双调蛋白在人体睾丸组织的表达特征

目的 确定双调蛋白在人体睾丸组织和精子的表达特征,比较双调蛋白在正常人和隐睾症患者睾丸组织的表达差异. 方法 收集正常睾丸组织、精液精子和隐睾症患者的睾丸组织,采用反转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)和免疫组织化学的方法检测双调蛋白的表达水平. 结果 双调蛋白在正常睾丸组织和精子均有表达,主要分布于睾丸长型精子细胞和成熟精子尾部;与正常睾丸组织比较,双调蛋白在隐睾组织的表达显著减少、隐睾组织生精小管的表达基本消失. 结论 在隐睾症睾丸中双调蛋白的表达显著减少,提示双调蛋白表达与睾丸发育有一定关系.

减少HCG诱导排卵剂量对卵泡液双调蛋白Areg及卵母细胞发育潜能的影响

目的 探讨依据诱导排卵日雌二醇(E2)水平减少人绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导排卵剂量对卵泡液双调蛋白(Areg)及卵母细胞发育潜能的影响. 方法 收集2013年4月～8月于本院生殖中心行体外受精/卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)助孕的185名患者卵泡液及临床资料,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测卵泡液Areg,化学发光法检测卵泡液HCG.根据HCG日E2水平阶梯式减少HCG诱导排卵剂量分为4组,分别为3 000U组(A组)、4 000U组(B组)、5 000U组(C组)和7 000U组(D组).比较各组实验室结局、卵泡液Areg和HCG水平. 结果 A组和B组获卵数分别与其他3组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);A组受精率高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05);A组、B组可用胚胎数多于C组、D组,差异有统计学意义(P＜0.05);4组卵裂率、优质胚胎率及卵泡液Areg水平差异无统计学意义(P＞0.05).A组卵泡液HCG水平低于C组、D组,B组低于D组,差异有统计学意义(P＜0.05).其中A组发生2例中度卵巢过度刺激综合征(OHSS). 结论 依据诱导排卵日E2水平,减少HCG诱导排卵剂量不影响卵泡液Areg的表达;卵泡液HCG水平与HCG诱导排卵剂量有关;对于卵巢高反应者HCG诱导排卵剂量降低至3 000U在临床上是可行的.

双调蛋白的结构、表达及生理功能研究进展

双调蛋白(amphiregulin)是表皮生长因子受体的配体.它的合成受多种内源性刺激和外源性刺激的影响.双调蛋白在多种组织器官中表达,参与了一系列生理过程,包括乳腺发育、胚胎着床、骨质形成、轴突生长、角化细胞增殖、女性生殖系统发育、肺、肾和前列腺的分支形态发生、精子发生、神经元和骨组织的发育和免疫功能的维持等.

双调蛋白对大鼠局灶性脑缺血-再灌注的影响

目的 观察双调蛋白(Areg)经侧脑室注射对大鼠局灶性脑缺血-再灌注(I/R)损伤的影响,并探讨其可能机制. 方法 取3个月龄健康雄性清洁级SD大鼠共96只,采用随机数字表法分为6组,每组16只.假手术组:只暴露颈总动脉及分叉处;I/R组:制作I/R模型;溶剂对照组:侧脑室注射标准蛋白质溶液(5 μl);Areg组:侧脑室注射Areg(2 μg/5 μl);AG1478组[AG1478,Areg的受体表皮生长因子受体(EGFR)的阻断剂]:侧脑室注射AG1478(2.5 μg/5 μl);Areg复合AG1478 (AAG)组:侧脑室给予AG1478(2.5 μg/5 μl),30 min后,再给予Areg(2 μg/5 μl).上述后4组在给药30 min后制备局灶性脑I/R损伤模型.再灌注24 h后,比较各组之间脑梗死体积、神经行为学评分及脑组织凋亡细胞数量变化;再灌注6 h后检测缺血脑组织内EGFR及蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平. 结果 与假手术组比较,I/R组的脑梗死体积、脑组织凋亡细胞数量明显增加,神经行为学评分降低(均P<0.05).与I/R组比较,Areg组的脑梗死体积、脑组织凋亡细胞数显著降低,神经行为学评分明显增加,EGFR和Akt的磷酸化水平明显增高(均P<0.05).与I/R组比较,AG1478组的脑梗死体积、细胞凋亡数量增加,EGFR和Akt的磷酸化水平降低(均P<0.05);与Areg组比较, AG1478组和AAG组的脑梗死体积、细胞凋亡数明显增加,EGFR和Akt的磷酸化水平、神经行为学评分明显降低(均P<0.05). 结论 Areg通过激活EGFR-Akt信号通路减少缺血脑组织的梗死体积、改善神经功能、抑制细胞凋亡,对I/R脑损伤具有一定的保护作用.

