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皮肤磨削术前后组织中KGF mRNA的表达
皮肤磨削术在临床上有着较广泛的应用，但是其创面修复的机理至今尚未完全阐明。角质形成细胞生长因子(KGF)由Rubin等在1989年分离鉴定［1］，它特异性地作用于上皮细胞，促进其生长增殖和分化，因而探讨其在术后创面上皮再生过程中的作用很有意义。我们抽提了12例患者手术前后皮肤组织中的总RNA进行RNA印迹法(Northern blot)，结果如下。 一、对象和方法 1.对象：为我科住院病人，供皮区为选磨削术野中较大面积的瘢痕区域，3个月内未患任何皮肤疾患；年龄21～34岁，均为男性；痤疮瘢痕9例，水痘瘢痕2例，外伤性瘢痕1例；病程5～12年。取材方法：标本为全层皮肤，分别在术前和术后24、72、120 h 以切口为中心取全层皮肤，标本离体后立即置液氮中保存，实验前去除缝线用电子天平计重。 2.方法:①试剂：Trizol: Gibco公司产品； Agarose, Prime -α-Gene Labeling System:Promega公司产品。②人KGFcDNA探针的制备：人KGFcDNA片段由中国人民解放军烧伤中心实验室惠赠，含有人KGFcDNA全长585bp中的345bp。③方法：所有标本按文献［2］进行总RNA抽提，吸取l0 μg总RNA(约4.5 μl)，加入2.0 μl 5X甲醛凝胶电泳缓冲液、3.5 μl 37 %甲醛和10.0 μl甲酰胺，在65℃温育15 min，进行甲醛变性凝胶电泳，在20XSSC中经真空转移0.5 h至尼龙膜上，尼龙膜晾干后在80℃烘烤0.5～2h固定，用6XSSC、2XDenhardt和1 %SDS在68℃预杂交1～2 h后，将用α-32P-dATP标记的人KGFcDNA探针加入杂交管在杂交炉中68℃杂交16～24 h，用1XSSC、0.1 %SDS洗膜，再用0.1XSSC、0.1 %SDS洗膜后用X光片放射自显影，于-70℃曝光6 h～2 w。显影后用密度扫描仪分析结果。内参照探针选用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)。 3.统计学分析：实验结果采用方差分析，再行Newman-Keuls检验。 二、结果 1.12例正常皮肤标本和术后皮肤标本的总RNA经变性凝胶电泳后显示清晰的5S、28S和18S条带(图1)。 2.每份标本约10 ug总RNA用于RNA印迹法，为1例患者术前和术后1、3、5 d皮肤组织中KGF cDNA探针杂交后曝光2 w的显影，1泳道为术前组织杂交显影，2泳道为术后1 d皮肤组织杂交显影，3泳道为术后3 d皮肤组织杂交显影，4泳道为术后5 d皮肤组织杂交显影，术后3 d皮肤组织的KGF杂交条带辉度明显强于术前和术后1 d、5 d的皮肤标本(图2)。
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郁金银屑片对Balb/c裸鼠银屑病模型的实验研究
目的 观察郁金银屑片对Balb/c裸鼠银屑病模型皮损组织中角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)和双调蛋白(Amphiregulin,AREG)及两者基因表达的影响.方法 将36只Balb/c裸鼠随机分为空白对照组、模型组和郁金银屑组,除空白对照组外,另2组裸鼠均用10％普萘洛尔涂于背部皮肤,2次/d,连续1周的方法造银屑病模型.成模后郁金银屑组按0.25 g/kg剂量灌郁金银屑片混悬液治疗2周,空白对照组和模型组灌等量生理盐水.对裸鼠背部皮损进行银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分;以酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测皮损组织均浆液KGF和AREG的蛋白量,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测KGF mRNA和AREG mRNA的表达.结果 模型组和郁金银屑组造模后PASI评分、匀浆液中KGF和AREG明显升高,KGF mRNA和AREG mRNA高表达,与空白对照组比较,P＜0.05.在治疗2周后,模型组与同组治疗前比较,P＞0.05;郁金银屑组PASI评分、匀浆液中KGF和AREG降低,KGF mRNA和AREG mRNA低表达,与同组治疗前和模型组治疗后比较,P＜0.05,差异有统计学意义.结论 郁金银屑片治疗银屑病机制与降低表皮组织匀浆液中KGF和AREG、下调两者基因表达密切相关.
