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比较多种细胞因子对培养的黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素合成的影响
目的:研究α-促黑素细胞刺激激素(α-MSH)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、内皮素-1(ET-1)以及干细胞生长因子(SCF)等多种细胞因子对人体黑素细胞的增殖、酪氨酸酶的活性以及黑素合成的影响.方法:分别采用MTT法、多巴氧化法、氢氧化钠裂解法和流式细胞仪测定细胞增殖情况、酪氨酸酶活性和黑素的含量以及黑素细胞的凋亡率,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)技术分析各种细胞因子与酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)和黑素细胞酪氨酸酶mRNA表达的关系.结果:加入bFGF和ET-172 h后,该两组黑素细胞的酪氨酸酶活性和合成黑素能力明显增强;而SCF、α-MSH对黑素细胞的酪氨酸酶活性及合成黑素能力无明显影响.bFGF、SCF、ET-1、α-MSH各组酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白-1 mRNA表达量均比空白对照组增加.而bFGF、SCF、ET-1、α-MSH 4组对黑素细胞的凋亡均无显著影响.结论:bFGF和ET-1对正常人黑素细胞的黑素细胞增殖及黑素生成都有增强作用.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 干细胞生长因子 内皮素-1 α-黑素细胞刺激素 黑素细胞 -
α-黑素细胞刺激素在自体中厚移植皮片中的表达
目的检测α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone,α-MSH)在人体自体中厚移植皮片中的表达,并与自身正常皮肤作对照,初步认识α-MSH在自体移植皮片过度色素沉着中的作用.方法利用免疫组织化学方法,检测人体自体中厚移植皮片与原供区及受区周围自体正常对照皮肤中α-MSH的蛋白表达,并行统计学分析.结果α-MSH的表达定位于表皮基底部黑素细胞、角朊细胞胞浆,在大部分自体中厚移植皮片中呈强阳性表达,表达率为61.1%,与自体正常对照皮肤中的表达差异有非常显著性意义(P＜0.01);α-MSH在受区与原供区周围正常对照皮肤中的表达差异无显著性意义.结论α-MSH在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用.
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α-黑素细胞刺激素对同种异体小鼠异位心脏移植排斥反应的抑制作用
目的观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对同种异基因小鼠移植心脏存活时间的影响,以了解其在移植免疫中的作用.方法小鼠颈部心脏移植的Cuff模型,腹腔给予α-MSH,观察移植心脏的存活时间和病理改变.结果移植小鼠给予α-MSH后,移植心脏的存活时间比对照组显著延长,心脏病理显著改善,其中以50μg组效果佳.结论α-MSH能抑制同种异基因小鼠的心脏移植排斥反应.
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新型α-黑素细胞刺激素类似物亲和力和生物学效应的测定
检测新型α-黑素细胞刺激素(α-MSH)类似物与受体的亲和力和生物学效应.构建黑皮质激素受体表达质粒,经测序鉴定后以磷酸钙-DNA共沉淀法转染HEK-293细胞,48 h后加入含900 μg·mL-1 G418的细胞维持液,稳定表达后以流式细胞仪检测.采用放射性配体结合分析测定新型α-MSH类似物对受体的亲和力,并以[3H]环磷酸腺苷(cAMP)测定盒检测新型α-MSH类似物作用细胞后的cAMP水平.结果显示,新型α-MSH类似物对MC1R,MC3R,MC4R及MC5R的抑制常数Ki分别为(0.159±0.040),(35.430±6.743),(19.293±2.780)和(2.230±0.670) nmol·L-1.其对MC1R,MC3R,MC4R及MC5R的EC50值分别为(0.45±0.07),(7.80±0.65),(2.55±0.23)和(0.33±0.09) nmol·L-1.新型α-MSH类似物是MC1R和MC5R高选择性的激动剂.
