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糖尿病大鼠早期BRB功能破坏及玻璃体腔内注射rHu-EPO对BRB的保护作用
目的:研究早期糖尿病大鼠血-视网膜屏障(blood-retinal barrier,BRB)功能破坏情况,探讨玻璃体腔内注射重组人促红细胞生成素(rHu-EPO)对BRB功能的保护作用.方法:采用35只大鼠分为正常对照组、DM2、4、8治疗组和对照组,正常对照组仅和DM2组同时测定BRB功能,DM组采用链-脲佐菌素注射法建立动物模型,DM治疗组采用玻璃体腔内注射rHu-EPO进行治疗,每周治疗3次,在预定时间段采用伊凡思蓝(Evans blue,EB)渗漏法测定BRB功能.结果:DM2、4、6对照组标准化EB含量均高于正常对照组(P＜0.05),且DM4对照组标准化EB含量高于DM2对照组(P＜0.05),DM6对照组标准化EB化疗高于DM4对照组(P ＜0.05);DM2、DM4、DM8三治疗组EB标准化含量显著降低(P＜0.05);组内比较,DM2、DM4、DM8治疗组组间均无统计学差异(P＞0.05).结论:糖尿病早期大鼠BRB功能出现破坏,随着时间延长,破坏加重,玻璃体腔内注射rHu-EPO对BRB有保护作用.
关键词： 血-视网膜屏障 糖尿病 重组人促红细胞生成素 玻璃体腔内注射 -
当归补血汤加味对GK大鼠血-视网膜屏障保护作用的实验研究
目的:通过对GK大鼠早期视网膜病变进行评价,以明确糖尿病大鼠早期血-视网膜屏障的渗漏情况,并进一步探讨当归补血汤加味对血-视网膜屏障的保护作用.方法:24周龄GK大鼠随机分为模型组、导升明组、中药低剂量组、中药高剂量组,Wistar大鼠设为正常对照组.连续相对固定时间灌胃3个月.用伊凡思蓝(EB)方法检测视网膜血管渗透性.结果:模型组及各治疗组的血糖、血脂高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)；模型组大鼠视网膜组织中EB的渗透量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),经过治疗后,视网膜组织中EB的渗透量下降,其中中药高剂量组EB的渗透量与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:当归补血汤加味对GK大鼠的血糖、血脂基本无影响,并能降低GK大鼠血-视网膜屏障的渗漏,从而对糖尿病视网膜早期病变具有保护作用.
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血管内皮生长因子在次声作用后的表达及其与血-视网膜屏障破坏的关系
目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在次声暴露后大鼠视网膜的表达及其与次声暴露的关系.方法免疫组织化学法研究不同时间次声暴露VEGF在视网膜各层的表达情况.结果各实验所有视网膜组织中,VEGF的表达随次声暴露的延长而有一定程度的加深.表现为棕黄色阳性染色弥漫分布于神经节细胞层和内核层内.血管分布的区域阳性染色分布较集中.可见表达于内皮细胞的细胞浆内和(或)细胞膜上呈棕黄色圆形,环状分布或不规则分布的颗粒.阴性对照未见阳性染色.结论次声作用导致大鼠视网膜组织VEGF表达不同程度地升高,与次声所致血-视网膜屏障的损害密切相关.
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丛生蛋白(Clusterin)与眼病的关系
丛生蛋白(clusterin)作为一种多功能分泌糖蛋白,存在于人体的不同组织中,有多种生理功能.Clusterin在眼组织及细胞中的重要作用,表现在可保护视网膜血管内皮细胞和视网膜色素上皮细胞,减少细胞凋亡,而且能增加闭锁小带合成,促进角膜上皮细胞增生和诱导星形胶质细胞、神经元细胞分化,因此一定浓度的clusterin是维持视网膜及角结膜上皮细胞稳定所需要的.鉴于clus-terin在维持血-视网膜屏障和眼表组织结构稳定中的作用,clusterin被认为是糖尿病视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等眼底疾病的潜在药物治疗靶点,同时也为治疗假性剥脱性青光眼、Stevens综合征等多种眼前节疾病提供了新思路和新方法.