郁金银屑片对Balb/c裸鼠银屑病模型的实验研究

目的 观察郁金银屑片对Balb/c裸鼠银屑病模型皮损组织中角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)和双调蛋白(Amphiregulin,AREG)及两者基因表达的影响.方法 将36只Balb/c裸鼠随机分为空白对照组、模型组和郁金银屑组,除空白对照组外,另2组裸鼠均用10％普萘洛尔涂于背部皮肤,2次/d,连续1周的方法造银屑病模型.成模后郁金银屑组按0.25 g/kg剂量灌郁金银屑片混悬液治疗2周,空白对照组和模型组灌等量生理盐水.对裸鼠背部皮损进行银屑病皮损面积及严重程度指数(PASI)评分;以酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测皮损组织均浆液KGF和AREG的蛋白量,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测KGF mRNA和AREG mRNA的表达.结果 模型组和郁金银屑组造模后PASI评分、匀浆液中KGF和AREG明显升高,KGF mRNA和AREG mRNA高表达,与空白对照组比较,P＜0.05.在治疗2周后,模型组与同组治疗前比较,P＞0.05;郁金银屑组PASI评分、匀浆液中KGF和AREG降低,KGF mRNA和AREG mRNA低表达,与同组治疗前和模型组治疗后比较,P＜0.05,差异有统计学意义.结论 郁金银屑片治疗银屑病机制与降低表皮组织匀浆液中KGF和AREG、下调两者基因表达密切相关.

双调蛋白在人体子宫内膜组织中的表达特征

目的:研究双调蛋白在人体子宫内膜组织中的表达特征.方法:取增殖期和分泌期的人体子宫内膜,采用实时定量RT-PCR方法,检测双调蛋白mRNA在子宫内膜增殖期和分泌期的表达差异;采用原位杂交和免疫组织化学的方法,从基因和蛋白水平检测双调蛋白在人体子官内膜组织中的表达特征.结果:定量RT-PCR结果显示,双调蛋白mRNA在增殖期和分泌期的子宫内膜均有表达,在分泌期其表达量显著升高,是增殖期的32倍.原位杂交和免疫组织化学结果显示,双调蛋白主要分布于子宫内膜腺体,定位于细胞浆内;双调蛋白mRNA在增殖期和分泌期子宫内膜的表达分别为0.54±0.22和2.96±0.47(P<0.01);双调蛋白在增殖期和分泌期子宫内膜的表达分别为0.77±0.47和2.60±0.43(P<0.01).双调蛋白在分泌期子宫内膜中的表达显著升高,与荧光定量RT-PCR分析的结果相符.结论:双调蛋白在子宫内膜分泌期的表达显著增加,提示该蛋白可能与子宫内膜细胞分化或胚胎着床有关.

双调蛋白在肿瘤发生和进展中的作用

人类双调蛋白是一个含有84个氨基酸的糖蛋白,早于1980 年由Shoyab 从人乳腺癌细胞中发现并分离出来[1].双调蛋白作为表皮生长因子受体(epider-mal growth factor receptor ,EGFR) 的配体,在多种组织和器官中表达,并通过维持肿瘤细胞生长信号的自给自足、抑制肿瘤细胞凋亡、帮助肿瘤细胞获得无限复制潜能、维持血管生成、参与Warburg 效应、促进肿瘤组织侵袭和转移以及参与肿瘤治疗抵抗等效应,参与肿瘤的发生和进展.本文对人类双调蛋白在肿瘤发生和进展中的作用进行综述.