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新型α-黑素细胞刺激素类似物对内毒素休克小鼠的保护作用
目的:评价新型α-黑素细胞刺激素(α-MSH)类似物对内毒素休克小鼠的保护作用.方法:雌性BALB/c小鼠经腹腔注射(ip)1 μg脂多糖(LPS)和20 mg D-半乳糖胺(D-GalN)建立内毒素休克模型,30 min内ip给予2.5 mg·kg-1新型α-MSH类似物,同时设置α-MSH,[Nle4,D-Phe7]α-MSH(NDP-MSH)和磷酸盐缓冲液对照.取小鼠眼眶血分离血清,以ELISA法测定TNF-α和IL-1β含量,用Griess试剂检测NO.观察小鼠生存情况,取主要脏器做常规组织病理检查.结果:新型α-MSH类似物能明显延长内毒素休克小鼠存活时间,其中位生存时间为32 h;显著降低血清TNF-α,IL-1 β和NO水平(P＜0.01),并减轻重要脏器的炎症损伤.结论:新型α-MSH类似物对内毒素休克小鼠有显著的保护作用.
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α-黑素细胞刺激素及其新型类似物对内毒素血症小鼠产生组织因子途径抑制物的调节作用
目的 研究α-黑素细胞刺激素(α-MSH)及其新型类似物STY39对内毒素血症小鼠产生组织因子途径抑制物(TFPI)的调节作用.方法 按随机数字表法将雌性BALB/c小鼠分为8组,每组9只.经腹腔注射脂多糖(LPS)25 μg/kg和D-氨基半乳糖(D-Gal)100 mg/kg建立内毒素血症小鼠模型;对照组给予磷酸盐缓冲液;实验组于LPS刺激后1、2或3h分别腹腔注射2.5 mg/kg α-MSH或STY39.在LPS刺激后各时间点取眼眶血,并于8h后处死取肺、肝、肾等组织.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆TFPI含量,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组织中TFPI mRNA表达.结果 内毒素血症小鼠血浆TFPI含量(μg/L)于LPS刺激后4h开始升高(11.84± 1.55),8h达高峰(23.49±1.12);LPS刺激后1、2或3h给予α-MSH或STY39均可显著上调血浆TFPI含量,尤其在LPS刺激后1h给药效果好(LPS刺激后8h取血,α-MSH组:58.79±2.67比28.49±1.69,STY39组:71.08±2.13比28.49±1.69,均P＜0.01),且STY39的作用优于α-MSH(P＜0.01).正常小鼠各组织有少量TFPI mRNA表达;给予LPS刺激后各组织中TFPI mRNA表达升高,尤其在肺、肝和肾组织.LPS刺激后1h给予α-MSH或STY39能显著上调肺、肝组织TFPI mRNA表达(A值,α-MSH肺:51.10±2.89比32.43±2.51,STY39肺:72.11±3.48比32.43±2.51;α-MSH肝:43.21±2.12比29.29±2.06,STY39肝:66.82±1.76比29.29±2.06,均P＜0.01);LPS刺激后1h给予STY39能显著上调肾组织TFPI mRNA表达(A值:45.21±1.80比30.44±2.23,P＜0.01),而给予α-MSH则无明显作用(A值:24.61±1.98比30.44±2.23,P＞ 0.05);早期给予STY39对内毒素血症小鼠肺、肝、肾组织中TFPI mRNA表达的增强作用均优于α-MSH(均P＜0.01).结论 早期给予α-MSH或STY39能促进内毒素血症小鼠产生TFPI,且STY39优于α-MSH.
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α-黑素细胞刺激素体外对星形胶质细胞产生NO和前炎性细胞因子的影响
目的:研究α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对LPS诱导星形胶质细胞产生NO和前炎性细胞因子的影响,探讨α-MSH的抗炎作用机制.方法:分别用LPS或α-MSH+LPS处理体外培养的大鼠脑星形胶质细胞,用Griess试剂测定NO, 以MTT显色法检测IL-1、IL-6和TNF-α, 采用半定量RT-PCR检测MIF mRNA表达.结果:体外培养的星形胶质细胞在LPS刺激下产生NO、IL-1、IL-6、TNF-α和表达MIF mRNA显著增高; 若同时给予LPS和α-MSH, 可明显降低NO、IL-1、IL-6和TNF-α的产生以及MIF mRNA表达.结论:提示α-MSH抑制星形胶质细胞产生NO和前炎性细胞因子与其抑制中枢神经系统炎症反应密切相关.