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糖尿病血-视网膜屏障破坏的机制研究进展
血-视网膜屏障破坏所致的血管渗漏是糖尿病视网膜病变视力下降的主要原因,血管内皮细胞以及周围基质成分所构成的视网膜内屏障是受累的主要部位,血管内成分可以跨过受损的细胞间连接间隙,或通过细胞的吞饮囊泡的形态移动到组织间隙,这两种方式都在糖尿病视网膜病变中存在.内皮细胞间结构的破坏,吞饮方式的增加与高血糖异常代谢所致的氧化应激、炎症反应,以及周围其他细胞如周细胞、胶质细胞的凋亡,异常活化,以及由各种细胞所分泌的细胞因子如血管内皮生长因子(VEFG)和基质金属蛋白酶(MMP)等有密切的关系.
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糖尿病视网膜病变血-视网膜屏障的损伤机制
糖尿病严重影响了视网膜微循环,从而引起一系列组织结构的病理改变.这些改变终可导致内皮细胞过度增生,血管通透性改变,异常的视网膜血管形成并发视力减退.本文阐述了高血糖对视网膜微血管系统的影响,从细胞功能和分子生物学的角度阐明高血糖所导致的细胞损伤效应.高血糖可通过影响细胞连接功能、诱导细胞凋亡以及改变细胞间的相互作用等方式对视网膜血管细胞造成损伤.这将为人们了解糖尿病视网膜病变发生发展中的分子及细胞缺陷提供新思路.
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血管活性因子在糖尿病视网膜病变血-视网膜屏障损伤中的作用
糖尿病视网膜病变是糖尿病的严重并发症之一,其早期的病理基础是血-视网膜屏障的破坏,由此引起的黄斑水肿是导致视力丧失的主要原因之一.多种血管活性因子如血管内皮生长因子、色素上皮衍生因子、血小板源性生长因子、蛋白激酶C、肿瘤坏死因子α、转化生长因子β及血管紧张素Ⅱ等的异常表达是引起血-视网膜屏障损伤的直接原因.
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星形胶质细胞与血-视网膜屏障
星形胶质细胞是脊椎动物视网膜中主要的神经胶质细胞.随着细胞生物学和分子生物学研究的深入,逐渐发现视网膜内的星形胶质细胞与血-视网膜内屏障(inner blood-retinal barrier,iBRB)密切相关.星形胶质细胞是诱导血管内皮间紧密连接和维持iBRB的结构基础.因此,对视网膜星形胶质细胞的屏障特性进行深入的研究,将有助于全面地认识视网膜血液屏障系统的结构及功能,为诸多BRB功能受损的眼科疾病的预防及治疗提供新的动态.
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青葙子提取物对小鼠糖尿病视网膜病血-视网膜屏障的保护作用及机制
目的 观察青葙子提取物(CAE)对链脲佐菌素(STZ)诱导的C57小鼠糖尿病视网膜病(DR)血-视网膜屏障(BRB)的改善作用,并进一步研究其可能机制.方法 采用STZ诱导C57小鼠建立DR模型,然后给予DR小鼠CAE 100 mg/kg干预;通过检测视网膜组织白蛋白(Albumin)渗漏和血管内皮生长因子(VEGF)表达观察CAE对DR小鼠BRB破坏的影响;采用Westem blot检测视网膜组织Claudin-1、Claudin-5、Occludin、ZO-1及p-NFκB、IκB、p-IKK的蛋白表达水平;采用ELISA检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6含量.结果 CAE能够逆转DR小鼠视网膜组织Albumin渗漏增加和VEGF表达的升高(P＜ 0.01);CAE能够上调DR小鼠视网膜组织降低的紧密连接蛋白Claudin-1、Claudin-5、Occludin表达(P＜0.05或P＜ 0.01),同时能够抑制NFκB信号通路的激活(P＜0.01),并下调DR小鼠血清中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P＜0.01).结论 CAE具有保护STZ诱导DR小鼠BRB的活性,其机制为保护DR中减少的紧密连接蛋白表达,同时抑制了DR中炎性信号通路的激活.
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鼓槌石斛对小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变的改善作用及其机制研究
目的 观察鼓槌石斛乙醇提取物(ethanol extract of Dendrobium chrysotoxum,EEDC)对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病小鼠非增殖性糖尿病视网膜病变(NPDR)的改善作用及其机制.方法 采用STZ诱导小鼠发生糖尿病,进而建立糖尿病并发症NPDR实验动物模型,再给予EEDC进行干预.采用视网膜组织伊文思蓝渗漏实验观察NPDR小鼠中血-视网膜屏障(BRB)的破坏情况;采用real-time PCR (RT-PCR)检测视网膜组织中白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)及早期生长反应因子(Egr-1)、组织因子(TF)、纤溶酶原激活物抑制剂1(Serpine 1)的基因表达;进一步采用酶联免疫实验(ELISA)检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine 1的量.结果 与对照组相比,模型组小鼠视网膜组织伊文思蓝渗漏量明显增加,EEDC能够减少视网膜组织伊文思蓝渗透量;EEDC能够显著降低模型小鼠视网膜组织中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α及Egr-1、TF、Serpine 1的基因表达;EEDC能够明显下调模型小鼠血清中增加的IL-1β、IL-6、TNF-α及TF、Serpine 1的量.结论 EEDC具有改善STZ诱导小鼠NPDR的作用,其机制为通过抑制NPDR小鼠视网膜和血清中增加的炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及与凝血/纤溶相关基因TF、Serpine 1的基因表达,缓解BRB的破坏,从而发挥改善NPDR的作用.