银屑平治疗寻常型银屑病的动物实验研究

目的 建立Balb/c裸小鼠寻常型银屑病动物模型,观察银屑平对其表皮组织中双调蛋白(AREG)、血管内皮生长因子(VEGF)及角质形成细胞生长因子(KGF)的影响.方法 Balb/c裸小鼠36只,随机分为模型对照组和银屑平A组、银屑平B组,三组均连续8d于小鼠头颈部、上肢、躯干和下肢4个部位皮肤涂咪喹莫特软膏的方法建模.末次给药造模第8天,银屑平A、B组按0.1 g/kg和0.5 g/kg剂量灌胃治疗10d,模型对照组灌等量生理盐水.于造模第8天和治疗第10天,采用皮损面积和严重程度指数(PASI)对动物头颈部、上肢、躯干和下肢4个部位皮肤病变情况进行评分;ELISA法定量测定表皮组织匀浆液中AREG、KGF、VEGF和血管内皮生长因子受体1 (VEGFR1)等指标含量.结果 银屑平A组、银屑平B组和模型对照组造模第8天PASI评分比较,差异无统计学意义(P＞0.05),灌胃治疗第10天时,银屑平A组、银屑平B组PASI评分均较模型对照组和同组造模第8天明显降低(P＜0.05),表皮组织匀浆液中AREG、KGF、VEGF和VEGFR1均低表达(P＜0.05).银屑平A组、银屑平B组组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 银屑平可能通过降低表皮组织匀浆液中AREG、KGF、VEGF含量,并有可能阻断VEGF与和VEGFR1结合,这对抑制表皮病变细胞角化和皮下组织血管新生,减轻受试动物银屑病样病理改变有肯定的干预作用.

双调蛋白反义重组腺病毒治疗乳腺癌的实验研究

目的:在人乳腺癌模型上探讨双调蛋白(AR)反义重组腺病毒的治疗作用.方法:人AR的cDNA被反向亚克隆入E1/E3缺失的5型腺病毒载体中而得到AdA4,AR反义mRNA的表达由CMV启动子控制.进而研究其对恶性转化人乳腺上皮细胞株NS2T2A1体外、体内增殖的作用.结果:乳腺癌NS2T2A1细胞被AR反义重组腺病毒感染后,AR蛋白质的表达被强烈地抑制.以MOI为200和400pfu/细胞的AdA4感染4天后,细胞体外增殖分别被显著地抑制至空病毒对照组的69.3%和49.8%(P＜0.02,P＜0.005).3次肿瘤内注射109pfu AdA4病毒,至第35天肿瘤体积只为对照组的40.6%(P＜0.005).结论:在此乳腺癌模型上,AR反义重组腺病毒可有效地用于针对AR的反义治疗策略,抑制肿瘤细胞的体外增殖及体内肿瘤生长.

双调蛋白诱导乳腺癌细胞表达尿激酶型纤溶酶原活化物

目的:在人乳腺癌模型上研究双调蛋白与尿激酶型纤溶酶原活化物表达之间的关系.方法:乳腺癌NS2T2A1细胞经双调蛋白反义cDNA质粒转染后经潮霉素B筛选获得表达双调蛋白反义RNA的AR-AS1及AR-AS3两个细胞克隆,转染空载体获得NS2T2A1 V对照细胞,接种至裸鼠皮下形成肿瘤.测定细胞及肿瘤uPA表达水平,并研究uPA与细胞侵袭性之间的关系.结果:AR-AS1及AR-AS3细胞体外及体内uPA表达均被抑制.外源性双调蛋白可刺激对照细胞uPA的表达,并部分恢复AR-AS1及AR-AS3细胞uPA的表达水平.双调蛋白反义cDNA质粒转染及抗uPA抗体均导致乳腺癌细胞体外侵袭性的降低.结论:在乳腺癌模型上,uPA表达与肿瘤细胞的侵袭密切相关.双调蛋白反义RNA表达可有效地抑制uPA的表达,进而抑制肿瘤细胞的侵袭性.

