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急性主动脉夹层患者补体活化及补体C3a受体表达的临床意义
目的:揭示急性主动脉夹层发生中,是否存在补体系统活化及补体活化产物C3a受体的表达变化.方法:收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受体检的正常人、腹主动脉瘤手术以及急性主动脉夹层手术患者血液各5例,进行微量样本多指标流式蛋白定量试验,测定其补体系统活化产物过敏毒素C3a、C4a和C5a的水平;收集2015年1月至2015年7月,在北京安贞医院接受主动脉弓部替换术患者的升主动脉组织5例及心脏移植供受体正常的升主动脉组织5例,进行免疫组化组织染色,并提取蛋白,检测C3a受体的表达.结果:微量样本多指标流式蛋白定量试验结果显示,腹主动脉瘤和急性主动脉夹层患者血浆中补体活化产物C3a、C4a和C5a含量显著高于正常对照组(P＜0.01),这说明补体活化不仅在腹主动脉瘤,急性主动夹层患者循环系统也存在.免疫印迹结果显示急性主动脉夹层患者标本中C3a受体蛋白表达量显著高于正常对照组(P＜0.05).免疫组化染色发现,与正常升主动脉壁相比较,急性主动脉夹层标本的C3a受体表达显著增高(P＜0.01).结论:急性主动脉夹层患者体内存在补体系统活化C3a-C3a受体信号通路,可能参与主动脉夹层的发生发展.
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补体C3a受体拮抗剂对三氯乙烯致敏小鼠肾脏免疫性损伤的影响
目的 通过使用C3a受体特异性拮抗剂(C3aRA)研究补体C3a-C3aR在三氯乙烯(TCE)致敏小鼠肾脏免疫性损伤中的作用,探讨职业性三氯乙烯药疹样皮炎(ODMLT)肾脏损伤机制.方法 将42只无特定病原体(SPF)级雌性BALB/c小鼠(6～8周)随机分为空白对照组(5只)、溶剂对照组(5只)、TCE处理组(16只)和TCE+C3aRA处理组(16只),其中TCE处理组与TCE+C3aRA处理组根据皮肤致敏试验评分进一步区分为致敏组和非致敏组.取小鼠血清样品采用生化试剂盒检测小鼠肾功能变化;采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)法检测小鼠肾脏组织中C3aR基因表达水平变化;采用免疫组化法检测小鼠肾脏组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平变化.结果 与溶剂对照组和相应非致敏组比较,TCE致敏组和TCE+C3aRA致敏组小鼠肌酐(CRE)和尿素氮(BUN)水平明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与TCE致敏组比较,TCE+C3aRA致敏组CRE和BUN水平明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与溶剂对照组和TCE非致敏组比较,TCE致敏组小鼠肾脏组织中C3aR基因表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).TCE致敏组和TCE+C3aRA致敏组小鼠肾脏组织中IL-1β和TNF-α蛋白有大量表达,与TCE致敏组比较,TCE+C3aRA致敏组肾脏组织中IL-1β和TNF-α蛋白表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 补体C3a-C3aR可能参与TCE致敏小鼠肾脏免疫性损伤,C3aRA对TCE致敏小鼠肾脏免疫性损伤有一定的保护作用.
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HBV-IgAN肾组织肥大细胞浸润不同检测方法的对比
目的:探讨以类胰蛋白酶抗体与C3a受体抗体检测肾组织肥大细胞(MC)浸润的可行性.方法:以正常肾组织为对照(n=6),选择乙型肝炎病毒相关性IgA肾病(HBV-IgAN,n=6)和原发性IgA肾病(pIgAN,n=6)为研究对象,采用免疫组化方法分别以类胰蛋白酶抗体、C3a受体抗体检测肾组织肥大细胞浸润情况.结果:C3aR及类胰蛋白酶阳性肥大细胞呈圆形或椭圆形,大小不等,胞浆着色,呈棕褐色颗粒,分布基本一致,但未完全重叠.正常肾组织MC在肾间质偶有浸润,肾小球内未见浸润.与正常对照组相比,HBV-IgAN与pIgAN肾间质肥大细胞浸润显著增加,主要分布于肾小管周围间质区域,以纤维化区域多见.C3aR阳性的肥大细胞数目与类胰蛋白酶阳性肥大细胞数目显著正相关(r=0.975;P＜0.05).但两种疾病之间肥大细胞数量差异无统计学意义.结论:类胰蛋白酶抗体及C3aR抗体两种免疫组化方法均适用于肾组织肥大细胞的检测.肾组织肥大细胞浸润在HBV-IgAN和pIgAN进展中的作用有待研究.
