0.05);与野生型组比较,C3aR、C5aR敲除组各项指标明显改善(P＜0.05).C3aR、C5aR敲除组比野生型组小鼠肾脏组织病理学改变明显减轻.结论:C3a、C5a参与了局灶节段肾小球硬化症的发病过程.
关键词： C3a C5a 局灶节段肾小球硬化症 小鼠 -
C3a、C5a及其受体在IgA肾病发病中的作用
目的:探讨C3a、C5a及其受体C3aR、C5aR在IgA肾病(IgAN)发病中的作用.方法:选取病理分级Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级(n=30、30、23)IgAN患者的肾组织标本83例作为病例组,同时选取肾脏肿瘤患者手术切除的正常肾组织10例作为对照,采用免疫组化方法分别检测C3a、C5a、C3aR及C5aR在肾组织中的表达;收集83例IgAN患者血清、尿液标本作为病例组,同时收集10例健康成人血清、尿液标本作为阴性对照,10例脓毒血症患者血清、尿液标本作为阳性对照,采用ELISA法检测各组血清、尿液中C3a、C5a水平.结果:C3a、C3aR在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级IgAN患者肾组织中阳性细胞百分比分别为(16.0±5.7)%、(12.3±3.5)%,(19.9±6.3)%、(20.9±3.7)%,(38.3±17.3)%、(30.6±4.3)%,高于正常对照组的(3.4±1.6)%、(1.7±1.6)%(F=32.606和190.792,P均＜0.001).C5a、C5aR在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级IgAN患者肾组织中阳性细胞百分比分别为(14.4±2.6)%、(14.8±3.6)%,(22.0±3.9)%、(20.2±5.0)%,(31.1±4.3)%、(41.4±8.5)%,高于正常对照组的(7.8±2.8)%、(6.1±1.6)%(F=143.992和140.237,P均＜0.001).Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级IgAN、脓毒血症患者和健康人血清中C3a、C5a水平分别为(2.20±0.30)、(3.60±0.70),(1.90±0.50)、(3.80±0.70),(1.90±0.80)、(3.40±0.70),(2.30±0.50)、(3.20±1.10),(0.90±0.50)、(0.06±0.04) μg/L(F=6.033和27.383,P均＜0.05);尿液中C3a、C5a水平分别为(1.80±0.80)、(2.60±1.30),(4.80±2.00)、(4.80±1.50),(7.00±3.00)、(7.00±4.90),(3.30±1.90)、(3.00±0.90),(0.03±0.01)、(0.07±0.07) μg/L(F=20.913和11.892,P均＜0.001).结论:C3a、C5a参与IgAN的发生与发展,在IgAN病理损伤过程中起重要作用.
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C3 a、IL-23及TGF-β1在COPD气道炎症中的研究进展
慢性阻塞性肺疾病以病情反复发作且呈进行性发展为特点。该病使患者肺功能进行性下降,患者的生活质量受到严重影响,且致残率较高,部分患者甚至丧失劳动能力。气道炎症是导致 COPD的重要发病机制,细胞因子在 COPD气道炎症中有着重要作用。近年来,C3a、IL-23及TGF-β1在COPD气道炎症中的作用被进行了深入的探讨,本研究对上文所说的细胞因子应用在COPD气道炎症中的效果进行详细地叙述,从而为应用 COPD 的诊断及治疗提供新途径。
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冠心病患者血小板上补体受体 C3aR 和 C5aR 表达研究
目的：探讨冠心病患者血小板补体受体表达的意义。方法：302例冠状动脉疾病纳入本次研究，其中包括稳定型冠状动脉疾病患者（n=152），不稳定型心绞痛患者（n=54），急性心肌梗塞患者（n=96），同期健康体检者276例纳入本次研究。流式细胞仪检测所有受试者血小板表面 C3aR 和 C5aR 表达水平。EILSA 检测所有受试者血清 C3a 和 C5a 含量。结果：稳定型和非稳定型冠状动脉疾病患者或急性心肌梗塞患者血小板表面 C5aR 表达水平明显高于健康对照者。而与健康对照者相比，稳定型和非稳定型冠状动脉疾病患者血小板表面 C3aR 表达水平显著升高，而急性心肌梗塞患者血小板表面 C3aR 表达水平未见明显变化。冠状动脉疾病患者血清 C3a 和 C5a 水平具有显著正相关性，而血小板表面 C3aR 和 C5aR 表达水平只与血清 C3a 含量呈弱相关性，与血清 C5a 含量无相关性。血小板表面 C3aR 和 C5aR 表达与血小板激活呈正相关（对于 C3aR，r=0.47，P>0.001，对于 C5aR，r=0.76， P<0.001）。同样地，C3aR 与血小板激活相关分子 SDF-1呈正相关。结论：冠状动脉疾病患者补体受体 C3aR 和C5aR 与血小板激活具有正相关性。