双调蛋白在厄洛替尼治疗EGFR野生型NSCLC中的预后价值研究

目的：探讨双调蛋白（ Amphiregulin, AREG)在厄洛替尼治疗表皮生长因子受体（ epidermal growth factor receptor, EGFR)野生型非小细胞肺癌（ non-small cell lung cancer, NSCLC)中的预后价值。方法收集2010年1月—2015年1月解放军171医院、宁波市第一人民医院和九江学院附属医院肿瘤科收治的40例EGFR野生型进展期NSCLC患者,采用免疫组织化学染色法检测AREG表达情况,并分析AREG与厄洛替尼疗效的相关性。结果40例中AREG阳性26例（AREG阳性组),AREG阴性14例（AREG阴性组),AREG表达与年龄存在相关性（χ2=4．050, P=0．0320)；客观有效率（OR)为22．5%（9/40),疾病控制率（DCR)为50．0%（20/40)。 AREG阳性组DCR显著高于AREG阴性组（61．5% vs 28．6%,P=0．0210),但两组OR比较无明显差异（26．9% vs 14．3%,P=0．7800)。 AREG阳性组无进展生存期及总生存期均明显优于AREG阴性组（7周vs 4周, P=0．0012；11．5个月vs 4个月, P=0．0003)。AREG阳性组皮疹发生率明显高于AREG阴性组（57．7% vs 21．4%,P=0．0350)。结论在EGFR野生型NSCLC患者中,AREG阳性者可从厄洛替尼治疗中获益,且皮疹发生率更高,提示AREG可作为野生型NSCLC患者接受EGFR-酪氨酸激酶抑制剂治疗的潜在分子标志物。

AR和HGF在大肠癌组织中的表达及其与肝转移的关系

目的 探讨双向调节因子(AR)和肝细胞生长因子(HGF)在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌发生、发展和肝转移的关系.方法 对来源于207例大肠癌病例的癌组织,采用免疫组织化学方法检测AR和HGF的表达水平.结果 AR和HGF的表达均与大肠癌瘤体大小、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及肝转移有关(P＜0.05),而与患者性别、年龄、部位无关(P＞0.05).AR和HGF在大肠癌的表达有中度相关(r=0.681,P＜0.01).结论 AR和HGF的过度表达在大肠癌的发病过程中具有协同效应,二者联合检测对大肠癌的发生、发展和肝转移有重要意义.

双调蛋白激活人体肝星状细胞并在非酒精性脂肪性肝炎中表达上调

双调蛋白过表达促进小鼠肠癌CT26细胞的体内生长

目的:探讨上皮细胞生长因子双调蛋白(amphiregulin,AREG)对小鼠肠癌CT26细胞生长的影响及其相关机制.方法:采用ELISA法检测不同小鼠肿瘤细胞中AREG蛋白的表达水平.将携带AREG基因的重组慢病毒载体转染至小鼠肠癌CT26细胞、黑素瘤B16细胞和肝癌LPC-Akt细胞,同时以转染空载体细胞作为阴性对照.采用MTT法、克隆形成实验和FCM法分别检测AREG过表达后细胞的体外增殖和克隆形成能力以及细胞周期进程.构建AREG过表达CT26细胞的小鼠移植瘤模型,观察小鼠体内移植瘤的生长情况,并且采用FCM法和实时荧光定量PCR法分别检测移植瘤组织中免疫细胞的分布情况以及趋化因子的表达水平.结果:小鼠肠癌CT26、黑素瘤B16和肝癌LPC-Akt细胞中AREG相对低表达.过表达AREG后,上述3种肿瘤细胞的体外增殖能力、克隆形成能力及细胞周期进程均无明显变化(P值均＞ 0.05).然而,在CT26细胞的小鼠移植瘤模型中,AREG过表达可明显促进肿瘤细胞的体内生长(P＜0.01),下调肿瘤组织中CD8+T细胞所占比例(P＜0.05),并降低与CD8+T细胞招募相关的CC趋化因子配体5(CC chemokine ligand 5,CCL5)的转录水平(P＜0.05).结论:AREG能够促进小鼠肠癌CT26细胞的体内生长,推测其作用机制可能与调控CD8+T细胞招募相关趋化因子,从而影响肿瘤微环境有关.