关键词： 鼓槌石斛 糖尿病 非增殖性糖尿病视网膜病变 血-视网膜屏障 炎性因子 -
肿瘤坏死因子-α与糖尿病视网膜病变关系的研究进展
肿瘤坏死因子(TNF)-α通过其细胞膜上的受体在免疫和非免疫系统中发挥着许多不同作用.研究表明,糖尿病视网膜病变患者血清及玻璃体视网膜局部均可检测到TNF-α,且随病变进展血清中TNF-α水平升高.推测TNF-α可能通过直接损伤血-视网膜屏障,提高视网膜血管通透性,诱导其他细胞因子释放,提高靶细胞的反应性,以及诱导、加重胰岛素抵抗的产生,在糖尿病视网膜病变的发生、发展中起非常重要的作用.
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糖尿病性黄斑水肿的发病机制及治疗进展
糖尿病性黄斑水肿( diabetic macular edema, DME)是导致糖尿病患者中心视力受损的重要原因之一, DME发病机制复杂, 主要是由于血 -视网膜屏障破坏, 血管通透性增加所致.血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor, VEGF)及各种炎症因子共同参与了 DME 的病理发展过程.激光光凝和抗VEGF治疗是目前治疗DME的有效方法, 玻璃体腔内注射糖皮质激素也被广泛应用.本文就DME的发病机制及治疗进展做一综述.
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Bevacizumab对早期糖尿病大鼠血-视网膜屏障破坏的保护作用
目的 探讨抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体Bevacizumab玻璃体腔注射对早期糖尿病大鼠血-视网膜屏障(BRB)破坏的保护作用.方法STZ诱导建立糖尿病大鼠模型,分为正常对照组,糖尿病组,药物对照组及药物干预组.建模2w的糖尿病大鼠用于实验.药物干预组玻璃体腔内注入Bevacizumab,注药后1 w,采用EB法测定BRB破坏程度.结果糖尿病组大鼠视网膜标准化EB质量分数值明显高于正常对照组(P＜0.01).与糖尿病药物对照组相比,药物干预组大鼠视网膜标准化EB质量分数值明显降低(P＜0.01).结论早期糖尿病大鼠出现BRB破坏；抗VEGF抗体Bevacizumab对早期糖尿病视网膜病变的BRB破坏有显著的保护作用.
关键词： 糖尿病 血-视网膜屏障 bevacizumab -
急性高眼压后大鼠视网膜缺氧诱导因子-1α的上调促进了血-视网膜屏障损伤
目的:观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在大鼠急性高眼压后血-视网膜屏障(BRB)损伤中的作用.方法:大鼠随机分为正常对照组、假手术组和急性高眼压组.用免疫组织化学检测视网膜HIF-1α的表达；用分光光度计定量视网膜伊文思蓝(EB)的含量；给予HIF-1α抑制剂2-甲氧基雌二醇(2ME2)干预后再次检测视网膜HIF-1α的表达和定量视网膜EB的含量.结果:HIF-1α免疫组织化学结果显示视网膜HIF-1a在对照组未见阳性表达,在急性高眼压后3 h HIF-1α阳性产物增多,12h时达高峰,然后逐渐减少；在3h和1d时视网膜周围部HIF-1α阳性产物明显比中央部多；各时间点HIF-1α阳性产物主要见于节细胞层,3h和12 h HIF-1α阳性表达物还见于内核层.EB定量结果显示急性高眼压后的早期BRB已经受破坏,之后逐渐恢复,而且存在部位差异.2ME2干预后,免疫组织化学和EB定量显示在相同时间点、相同部位视网膜的HIF-1α表达以及EB渗漏量均明显减少.结论:急性高眼压后大鼠视网膜HIF-1α的上调促进了血-视网膜屏障损伤.