关键词： 郁金银屑片 银屑病模型 角质形成细胞生长因子 双调蛋白 -
银屑平治疗寻常型银屑病的动物实验研究
目的 建立Balb/c裸小鼠寻常型银屑病动物模型,观察银屑平对其表皮组织中双调蛋白(AREG)、血管内皮生长因子(VEGF)及角质形成细胞生长因子(KGF)的影响.方法 Balb/c裸小鼠36只,随机分为模型对照组和银屑平A组、银屑平B组,三组均连续8d于小鼠头颈部、上肢、躯干和下肢4个部位皮肤涂咪喹莫特软膏的方法建模.末次给药造模第8天,银屑平A、B组按0.1 g/kg和0.5 g/kg剂量灌胃治疗10d,模型对照组灌等量生理盐水.于造模第8天和治疗第10天,采用皮损面积和严重程度指数(PASI)对动物头颈部、上肢、躯干和下肢4个部位皮肤病变情况进行评分;ELISA法定量测定表皮组织匀浆液中AREG、KGF、VEGF和血管内皮生长因子受体1 (VEGFR1)等指标含量.结果 银屑平A组、银屑平B组和模型对照组造模第8天PASI评分比较,差异无统计学意义(P＞0.05),灌胃治疗第10天时,银屑平A组、银屑平B组PASI评分均较模型对照组和同组造模第8天明显降低(P＜0.05),表皮组织匀浆液中AREG、KGF、VEGF和VEGFR1均低表达(P＜0.05).银屑平A组、银屑平B组组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 银屑平可能通过降低表皮组织匀浆液中AREG、KGF、VEGF含量,并有可能阻断VEGF与和VEGFR1结合,这对抑制表皮病变细胞角化和皮下组织血管新生,减轻受试动物银屑病样病理改变有肯定的干预作用.
关键词： 寻常型银屑病 银屑平 双调蛋白 血管内皮生长因子 角质形成细胞生长因子 -
转化生长因子β 1对长波紫外线照射皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达的影响
背景:研究认为衰老和光老化状态下生长因子的表达不一定一致.生长因子与皮肤老化的关系越来越受到重视.目的:验证转化生长因子β 1对长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、角质细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子表达的影响.设计、时间及地点:以体外培养细胞为观察对象,随机重复实验,于2006-07/2008-03在解放军第四军医大学全军整形外科研究所进行.材料:成纤维细胞来自解放军第四军医大学整形外科门诊患者包皮,采用组织块法培养获得.方法:通过酶联免疫法(ELISA)使用不同剂量长波紫外线(0,5,10,20 J/cm2)照射体外培养的皮肤成纤维细胞,测定上清液中胰岛素样生长因了 1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子的质量浓度;以长波紫外线15J/cm2为照射剂量,选择不同剂量转化生长因子β 1即小剂量组(0.1 μ g/L)、中剂量组(1 μ g/L)、大剂量组(10 μ g/L)对培养的皮肤成纤维细胞进行干预.主要观察指标:不同剂量长波紫外线照射、以及转化生长因子β 1处理后皮肤成纤维细胞胰岛素样生长因子1、血管内皮细胞生长因子、角质形成细胞生长因子的表达.结果:长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞导致胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子分泌水平下降.血管内皮细胞生长因子分泌升高:转化生长因子β 1处理后,转化生长因子B 1剂量依赖性地提高长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞分泌的3种细胞因子的水平.转化生长因子β 1大剂量组胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子含量明显高于长波紫外线照射组(P< 0.01).结论:长波紫外线照射抑制体外培养成纤维细胞中胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子表达,促进血管内皮细胞生长因子表达.转化生长因β 1可提高长波紫外线照射体外培养的皮肤成纤维细胞分泌胰岛素样生长因子1、角质形成细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子3种细胞因子的水平,有利于真皮内结构的恢复和重建.