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哮喘患者气道过敏毒素C3a的变化特点
目的：研究诱导痰中过敏毒素C3a在支气管哮喘发病中的变化特点及临床意义。方法自2006年9月~2007年2月于我院呼吸科门诊和病房就诊的哮喘急性发作期患者共33例，收集其人口学资料、病史及家族史、肺功能数据及诱导痰中C3a水平，进行分析和总结。结果（1）哮喘急性发作期诱导痰中C3a水平[2.24（1.68~5.58）ng/ml]高于治疗后哮喘临床缓解期C3a水平[0.7（0.24~2.31）ng/ml]（P<0.01），哮喘临床缓解期C3a水平高于对照组[0.12（0.07~0.39）ng/ml]（P<0.05）；（2）哮喘急性发作期，诱导痰C3a水平随轻度急性发作[0.25（0.09~0.40）ng/ml]、中度急性发作[2.21（1.16~3.41）ng/ml]、重度急性发作[4.69（2.69~6.59）ng/ml]依次升高，且存在明显差异（P<0.01）；（3）哮喘急性发作期组患者诱导痰C3a水平与诱导痰细胞总数呈正相关（r=0.718, P<0.05），嗜酸性粒细胞计数呈正相关（r=0.495, P<0.05），巨噬细胞计数呈正相关（r=0.600, P<0.05）。结论诱导痰C3a水平与哮喘严重程度和局部炎症细胞学分类相关，可能成为重要的临床标志物指导哮喘的治疗。
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乙型肝炎肝硬化患者肝功能分级与过敏毒素C3a水平的相关性
目的 研究乙型肝炎肝硬化患者肝功能分级与过敏毒素C3a水平的相关性,并绘制ROC曲线测定界值,来探索过敏毒素C3a在乙型肝炎肝硬化诊治中的意义.方法 共纳入195例患者,检查血液过敏毒素C3a值、总胆红素值、白蛋白值、凝血酶原时间及腹水与肝性脑病情况,采用Child-Pugh改良分级法评估患者肝功能.另取20例乙肝病毒携带者作为对照组.结果 肝功能C级组C3a水平较B级组降低(P＜0.01);两组均较肝功能A级组及对照组降低(均P＜ 0.01).肝功能受损程度越重,乙型肝炎肝硬化患者血液中C3a浓度越低.结论 乙型肝炎肝硬化患者肝功能Child-Pugh分级与其血液中过敏毒素C3a水平呈负相关性,血液中C3a水平可用于乙型肝炎肝硬化患者肝功能水平的评估.
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麻苏胶囊治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期临床研究
目的 观察麻苏胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期患者临床主要症状、肺功能及过敏毒素(C3a)的影响.方法 将60例COPD患者按随机数字表法分为对照组和观察组,各30例.对照组仅给予基础治疗,观察组给予基础治疗加麻苏胶囊口服.两组疗程均为7d.结果 两组治疗后咳嗽评分、喘息评分、总积分均较治疗前降低(P＜0.01),咯痰量评分对照组较治疗前无明显下降(P＞0.05),观察组治疗后较治疗前降低(P＜0.01).治疗后观察组主要症状评分均下降更明显(P＜0.05);两组治疗后第1秒用力呼气容积(FEV1,第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1％)、第1秒用力呼气容积占用力肺活量比值FEV1/FVC均较治疗前改善(P＜0.05),观察组改善更明显(P＜0.05);两组治疗前后血清C3a,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 麻苏胶囊治疗COPD急性加重期可明显减轻患者临床主要症状,改善肺功能.但对C3a并无明显降低作用,其具体作用机制尚有待于进一步研究.
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表达细胞色素P2E1 C3A肝细胞系的建立及其对增殖的影响
细胞色素P450 2El(Cytochrome-P450 2E1,CYP2E1)在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发病机制中发挥重要作用.CYP2E1广泛参与细胞物质代谢,是否影响肝细胞增殖是一个值得探讨的问题,我们对CYP2E1对C3A肝细胞增殖的影响进行了初步探索.