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α-黑素细胞刺激素基因修饰的树突状细胞延长小鼠移植心脏的存活时间
为观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)基因修饰的树突状细胞(DC)抑制同种异型基因小鼠心脏移植排斥反应的效果,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入BALB/c小鼠骨髓来源的未成熟DC,制备了α-MSH基因修饰的DC(α-MSH-DC).在小鼠心脏移植前7 d,将α-MSH-DC输至受者C57BL/6小鼠体内,通过免疫组化方法观察供者α-MSH-DC在受者脾脏内存在的情况,用混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性.通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化.结果显示,α-MSH-DC在受者脾脏内存在时间延长,能诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,使移植心脏存活天数延长至(19.3±2.35) d,较PBS对照组的(7.0±0.33) d明显延长(P＜0.01).使受者小鼠血清IL-2和IFN-γ水平显著降低(P＜0.01),明显升高IL-4、IL-10水平 (P＜0.01).表明移植前输入供者α-MSH基因修饰的DC能延长同种异型基因心脏移植的存活时间.
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刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响
目的:通过检测刺鼠信号蛋白对自体移植皮片中黑素细胞功能的影响,进一步认识自体移植皮片过度色素沉着的原因.方法:建立过度色素沉着的自体移植皮片动物模型,皮片下分别注射刺鼠信号蛋白和生理盐水(对照组).利用RT-PCR方法检测刺鼠信号蛋白作用后自体移植皮片(n=12)黑素细胞中酪氨酸酶mRNA的表达,银染-丽春红染色后检测皮片中黑色素的含量,并与对照组(n=13)及正常豚鼠皮肤(n=5)相比较.结果:经刺鼠信号蛋白作用后,皮片中酪氨酸酶mRNA表达和黑素含量均明显减少,与对照组皮片和正常豚鼠皮肤相比其差异具有显著性意义(P＜0.01).结论:刺鼠信号蛋白在自体移植皮片中,能竞争性拮抗α-黑素细胞刺激素的黑素合成作用,使皮片着色能力降低.进一步证明了皮片移植后表皮细胞中α-黑素细胞刺激素的表达上调是皮片呈过度色素沉着的重要原因.
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α-黑素细胞刺激素处理的树突状细胞对小鼠心脏移植物存活时间的影响
目的:观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)处理的小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)预防同种异基因小鼠心脏移植排斥反应的效果.方法:在供者BALB/c小鼠DC培养的过程中加入α-MSH,用流式细胞仪分析DC的表型变化,用ELISA方法检测培养上清中IL-12的分泌水平.在同种异基因心脏移植前,分别将α-MSH处理后7 d的 DC(α-MSH-DC)和正常培养7 d的 DC(Day7-DC)输至受者C57BL/6小鼠体内,并另设输入PBS的小鼠为对照组,通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化.结果:α-MSH-DC表面分子的表达明显低于Day7-DC.α-MSH-DC培养上清中分泌IL-12 [(95.2±6.3) pg/ml]的水平也明显低于Day7-DC[(197.1±10.2) pg/ml].与PBS组[(7.17±0.26) d]相比,Day7-DC组[(6.25±0.61) d]的心脏移植物存活时间缩短;而α-MSH-DC组[(15.08±1.32) d]的心脏移植物存活时间明显延长.与Day7-DC和PBS组相比,α-MSH-DC组移植后血清IL-2和IFN-γ细胞因子水平明显降低.结论:α-MSH可以抑制体外培养的DC表面分子的表达和IL-12的分泌;α-MSH处理的DC在体内能延长同种异基因心脏移植物的存活时间.