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脐带间充质干细胞对裸鼠胸腺发育的作用及机制
背景：自身免疫性疾病的传统治疗方法很难有效解决患者免疫耐受机制缺失的问题。间充质干细胞具有再生修复实质组织器官和免疫调节的生物学特性。目的：探讨人脐带源间充质干细胞对裸鼠胸腺发育的影响及作用机制。方法：采用腹腔注射的方式向Foxn1-/-的BABL/c裸鼠体内注射人脐带源间充质干细胞，2×106/只，分析治疗后裸鼠胸腺残基的组织结构变化、胸腺上皮细胞的分布及成熟度，以及发育后的胸腺成熟淋巴细胞输出功能，并探讨人脐带源间充质干细胞发挥治疗作用的机制。结果与结论：胸腺残基出现了清晰的皮髓质结构，胸腺上皮细胞数量增加并且胸腺输出功能增强，外周血中调节性T细胞增多。其作用机制可能是由于人脐带源间充质干细胞能够定植在胸腺组织内并且表达多种促进胸腺发育的细胞因子，尤其是对胸腺发育非常重要的角质形成细胞生长因子。结果表明人脐带源间充质干细胞能够为裸鼠胸腺的结构发育和功能成熟提供合适的微环境，促进裸鼠胸腺残基的发育和功能成熟，为间充质干细胞治疗免疫性疾病的作用机制提出了新的理论观点。
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角质形成细胞生长因子与银屑病的关系
角质形成细胞生长因子是近年来发现的有着重要生物学功能的生长因子,它属于成纤维细胞生长因子家族,由成纤维细胞产生.角质形成细胞生长因子可刺激角质形成细胞的增生、分化、移行,促进上皮细胞的再生、增厚,对银屑病的发病机制及其治疗可能有一定的启示.本文就角质形成细胞生长因子的生物学功能及其与角质形成细胞及银屑病的关系做一综述.
关键词： 角质形成细胞生长因子 角质形成细胞 银屑病 -
角质形成细胞生长因子及其受体反义寡核苷酸对HaCaT细胞的影响
目的研究角质形成细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)反义寡核苷酸对KGF介导的细胞周期和凋亡变化的抑制作用.方法利用永生化角质形成细胞株-HaCaT细胞进行体外培养,流式细胞仪检测KGF引起的HaCaT细胞细胞周期和凋亡变化以及KGFR mRNA反义寡核苷酸对KGF的抑制作用.结果10 ng/mL KGF刺激24 h后可使S期比率较自然生长组增加15%(P＜0.05),并伴凋亡增加2.9%(P＜0.01).针对KGFR mRNA不同位点的2个序列反义寡核苷酸作用后,S期比率和凋亡率降低,且抑制作用呈浓度依赖性(P均＜0.05).反义寡核苷酸作用后G0G1期相应增加,也呈浓度依赖性(P＜0.01).各实验组G2M期比率差异无统计学意义(P均＞0.05).结论KGF可能是造成银屑病KC增殖和凋亡的诱因.KGFR mRNA反义寡核苷酸对KGF介导的HaCaT细胞增殖、凋亡增加具有抑制作用.