玻璃体内注射双调蛋白抗体对透镜诱导型近视豚鼠屈光度、眼轴长度及视网膜中双调蛋白表达的影响

目的 探讨双调蛋白(amphiregulin,AREG)对透镜诱导型近视豚鼠屈光度、眼轴长度以及视网膜中AREG蛋白和mRNA表达的影响.方法 选取2周龄健康英国三色短毛豚鼠30只,随机分为正常对照组、近视组、AREG低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各6只.除正常对照组外,其余组均右眼配戴-10.0 D透镜,左眼作为自身对照与正常对照组均不做任何处理,戴镜2周后分别测量各组的屈光度及眼轴长度.第3周开始,近视组豚鼠右眼玻璃体内注射Linger注射液3μL,低剂量组、中剂量组、高剂量组豚鼠右眼分别注射500mg·L-AREG抗体(R&D:MAB989-500)1 μL、2μL、3μL,对侧眼作为自身对照,不做任何处理,每周注射1次,连续注射3周,期间继续配戴眼镜,3周后分别测量各组豚鼠的屈光度和眼轴长度.采用免疫荧光标记法检测豚鼠视网膜AREG蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测豚鼠视网膜AREG mRNA的表达.结果 入组前各组豚鼠的初始屈光度及眼轴长度差异均无统计学意义(均为P＞0.05);与正常对照组相比,透镜诱导2周后近视组、低剂量组、中剂量组、高剂量组豚鼠右眼屈光度下降,眼轴延长(均为P ＜0.05);各组左眼屈光度和眼轴长度差异均无统计学意义(均为P＞0.05).玻璃体内注射AREG抗体3次后,与近视组相比,低剂量组屈光度和眼轴长度差异均无统计学意义(均为P＞0.05);中剂量组屈光度差异无统计学意义(P＞0.05),但眼轴缩短,差异有统计学意义(P＜0.01);高剂量组屈光度上升且眼轴缩短,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);各组对侧眼的屈光度和眼轴长度差异均无统计学意义(均为P＞0.05).免疫荧光标记法在各组豚鼠眼球后极部、赤道部以及后极部与赤道部之间的视网膜均检测到AREG蛋白,说明AREG主要分布在眼球视网膜组织,且无部位特异性.AREG蛋白在近视组豚鼠视网膜高表达,正常对照组低表达,玻璃体内注射AREG抗体后低剂量组、中剂量组和高剂量组AREG蛋白表达逐渐下降.将正常对照组视网膜AREG mRNA表达量标准化为100％,近视组、低剂量组、中剂量组、高剂量组右眼AREG mRNA表达量分别与标准化后的正常对照组比较得到目的基因的相对表达量.近视组AREGmRNA相对表达量高,正常对照组其次,低剂量组、中剂量组和高剂量组AREG mRNA的表达呈剂量依赖性下降.结论 玻璃体内注射AREG抗体后,豚鼠眼轴缩短,屈光度增加,视网膜中AREG蛋白和mRNA呈剂量依赖性表达下降.AREG在近视发生发展过程中起重要作用.