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伊文思蓝检测急性高眼压后大鼠血-视网膜屏障的变化
目的:检测急性高眼压后大鼠血-视网膜屏障(BRB)的改变.方法:大鼠随机分为正常对照组、实验对照组和实验组（急性高眼压模型）.动物分别存活3h、12 h、1d、3d、7d,处死前注射伊文思蓝(EB),共聚焦显微镜检测视网膜铺片和切片中EB的分布；用分光光度计定量视网膜EB的含量.结果:在急性高眼压后视网膜中可见,EB红色荧光斑点主要分布在节细胞层,3h、12h和1d还见于内核层.EB红色荧光斑点在视网膜中央部3h时开始增多,12h达高峰,然后逐渐减少；在视网膜周围部3h时多,然后逐渐减少.进一步定量检测EB渗漏量呈相同的时空改变.结论:大鼠BRB在急性高眼压后的早期损伤更明显,晚期逐渐恢复；视网膜周围部先于中央部出现BRB严重破坏；BRB损伤主要分布于节细胞层.
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兔眼低剂量SonoVue超声造影的可行性及安全性观察
目的 探讨不同机械指数(MI)条件下低剂量SonoVue超声造影在眼部应用的可行性及对兔眼血-视网膜屏障通透性的影响,评价其在眼部应用的安全性.方法 16只新西兰白兔分为4组:A组(正常对照)、B组(MI=0.1)、C组(MI=0.3)、D组(MI=0.1联合瞬间爆破),造影剂剂量为1.2 mL.由QontraXt软件获得兔眼球壁超声造影的时间.强度曲线,归纳曲线特征,经SPSS软件对曲线的4个参数值进行统计分析.兔处死后取正常眼及实验眼做石蜡切片,行苏木素-伊红(HE)染色和白蛋白免疫组织化学染色,观察视网膜结构及血管渗漏情况.结果 采用低剂量SonoVue超声造影可实时观察到球后血管、球壁及眶组织增强至消退的动态过程.球壁灌注的时间-强度曲线陡直上升后迅速达到峰值,再缓慢下降至造影前水平.B组与C组间4项参数值的差异无统计学意义(P＞0.05).HE染色显示各组视网膜组织结构均正常.白蛋白免疫组织化学染色法显示染色均局限于脉络膜血管及视网膜毛细血管、视盘区小血管内,血管周围组织无阳性染色.结论 低剂量SonoVue兔眼超声造影具有可行性,不同MI值低剂量超声造影条件下血-视网膜屏障通透性无明显改变.
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夏枯草对STZ诱导的小鼠糖尿病视网膜病的改善作用
目的:考察夏枯草水提物(PV)对链脲霉素(STZ)诱导的C57小鼠非增殖性糖尿病视网膜病(NPDR)的改善作用及其作用机制.方法:通过连续5d腹腔注射STZ制备C57小鼠糖尿病模型,进而诱导建立糖尿病并发症NPDR实验动物模型.将造模成功的小鼠按体质量随机分为模型组、PV低剂量组(100 mg/kg)、PV高剂量组(200 mg/kg),另设有一组小鼠腹腔注射溶媒对照作为正常对照组,每组16只.小鼠末次腹腔注射STZ后1个月灌胃给药PV或生理盐水,连续1个月.采用视网膜组织伊文氏蓝渗漏实验检测NPDR小鼠中血-视网膜屏障(BRB)的破坏情况;采用ELISA方法检测血清中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;采用Western-blot方法检测视网膜组织中小胶质细胞/巨噬细胞特异性蛋白(Iba1)的表达,并检测核因子κB (NF-κB)的转录激活.结果:模型组小鼠视网膜中伊文氏蓝渗漏值明显升高(P＜0.001),而PV高低剂量组均对此有显著的改善作用(P＜0.001);模型组小鼠血清中IL-1β、TNF-α含量明显高于正常组(P＜0.05),而PV高低剂量组血清中IL-1β、TNF-α含量均较模型组明显降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).模型组小鼠视网膜组织中Iba-1蛋白表达明显上调(P＜0.001),而PV高低剂量组Iba-1表达明显低于模型组(P＜0.001).模型组小鼠视网膜组织中Phospho-p65蛋白含量显著增加(P ＜0.001),胞核中p65蛋白的表达显著上调(P＜0.001);而PV高低剂量组中磷酸化p65蛋白表达明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.001),胞核中p65蛋白表达明显低于模型组(P＜0.001).结论:PV能改善STZ诱导C57小鼠NPDR,其机制可能是抑制了NF-κB介导的炎性信号通路,减少了炎性因子IL-1β、TNF-α的表达,缓解了STZ诱导糖尿病小鼠视网膜组织的炎性损伤和BRB的渗漏.