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α-黑素细胞刺激素及其衍生物的研究进展
α-黑素细胞刺激素为一种内源性神经调节肽,由前阿黑皮素原经激素原转化酶催化而成,具有广泛的生物活性.综述α-黑素细胞刺激素及其衍生物在抗炎、保护心脑血管、抗菌、抗艾滋病及抗黑色素瘤中的作用及机制研究进展,旨在为相关新药的研发提供参考.
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α-黑素细胞刺激素对皮肤黑素合成的调控作用
皮肤色素异常是整形美容外科常见的问题,目前还无较好的解决方法,主要是对皮肤色素沉着的机制还不完全清楚.近年来,逐步认识到α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone,α-MSH)与黑素的合成有密切关系.α-MSH通过与其黑素细胞表面受体-黑皮素-1受体 (melanocortin-1 receptor,MC-1R)结合,使黑素细胞内酪氨酸酶的表达增加、活性增强,黑素合成增加并优先刺激优黑素细胞的合成;α-MSH还可促进黑素细胞的增生和树突形成及黑素小体的转运,同时α-MSH对黑素细胞的免疫保护作用及与其他外源性刺激因素协同作用而调控皮肤的色素沉着过程.α-MSH的内源性拮抗剂刺鼠信号蛋白(ASIP)可明显减弱其黑素合成作用,降低皮肤的着色能力.随着对α-MSH调控黑素合成作用的更进一步了解,必将为解决临床上获得性色素沉着或色素脱失性疾病提供一种新的治疗方法.
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α-黑素细胞刺激素对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度的影响
目的:探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响. 方法:从正常人包皮分离并纯培养黑素细胞,用α-MSH处理纯培养的人表皮黑素细胞,用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移,激光共聚焦扫描显微镜检测[Ca2+]i . 结果: α-MSH可诱导黑素细胞迁移,并使[Ca2+]i浓度升高. 结论: α-MSH可能通过诱导黑素细胞内的Ca2+浓度升高,从而促进黑素细胞的迁移.
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α-黑素细胞刺激素的药理作用研究进展
α-黑素细胞刺激素(αt-MSH)是来源于阿黑皮素原的一种神经内分泌免疫调节肽,在中枢神经和外周器官都有分布,具有广泛的生理活性,近年来对其开展了大量的研究,取得了良好的进展.本文综述了其抗炎、抗黑色素瘤、退热、保护皮肤、抑制肥胖、抗艾滋病等方面的药理作用研究进展,旨在为相关新药的研发提供参考.
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α-黑素细胞刺激素在不同实验动物表皮中的表达及意义
[目的]初步研究α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hormone,α-MSH)在不同实验动物表皮中的表达并阐明其意义,为色素障碍性皮肤病动物实验提供新的理论依据.[方法]对4组不同正常实验动物的表皮标本进行组织切片,应用免疫组织化学技术,观察α-MSH在4组不同实验动物表皮中的表达.[结果]α-MSH在白色昆明小鼠毛囊及白色FMN豚鼠表皮中呈阴性表达,在C57BL/6J小黑鼠毛囊黑素细胞及棕黄色HARTLY豚鼠表皮黑素细胞中呈阳性表达.[结论]白色昆明小鼠及白色FMN豚鼠适宜做色素增加动物实验研究,C57BL/6J小黑鼠及棕黄色HARTLY豚鼠适宜做色素减退动物实验研究;α-MSH可做为观测色素代谢障碍性疾病动物实验研究的一个重要指标.