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低浓度补体C3对大脑皮层神经元生物活性及突起生长的影响
目的 探讨补体C3对大脑皮层神经元生物活性和突起生长的影响及可能机制. 方法 在原代培养的孕16 d大鼠胚胎皮层神经元中分别加入不同浓度的外源性C3蛋白、神经生长因子和C3a受体拮抗剂SB290157.WST-8 法测定神经元活性(细胞存活率).选用MAP2与β-tubulin免疫荧光细胞化学双标染色,荧光显微镜下观察并计算神经元纯度;应用神经元形态分析软件采集神经元树突、轴突长度及胞体面积等数据,分析不同浓度补体C3及C3a受体拮抗剂对突起生长的影响.以不含其他试剂的神经元细胞及其培养液作为正常对照组. 结果 皮层神经元存活率检测显示,高浓度 (10～100 μg/mL) C3组明显低于正常对照组(P<0.05),而低浓度(0.01～1 μg/mL)C3组与对照组无明显差异. 1 μg/mL 和5 μg/mL C3均促进皮层神经元突起生长,尤其是轴突的生长,其树突和轴突长度分别增长20% ～39%和40% ～61%,与正常对照组比较有显著差异(P<0.05和P<0.01);而加入C3a受体拮抗剂后,皮层神经元树突和轴突长度与对照组比较无明显差异. 结论 低浓度补体C3对皮层神经元轴突和树突生长有明显促进作用,而该作用可能由C3活性片段C3a受体介导.
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炎性细胞因子对人肾小管上皮细胞C3a受体表达的调控
目的:为更好了解肾脏组织中C3aR表达调控因素,我们研究了多种炎性细胞因子对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)C3a受体(C3aR)表达的调控作用. 方法:用多种炎性细胞因子[干扰素y(IFN-γ)、C3a、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)]刺激HK2细胞,利用荧光定量PCR、免疫组化及免疫印迹的方法检测HK2细胞C3aR表达水平. 结果:炎性细胞因子IFN-γ能够显著促进HK2细胞C3aR的表达上调[与正常对照组相比,C3aR mRNA表达水平的约增长5倍(P=0.001),蛋白水平表达上调大约1.6倍(P=0.046)],且HK2细胞C3aR mRNA水平表达上调与IFN-γ呈剂量及时间依赖关系;而其他的炎性细胞因子如TNF-α、TGF-β、IL-1β甚至生物活性多肽C3a均未观察到对HK2细胞C3aR表达造成影响. 结论:肾小管上皮细胞表面可表达生物活性肽段C3aR,而且炎症细胞因子IFN-γ能够明显增强肾小管上皮细胞C3aR表达,预示C3a/C3aR轴可能参与了肾脏局部炎症反应的调节并且与肾脏疾病的发生、发展有一定的相关性.
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白蛋白过载对阿霉素肾病小鼠肾脏C3a-C3aR信号通路及IL-17的影响
目的 研究白蛋白过载对阿霉素肾病小鼠肾脏局部补体C3a-C3a受体(C3aR)信号通路及白细胞介素17(IL-17)的影响,初探白蛋白过载致肾脏损害的免疫学机制.方法 SPF级雄性Balb/c健康小鼠随机分为对照组、阿霉素肾病组(ADR组)、白蛋白过载组(ADR+BSA组).所有小鼠行左肾切除术,第2周末构建阿霉素肾病模型,第6周末白蛋白过载组腹腔注射牛血清白蛋白(10 mg/g,5次/周,共4周).第6、10周末检测24小时尿蛋白、血清生化指标、肾脏组织病理、Real-time PCR及免疫组化法检测肾脏C3a、C3aR、TGF-β1表达,ELISA及免疫组化法检测肾脏IL-17表达.结果 第10周末ADR组肾脏C3a、C3aR、TGF-β1、IL-17表达均较对照组增高(P均＜0.05).第10周末ADR+BSA组尿蛋白、血清尿素氮水平较对照组及ADR组升高(P均＜0.05);肾脏组织病理发现肾小球呈局灶节段性硬化及肾小管损害加重;肾脏C3a、C3aR、TGF-β1、IL-17表达较对照组及ADR组增高(P均＜0.05).结论 阿霉素肾病小鼠肾脏局部C3a-C3aR信号通路活化,白蛋白过载致持续大量蛋白尿可进一步活化C3a-C3aR信号通路,同时上调TGF-β1、IL-17表达进而加重肾脏损害.
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C3a-C3aR信号通路对正常儿童Treg/Th17免疫平衡的影响
目的 探讨补体C3a-C3a受体(C3aR)信号通路对正常儿童外周血Treg/Th17免疫平衡的影响,以期为进一步研究该通路在相关疾病中的作用提供实验依据.方法 健康体检儿童17例,其中男性10例,女性7例,平均年龄6.8岁.收取空腹外周血3 ml,提取外周血单个核细胞(PBMC),分为3组:1)正常对照组;2)人重组C3a处理组(C3a组);3)人重组C3a及C3a受体拮抗剂处理组(C3a+C3aRA组).经过培养后应用流式细胞术分别检测各组中Treg细胞和Th17细胞占CD4+T细胞的百分比,并比较各组间Treg/Th17的比值.结果 与正常对照组比较,C3a组Th17细胞比例升高(P＜0.01),Treg/Th 17的比值明显降低(P＜0.01),Treg细胞比例有下降趋势,但无明显统计学差异(P＞0.05);与C3a组比较,C3a+C3aRA组Th17细胞比例降低(P＜0.05),Treg/Th 17的比值明显升高(P＜0.05),Treg细胞比例有上升趋势,但无统计学差异(P＞0.05);而C3a+C3aRA组较正常对照组Th17细胞、Treg细胞比例以及Treg/Th 17的比值均无统计学差异(P＞0.05).结论 C3a-C3aR信号通路可能介导正常生理状态下儿童外周血中Th17细胞活化,同时参与调控正常儿童Treg/Th 17细胞免疫平衡.