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白蛋白过载对阿霉素肾病小鼠肾脏C3a-C3aR信号通路及IL-17的影响
目的 研究白蛋白过载对阿霉素肾病小鼠肾脏局部补体C3a-C3a受体(C3aR)信号通路及白细胞介素17(IL-17)的影响,初探白蛋白过载致肾脏损害的免疫学机制.方法 SPF级雄性Balb/c健康小鼠随机分为对照组、阿霉素肾病组(ADR组)、白蛋白过载组(ADR+BSA组).所有小鼠行左肾切除术,第2周末构建阿霉素肾病模型,第6周末白蛋白过载组腹腔注射牛血清白蛋白(10 mg/g,5次/周,共4周).第6、10周末检测24小时尿蛋白、血清生化指标、肾脏组织病理、Real-time PCR及免疫组化法检测肾脏C3a、C3aR、TGF-β1表达,ELISA及免疫组化法检测肾脏IL-17表达.结果 第10周末ADR组肾脏C3a、C3aR、TGF-β1、IL-17表达均较对照组增高(P均＜0.05).第10周末ADR+BSA组尿蛋白、血清尿素氮水平较对照组及ADR组升高(P均＜0.05);肾脏组织病理发现肾小球呈局灶节段性硬化及肾小管损害加重;肾脏C3a、C3aR、TGF-β1、IL-17表达较对照组及ADR组增高(P均＜0.05).结论 阿霉素肾病小鼠肾脏局部C3a-C3aR信号通路活化,白蛋白过载致持续大量蛋白尿可进一步活化C3a-C3aR信号通路,同时上调TGF-β1、IL-17表达进而加重肾脏损害.
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C3a-C3aR信号通路对正常儿童Treg/Th17免疫平衡的影响
目的 探讨补体C3a-C3a受体(C3aR)信号通路对正常儿童外周血Treg/Th17免疫平衡的影响,以期为进一步研究该通路在相关疾病中的作用提供实验依据.方法 健康体检儿童17例,其中男性10例,女性7例,平均年龄6.8岁.收取空腹外周血3 ml,提取外周血单个核细胞(PBMC),分为3组:1)正常对照组;2)人重组C3a处理组(C3a组);3)人重组C3a及C3a受体拮抗剂处理组(C3a+C3aRA组).经过培养后应用流式细胞术分别检测各组中Treg细胞和Th17细胞占CD4+T细胞的百分比,并比较各组间Treg/Th17的比值.结果 与正常对照组比较,C3a组Th17细胞比例升高(P＜0.01),Treg/Th 17的比值明显降低(P＜0.01),Treg细胞比例有下降趋势,但无明显统计学差异(P＞0.05);与C3a组比较,C3a+C3aRA组Th17细胞比例降低(P＜0.05),Treg/Th 17的比值明显升高(P＜0.05),Treg细胞比例有上升趋势,但无统计学差异(P＞0.05);而C3a+C3aRA组较正常对照组Th17细胞、Treg细胞比例以及Treg/Th 17的比值均无统计学差异(P＞0.05).结论 C3a-C3aR信号通路可能介导正常生理状态下儿童外周血中Th17细胞活化,同时参与调控正常儿童Treg/Th 17细胞免疫平衡.
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过敏毒素C3a与前列腺增生症合并组织炎症的关系
目的 研究前列腺按摩液(expressed prostatic secretions,EPS)中过敏毒素C3a对良性前列腺增生症(BPH)合并增生前列腺组织炎症的诊断价值,及其与临床病理特征的关系.方法 共纳入40例患者,检查血清前列腺特异抗原(PSA)、血清游离前列腺特异性抗原(fPSA)、尿常规、血常规,采用国际前列腺症状评分(IPSS)评估下尿路症状,采用美国国立卫生研究院慢性前列腺炎症指数(NIH-CPSI)评估患者前列腺炎症症状；经直肠B超测前列腺体积.术前采集所有患者的EPS行双抗体夹心ELISA法测定C3a浓度.术中无菌操作取前列腺组织标本作病理炎症分级.另取10例正常年轻人EPS作为对照组.结果 增生前列腺组织重度炎症组EPS中C3a浓度较轻度炎症组升高(P＜0.01),两组均较对照组升高(P＜0.01).EPS中C3a可用于判断是否合并增生前列腺组织炎症,其灵敏度为0.97,特异度为0.70.EPS中C3a浓度与血清PSA、fPSA含量,患者年龄及体重指数(BMI)没有相关性；但与NIH-CPSI评分有相关性(r=0.495,P＜0.01).前列腺小体积组与大体积组、尿常规WBC异常组与正常组EPS中C3a浓度差异均无统计学意义.保留尿管组与未置尿管组EPS中C3a浓度差异有统计学意义(P＜0.05).结论 C3a用于判断BPH是否合并增生前列腺组织炎症有一定价值.EPS中C3a浓度与NIH-CPSI评分、留置尿管有关,未发现与患者年龄,BMI,血清PSA、fPSA浓度,前列腺体积和尿常规WBC数有关.