关键词： 非增殖性糖尿病视网膜病 夏枯草 血-视网膜屏障 炎性损伤 NF-κB -
慢性高眼压模型大鼠血视网膜屏障损伤观察
目的 观察慢性高眼压大鼠血视网膜屏障损伤情况.方法 建立慢性高眼压大鼠模型,并检测眼压,分为A、B 2组.分别于1、4、8周时行股静脉注射30 g/L伊文思蓝, 2 h后以温生理盐水灌注动物,立即摘除双侧眼球, A组行冰冻切片,荧光显微镜下观察;B组分离视网膜,称湿重,提取其内伊文思蓝,测光密度值,计算大鼠视网膜伊文思蓝渗透率.结果 激光造模后大鼠眼压持续缓慢升高,与对照组存在显著差异;4周时眼压达高值,为(24.8±3.2) mmHg;12周时眼压仍未见明显下降.激光后1、4、8周时荧光显微镜下观察视网膜内未见明显伊文思蓝渗透;1、4、8周时大鼠视网膜标准化EB含量分别为16.63±4.48、17.25±3.71、16.94±3.59(ng/mg), 与对照组(12.16±3.32) ng/mg比较无显著差异.相关分析慢性高眼压大鼠视网膜通透率与眼压呈正的直线相关.结论 慢性高眼压情况下尚不能破坏大鼠血视网膜屏障.
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糖可明对糖尿病视网膜病变中血-视网膜屏障的影响
目的 探讨糖可明对糖尿病视网膜病变的影响.方法 用链脲佐菌素(STZ)复制大鼠糖尿病视网膜病变模型,观察糖可明对模型动物血液生化、血-视网膜屏障(Blood-retinal barrier,BRB)渗漏和视网膜VEGF、occludin表达的影响.结果 糖可明连续给药8周后,可明显降低GLU、TG和TC的含量(P＜0.05～0.01);降低血-视网膜屏障的通透性;PCR结果显示,给药组大鼠视网膜occludin mRNA表达量显著增加(P＜0.05～0.01);免疫组化实验发现糖可明可显著降低视网膜全层的VEGF表达(P＜0.01).结论 糖可明通过下调糖尿病大鼠视网膜VEGF的表达和增加occludin的表达,从而发挥其保护BRB、降低BRB通透性的作用,延缓糖尿病视网膜病变的进程.
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金银花水提物对小鼠糖尿病视网膜病的改善作用
目的：观察金银花水提物（Lonicerae Japonicae Flos a-queous extract，FL）对糖尿病视网膜病（diabetic retinopathy， DR）的改善作用及其机制。方法采用链脲佐菌素（strep-tozotocin，STZ）腹腔注射制备 C57小鼠糖尿病模型，给药2个月后形成了 DR 早期病程阶段即非增殖性糖尿病视网膜（non-proliferative DR，NPDR）。使用伊文氏蓝实验检测血－视网膜屏障（blood-retinal barrier，BRB）的渗漏情况；运用Western blot 实验检测相关蛋白的表达；酶联免疫实验（En-zyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清中炎性因子的表达。结果伊文氏蓝实验发现 FL 可以剂量依赖性的抑制 STZ 诱导糖尿病小鼠中发生的 BRB 渗漏。Western blot结果显示 FL 可以抑制 STZ 诱导糖尿病小鼠视网膜组织中核因子κB （nuclear factor-κB，NF-κB）p65亚单位的转核激活，FL 还可以抑制视网膜组织中 kappa B 抑制剂（inhibitor of κB，IκB）、抑制性κB 激酶（inhibitor of nuclear factor κB kinase，IKK）、p65的磷酸化激活。进一步研究发现 FL 可以抑制 STZ 诱导糖尿病小鼠视网膜组织中升高的小胶质细胞／巨噬细胞特异性蛋白（ionized calcium binding adapter mole-cule 1，Iba1）的表达，提示 FL 可以抑制神经小胶质细胞的活化。ELISA 实验结果发现 FL 能降低 STZ 诱导糖尿病小鼠血清中升高的炎性细胞因子如白介素（interleukin，IL）-6，-1β。结论FL 可能通过抑制神经小胶质细胞的活化，抑制NF-κB 介导的炎性信号通路，缓解视网膜的炎性损伤和 BRB的渗漏，从而发挥改善 DR 的药效活性。