关键词： 角质形成细胞生长因子 细胞周期 细胞凋亡 反义寡核苷酸类 反义 -
角质形成细胞生长因子及神经细胞生长因子在银屑病患者皮损中的表达
目的探讨角质形成细胞生长因子(KGF)及神经细胞生长因子(NGF)与银屑病的关系及银屑病皮损中间质细胞与角质形成细胞的相互作用.方法应用免疫组化技术分别检测33例银屑病患者皮损、8例非皮损和13例正常人皮肤中KGF、KGF受体、NGF、NGF受体的表达.结果KGF、KGF受体在银屑病患者基底层和棘细胞下层有极强的表达,与非皮损组及正常对照组间差异有显著性(P<0.05),而非皮损组与正常对照组间差异无显著性(P>0.05).KGF、KGF受体在真皮层未见表达.NGF、NGF受体则主要表达在颗粒层和棘细胞上层,皮损组与非皮损组之间及非皮损组与正常组之间均差异有显著性(P<0.05).结论银屑病患者皮损中KGF及NGF可能介导了角质形成细胞的增殖与分化不全;银屑病皮损中存在着间质细胞和角质形成细胞相互作用的紊乱.
关键词： 银屑病 表皮生长因子-尿抑胃素 神经生长因子 角质形成细胞生长因子 -
使用体外重建皮肤模型研究真皮成纤维细胞对皮肤色素沉着的重要调节作用：皮肤光老化的影响
已有大量研究强调了人类角质形成细胞在皮肤色素沉着中所起的作用。例如，角质形成细胞通过释放大量的促色素沉着旁分泌生长因子，如αMSH、内皮素1（ET?1）、干细胞因子（SCF）和多种细胞因子，参与紫外线（UV）急性照射诱导的黑素合成（晒黑）。然而，越来越多的证据显示，真皮内成分在皮肤色素沉着调控中的作用不容忽视。20世纪90年代中期，证实细胞外基质（ECM）可调节黑素细胞的增殖、凋亡抑制和黑素生成活性。有报道证实，真皮成纤维细胞可通过分泌可溶性因子对色素沉着起调控作用。另外，对于构成性肤色，研究发现在掌跖，由成纤维细胞产生的Dikkopf?1（DKK?1）对黑素细胞的生长、活性以及对黑素小体转移均有抑制作用，且认为是这两处身体部位颜色较浅的原因。反之，深肤色皮肤内成纤维细胞分泌的神经调节蛋白1（NGR?1）的促色素沉着效应提示，该特定信号分子在决定高度色素沉着的皮肤类型中发挥作用。此外，在各种先天性色素沉着过度障碍中，如系统性硬皮病、皮肤纤维瘤、多发性神经纤维瘤的咖啡牛奶斑和泛发性进行性色素异常症，已知真皮黑素生成生长因子数量增加；这些因子包括SCF、肝细胞生长因子（HGF）或角质形成细胞生长因子（KGF）。表皮与细胞间质之间紧密的互动也可能在黑素细胞内稳态中发挥作用。近已证实，层粘连蛋白332可通过调节L酪氨酸摄取来促进黑素生成。生长因子/细胞因子调节环也存在于真皮细胞和表皮细胞之间，并参与色素沉着的调控。
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角质形成细胞生长因子对HaCaT细胞增殖的影响
目的:研究角质形成细胞生长因子(KGF)对HaCaT细胞增殖的影响,探讨KGF与银屑病表皮过度增殖的关系.方法:利用HaCaT细胞体外培养,采用KGF为增殖诱导剂,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测不同浓度的KGF对HaCaT细胞增殖率的影响;检测KGF对细胞生长曲线及细胞集落形成的影响.结果:MTT实验表明,KGF可刺激HaCaT细胞增殖,刺激作用呈浓度依赖性(r=0.981,P＜0.05);10 ng/mL KGF作用下HaCaT细胞的生长速度较对照组明显加快(P＜0.05),集落形成率较对照组增加(P＜0.05),且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富.结论:KGF具有显著的促HaCaT细胞增殖作用,银屑病皮损区域KGF表达增加可能是引起表皮过度增殖的重要致病因子.