双调蛋白抗体对双眼诱导型近视豚鼠眼部的影响

目的 探讨双调蛋白抗体对双眼诱导型近视豚鼠眼轴长度、屈光度及后极部巩膜厚度等的影响.方法 60只三色短毛豚鼠随机分为5组:正常对照组、近视模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只.豚鼠双眼戴-10 D透镜诱导近视:正常组不作任何处理,戴镜2周后,低、中、高剂量组豚鼠右眼玻璃体内注射低、中、高剂量双调蛋白抗体,同时左眼玻璃体内注射同等剂量的乳酸钠林格注射液(buffer组),注射抗体前后持续戴镜.于戴镜前、戴镜后2周、注射3次抗体后测量豚鼠的屈光度和眼轴长度.注射3次抗体后,过碘酸雪夫染色法检测豚鼠眼球后极部视网膜、脉络膜及巩膜的厚度,实时荧光定量PCR和免疫荧光法检测视网膜中双调蛋白及表皮生长因子受体mRNA、蛋白的表达.结果 透镜诱导2周后,近视模型组与正常对照组比较眼轴长度增长、屈光度缩短,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).注射3次抗体后,与buffer组相比,低、中、高剂量组眼轴长度均缩短,屈光度均上升,后极部巩膜厚度均明显增加,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).各组后极部视网膜厚度无明显变化.实时荧光定量PCR结果和免疫荧光检测结果显示近视模型组及buffer组视网膜中双调蛋白mRNA和蛋白表达增加,高、中、低剂量组视网膜中双调蛋白mRNA和蛋白表达均下降,与buffer组相比,低剂量组视网膜中表皮生长因子受体表达下降(t=2.606,P=0.022).结论 在近视造模豚鼠的玻璃体内注射双调蛋白抗体后,豚鼠屈光度上升、眼轴长度明显缩短、后极部巩膜厚度增加,其机制可能与双调蛋白表达的减少有关.

食管鳞状细胞癌组织中表皮调节素、双调蛋白及表皮生长因子受体mRNA的表达

目的:检测表皮调节素、双调蛋白及表皮生长因子受体mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况.方法:用实时逆转录多聚酶链反应测定47例食管鳞状细胞癌及其正常组织中表皮调节素、双调蛋白和表皮生长因子受体mRNA的表达水平,并分析其与临床病理特征的关系.结果:与正常组织比较,食管鳞状细胞癌组织中表皮调节素表达水平差异无统计学意义(t=1.597,P=0.119),双调蛋白低表达(t=2.953,P=0.005),表皮生长因子过度表达(t=4.932,P<0.001);食管鳞状细胞癌组织中表皮调节素与临床分型有关(χ2=5.673,P=0.028),双调蛋白与性别有关(χ2=5.034,P=0.042).结论:表皮调节素、双调蛋白和表皮生长因子受体在食管鳞状细胞癌的发生发展中起一定作用.

双调蛋白及其在气道炎性疾病中作用的研究进展

Amphiregulin is a member of epidermal growth factor family,and is also one of the ligand of epidermal growth factor receptor,it participates in many physiological and pathological process by combining with EGFR.Researches have proved that AREG participates in asthma and airway inflammatory diseases caused by smoking and PM 2.5,and AREG plays an important role in the process of airway remodeling and inflammation.This paper mainly reviews the expression and function of AREG,and focus on it's research status in airway inflammatory disease.

银屑平丸对银屑病急性期患者表皮组织VEGF、KGF和AREG的影响

目的 观察银屑平丸对银屑病急性期患者表皮组织双调蛋白(AREG)、角质形成细胞生长因子(KGF)及血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法 将316例银屑病急性期患者按入院先后分为对照组和银屑平丸组.对照组口服阿维A、窄谱中波紫外线局部(或全身照射)及外用卤米松软膏,银屑平丸组在此治疗基础上加服银屑平丸.采用皮损面积和严重程度指数(PASI)对病变皮肤评分;ELISA法定量测定治疗前后表皮组织中AREG、KGF和VEGF蛋白量;测定表皮微血管密度(MVD),流式细胞仪检测静脉血清体外培养人永生角质形成细胞株(HaCaT)细胞增殖和细胞周期,并观察临床疗效.结果 治疗4周后,银屑平丸组AREG、KGF、VEGF和PASI均显著降低,HaCaT细胞抑制率提高、S期细胞数降低,有效率为83.54%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 银屑平丸通过降低表皮组织AREG、VEGF含量,抑制KGF诱导的HaCaT细胞增殖来减少表皮细胞角化和皮下组织血管新生,降低微血管的异常增生而达到治疗银屑病急性期的目的.