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桑白皮多酚对B16细胞内黑色素生成的影响及其机制
目的 研究桑白皮多酚( polyphenol from Cortex Mori, CMP)对小鼠B16细胞内黑色素生成的影响,并探究其作用机制.方法 体外培养小鼠B16 细胞,构建α-黑素细胞刺激素( α-MSH)诱导的黑色素高表达细胞模型. CMP 干预B16细胞,MTT法测定细胞活性;分别利用NaOH裂解法和L-Dopa氧化法,分析细胞内黑色素生成含量和酪氨酸酶活性的变化;Western blot 和实时荧光定量 PCR 法分别测定B16细胞中酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)、小眼畸形相关转录因子(MITF)的蛋白质和mRNA水平.结果 CMP对α-MSH诱导的B16细胞内黑色素生成及酪氨酸酶活力均具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈量效关系.当CMP浓度为20 mg ·L-1时,对细胞内黑色素生成及酪氨酸酶活性抑制率分别为52.95% 、32.85% ,阳性对照熊果苷(100 mg·L-1)的抑制率分别为17.29% 、16.75% ,表明CMP对黑色素生成的抑制效果强于熊果苷.与α-MSH模型组相比,CMP干预后细胞内TYR、TRP-1、TRP-2、MITF的mRNA和蛋白表达被明显抑制(P<0.05).结论 CMP明显抑制α-MSH诱导黑色素的生成,其机制可能是通过调控 TYR、TRP-1、TRP-2、MITF mRNA和蛋白表达,进而抑制酪氨酸酶活性实现的.
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不同中波紫外线对豚鼠皮肤色素沉着及α-黑素细胞刺激素表达的影响
目的 探讨不同剂量定向中波高能紫外线及311 nm窄谱中波紫外线(NB-UVB)照射对豚鼠皮肤色素沉着及表达α-黑素细胞刺激素(α-MSH)的影响.方法 以正常棕黄色豚鼠为实验模型,分为定向中波高能紫外线高、低剂量组,NB-UVB高、低剂量组及空白对照组进行照射,分别采用肉眼评估及黑素颗粒染色(Fontana-Masson法)研究其致色素沉着作用;通过免疫组化法检测豚鼠皮肤中的α-MSH表达情况.结果 各组的色素沉着评分、黑素颗粒含量差异均有统计学意义(P<0.01),定向中波高能紫外线高、低剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于NB-UVB组(P<0.05),且NB-UVB高剂量组高于低剂量组(P<0.05);各组的α-MSH免疫组化计分差异有统计学意义(P<0.01),定向中波高能紫外线组高于NB-UVB组(P<0.01),但每种光源不同剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 定向中波高能紫外线在致色素沉着作用方面优于NB-UVB;两种紫外线均可促进表皮中α-MSH的表达,且定向中波高能紫外线作用更为显著.
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α-黑素细胞刺激素抑制氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管的生成
背景 视网膜新生血管形成(RNV)可发生于多种眼病,导致视网膜出血甚至脱离,抑制病理性RNV已逐渐成为眼科疾病治疗中的重点.α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对视网膜发育过程中的生理性血管生成有抑制作用,但其在病理性RNV方面的作用尚未见报道. 目的 以氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠为模型,研究玻璃体腔注射不同质量浓度的α-MSH对病理性RNV的作用. 方法 选取健康清洁级7日龄C57BL/6J幼鼠40只,应用随机数字表法随机分为OIR+0.33μg/μl α-MSH组、OIR+1.67 μ.g/μl α-MSH组、OIR+3.30 μg/μlα-MSH组、OIR组和正常对照组,每组8只.不同剂量α-MSH干预组和OIR组幼鼠在氧体积分数(75±2)％的高氧环境下饲养5d,然后在普通空气环境中饲养5d,正常对照组幼鼠则在普通空气环境中饲养10d.各组取17日龄鼠,球后静脉注射高相对分子质量异硫氰酸葡聚糖(FITC-dextran),制备视网膜铺片,观察视网膜的血管形态,计算无灌注区面积相对于整个视网膜的面积.对小鼠眼球行石蜡切片和苏木精-伊红染色,计数突破内界膜突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数. 