关键词： 角质形成细胞生长因子 HaCaT细胞 银屑病 -
角质形成细胞在中耳胆脂瘤过度增殖中的作用
目的:研究基质金属蛋白酶9 (MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)、角质形成细胞生长因子(KGF)及角质形成细胞生长因子受体(KGFR)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨它们与角质形成细胞之间的相互作用及在中耳胆脂瘤上皮过度增殖中的作用.方法:通过免疫组织化学方法检测MMP9、VEGF、KGF、KGFR、增殖细胞核抗原(Ki-67)在50例中耳胆脂瘤组织和15例正常外耳道皮肤中的表达,以Ki-67作为胆脂瘤细胞增殖活性的标记物,来评估胆脂瘤上皮中角质形成细胞的增殖状态.结果:①中耳胆脂瘤上皮中VEGF和MMP9的平均光密度值高于正常外耳道皮肤,差异有统计学意义(均P＜0.01).②KGF及KGFR在中耳胆脂瘤组织中的表达量明显高于正常外耳道皮肤,差异具有统计学意义(均P＜0.01);随着胆脂瘤上皮中KGF及KGFR平均光密度值增加,Ki-67表达强度也相应地增加.③在MMP9和VEGF均阳性的胆脂瘤组织中,随着MMP9及VEGF平均光密度值增加,胆脂瘤组织中KGF表达也相应地增加.结论:MMP9、VEGF、KGF及KGFR蛋白在中耳胆脂瘤组织的高度增殖中起重要作用,并且VEGF、MMP9与KGF蛋白在胆脂瘤组织中的增殖中可能起协同作用.
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银屑平丸对银屑病急性期患者表皮组织VEGF、KGF和AREG的影响
目的 观察银屑平丸对银屑病急性期患者表皮组织双调蛋白(AREG)、角质形成细胞生长因子(KGF)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 将316例银屑病急性期患者按入院先后分为对照组和银屑平丸组.对照组口服阿维A、窄谱中波紫外线局部(或全身照射)及外用卤米松软膏,银屑平丸组在此治疗基础上加服银屑平丸.采用皮损面积和严重程度指数(PASI)对病变皮肤评分;ELISA法定量测定治疗前后表皮组织中AREG、KGF和VEGF蛋白量;测定表皮微血管密度(MVD),流式细胞仪检测静脉血清体外培养人永生角质形成细胞株(HaCaT)细胞增殖和细胞周期,并观察临床疗效.结果 治疗4周后,银屑平丸组AREG、KGF、VEGF和PASI均显著降低,HaCaT细胞抑制率提高、S期细胞数降低,有效率为83.54%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 银屑平丸通过降低表皮组织AREG、VEGF含量,抑制KGF诱导的HaCaT细胞增殖来减少表皮细胞角化和皮下组织血管新生,降低微血管的异常增生而达到治疗银屑病急性期的目的.
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人乳头瘤病毒16 E5(HPV16 E5)蛋白抑制角质形成细胞生长因子诱导的细胞自噬
目的 研究人乳头瘤病毒16 E5(HPV16 E5)蛋白对角质形成细胞生长因子(KGF)诱导的细胞自噬的影响.方法 构建HPV16 E5蛋白真核表达载体pCI-neo-E5,采用LipofectamineTM 2000转染至HaCaT人角质形成细胞,实时定量PCR检测HPV16 E5 mRNA转录水平.转染pCI-neo-E5并以KGF刺激HaCaT细胞后,实时定量PCR检测自噬相关蛋白beclin l、自噬相关基因5(ATG5)、ATG7及LC3B mRNA的水平,Western blot法检测LC3BⅡ蛋白的表达量,免疫荧光技术检测LC3B的分布.结果 成功构建HPV16 E5真核表达载体pCI-neo-E5并可有效表达.角质形成细胞转染pCl-neo-E5,自噬相关蛋白mRNA的水平显著降低,抑制KGF诱导的LC3BⅡ表达水平升高和LC3B的聚集.结论 HPV16 E5蛋白通过下调自噬相关蛋白的表达,抑制KGF诱导的细胞自噬.
关键词： 人乳头瘤病毒 子宫颈癌 自噬 角质形成细胞生长因子