结果 视网膜铺片结果显示,正常对照组、OIR组、OIR+O.33 μg/μl α-MSH组、OIR+1.67 μg/μl α-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组视网膜无灌注区相对面积分别为(0.00±0.00)％、(23.01±3.39)％、(18.14±7.20)％、(15.64±7.07)％和(7.62±6.52)％,各组间视网膜无灌注区相对面积总体比较,差异有统计学意义(F=19.635,P＜0.05);其中OIR组无灌注区相对面积显著高于OIR+3.30 μg/μl α-MSH组,差异有统计学意义(t=4.293,P＜0.01).组织病理学检查结果显示,正常对照组、OIR组、OIR+0.33 μg/ μl α-MSH组、OIR+ 1.67 μg/μl α-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组突入玻璃体腔的血管内皮细胞核数分别为(0.00±0.00)、(11.45±4.26)、(6.35±2.34)、(4.96±1.79)和(1.03±1.25)个.各组突入玻璃体腔的新生血管内皮细胞核数总体比较,差异有统计学意义(F=147.87,P＜0.05);其中OIR组突入玻璃体腔新生血管内皮细胞核数显著高于OIR+0.33μg/μl α-MSH组、OIR+ 1.67 μg/μlα-MSH组和OIR+3.30 μg/μl α-MSH组,差异均有统计学意义(均P＜0.001). 结论 α-MSH可减少OIR小鼠模型视网膜中无灌注区的相对面积和视网膜新生血管核数,其对病理性RNV的抑制作用呈剂量依赖性.
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α-黑素细胞刺激素对早期糖尿病大鼠视网膜血管渗漏的保护作用
背景 糖尿病视网膜病变(DR)的主要病理基础是视网膜的微血管变化和炎性改变.研究认为α-黑素细胞刺激素(α-MSH)玻璃体腔注射可对视网膜脉络膜组织发挥抗氧化应激和抗凋亡作用,从而改善血-视网膜屏障(BRB)功能,但缺乏组织学研究的验证.目的 研究α-MSH对视网膜血管渗漏的改善作用.方法 应用随机数字表法将清洁级SD大鼠90只随机分为正常对照组、糖尿病(DM)模型组和α-MSH组,DM模型组和α-MSH组大鼠采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)法制备模型,正常对照组大鼠同法注射枸橼酸钠缓冲液.α-MSH组大鼠分别于造模后1周和3周玻璃体腔注射3.3 μg/μl α-MSH 3 μl,正常对照组大鼠同法注射生理盐水3μl,DM模型组不行玻璃体腔注射.造模后第5周,按照45 mg/kg的剂量经鼠尾静脉注射30 mg/ml伊文思蓝溶液,注射后2h每组取2只大鼠制备视网膜铺片,于荧光显微镜下观察视网膜血管形态;收集各组8只大鼠内眦部血液,检测BRB渗漏状况;用37℃枸橼酸钠缓冲液行左心室灌流,处死大鼠,分离大鼠视网膜,透射电子显微镜下观察脉络膜和视网膜血管超微结构的变化;采用实时定量PCR法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、闭合蛋白(occludin)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的相对表达水平.结果 DM模型大鼠体质量明显降低,饮水量明显增多;造模后3d和5周,DM模型组大鼠的血糖分别为(29.69±4.77) mmol/L和(24.64±2.72) mmol/L,DM模型成功建立.视网膜铺片显示,DM模型组大鼠视网膜血管走行异常,血管壁大量伊文思蓝渗漏,而α-MSH组大鼠视网膜血管形态接近正常对照组.造模后5周,DM模型组大鼠视网膜伊文思蓝的渗漏量为(10.04±8.18) μl/(g·h),明显多于α-MSH组的(2.62±3.73) μl/(g·h)和正常对照组的(3.10±1.13) μl/(g·h),差异均有统计学意义(P=0.035、0.041).α-MSH组大鼠脉络膜和视网膜血管的超微结构接近正常对照组,而DM模型组大鼠脉络膜血管内皮细胞肿胀,视网膜色素上皮(RPE)空泡样变性.此外,DM模型组大鼠视网膜中ICAM-1 mRNA和TNF-αmRNA水平明显高于α-MSH组和正常对照组,而occludin mRNA的相对表达水平明显低于o-MSH组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).3个组大鼠视网膜中VEGF mRNA相对表达量的整体比较,差异无统计学意义(F=0.791,P=0.466).结论 在STZ诱导的DM模型大鼠中,玻璃体腔注射α-MSH可通过减少视网膜血管的渗漏,改善脉络膜和视网膜血管的超微结构,下调视网膜中促炎因子的表达和上调细胞间紧密连接成分的表达发挥对视网膜的保护作用.
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α-黑素细胞刺激素对谷氨酸诱导的视网膜兴奋性毒性的保护作用
背景 视网膜中谷氨酸异常增高是主要致盲性眼病的基本病理机制之一,但目前仍缺乏一种针对谷氨酸诱导的视网膜兴奋性毒性的有效保护措施.研究证明腹腔注射α-黑素细胞刺激素(α-MSH)可拮抗谷氨酸诱导的大脑海马区神经元的凋亡,但其对视网膜疾病的保护作用尚未证实. 目的 研究α-MSH对谷氨酸引起的视网膜兴奋性毒性的保护作用. 方法 用胚胎第9天(E9)的鸡视网膜建立组织块培养体系.分别收集体外培养第3、5、7天的视网膜组织块及第12、14、16天(E12、E14、E16)的鸡胚视网膜各3块,进行常规苏木精-伊红染色,观察各标本的视网膜形态及组织结构,并用real-time PCR法分别检测不同培养时间点视网膜组织块中α-MSH受体(MCRs)表达量的动态变化.将视网膜组织块分为谷氨酸刺激组、α-MSH+谷氨酸刺激组以及正常培养组,分别用谷氨酸及α-MSH+谷氨酸处理48 h,正常培养组未做处理,用TUNEL染色法检测各组视网膜组织块中细胞凋亡情况,并进行定量分析；real-time PCR法检测各组视网膜组织块中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达. 结果 培养3、5、7d视网膜组织块中各层组织结构与E12、E14和E16的视网膜组织结构相似.MC1R mRNA在E9、E12、E14和E16鸡视网膜中的表达量明显低于出生后第1天(P1),差异均有统计学意义(均P=0.000)；MC5R mRNA在E9的表达量明显低于E12及E14,差异均有统计学意义(均P=0.000),从E14至P1则逐渐降低；而MC1R mRNA和MC5R mRNA在培养不同时间视网膜组织块中的表达呈现同样的规律.TUNEL染色显示,谷氨酸刺激鸡胚视网膜组织48 h后,视网膜内核层和神经节细胞层细胞大量凋亡,外核层亦有少量凋亡细胞.DAPI染色结果表明,视网膜各层排列紊乱,但α-MSH+谷氨酸刺激组视网膜结构比较规则.定量分析结果表明,谷氨酸刺激组鸡胚视网膜每张切片的平均凋亡细胞数量为(601±24)个,α-MSH+谷氨酸刺激组为(62±16)个,正常对照组为(72±13)个,各组凋亡细胞数量总体比较差异有统计学意义(F=1422.890,P=0.000)；α-MSH+谷氨酸刺激组凋亡细胞数量明显少于谷氨酸刺激组,差异有统计学意义(P=0.000).谷氨酸刺激组视网膜组织块中GFAP mRNA的相对表达量为2.23±0.06,α-MSH+谷氨酸刺激组为1.14±0.15,正常对照组为1.05±0.04,组间总体差异有统计学意义(F=82.216,P=0.000).谷氨酸刺激组GFAP mRNA的表达量是正常对照组的2.1倍,差异有统计学意义(P=0.000).α-MSH+谷氨酸刺激组的GFAP的表达量较谷氨酸刺激组显著下调,差异有统计学意义(P=0.000),但与正常对照组相比差异无统计学意义(P=0.553). 结论 α-MSH在视网膜组织块中大幅度降低谷氨酸诱导的兴奋性毒性,这种保护作用可能是通过抑制谷氨酸诱导的胶质细胞反应性增生而引起的.
