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bcr／abl基因特异性小干扰 RNA 对 K562细胞增殖凋亡和 SH2肌醇磷脂酶基因表达的影响研究
目的：通过小干扰RNA （ siRNA）沉默K562细胞bcr／abl基因使SH2肌醇磷脂酶（ SHIP）基因表达增加，探讨SHIP基因缺失对K562细胞增殖凋亡的影响及机制。方法构建bcr／abl基因的化学合成siRNA，并转染到K562细胞，分为转染特异性siRNA实验组、转染非特异性siRNA对照组、空白对照组。 Western blotting法检测转染后K562细胞p210表达量，实时荧光定量PCR （ FQ-RT-PCR）检测各组细胞中SHIP mRNA表达量； Western blotting法检测SHIP、磷酸化蛋白激酶B 308（p-Akt308）和磷酸化蛋白激酶B 473（p-Akt473）的表达量； MTT比色法检测K562细胞增殖率；流式细胞仪检测K562细胞凋亡率；酶联免疫吸附试验（ ELISA）法检测核因子（ NF）-κB活性。结果转染特异性siRNA实验组K562细胞p210表达量、 p-Akt308表达量、 p-Akt473表达量较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低， SHIP mRNA表达量、 SHIP表达量、细胞凋亡率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组升高（P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞p210表达量、 SHIP mRNA表达量、 SHIP表达量、 p-Akt308表达量、 p-Akt473表达量、细胞凋亡率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。第1天、第3天、第5天转染特异性siRNA实验组K562细胞增殖率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低（P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞增殖率比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）。第3天、第5天转染特异性siRNA实验组NF-κB活性较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低（ P＜0.05）；空白对照组与转染非特异性siRNA对照组NF-κB活性比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论 SHIP基因表达受bcr／abl基因的调控， SHIP表达缺失可能是K562细胞过度增殖和凋亡减少的重要因素。
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bcl-2小分子干扰 RNA 对人子宫内膜癌RL -952细胞阿霉素敏感性的影响
目的：研究靶向bcl-2小分子干扰 RNA （ siRNA ）干扰序列对人子宫内膜癌RL-952细胞阿霉素（ DOX）敏感性的影响及相关作用机制。方法2014年5—8月，将siRNA干扰序列转染人子宫内膜癌RL-952细胞，设3个实验组：空白对照组、 bcl-2 siRNA干扰组（转染bcl-2 siRNA干扰序列）及阴性对照组（转染siRNA空载序列），检测bcl-2 siRNA干扰组的转染效率和3组bcl-2表达水平。将细胞随机分成5组，分别为空白对照组、阴性对照组（转染siRNA空载序列）、干扰组（转染bcl-2 siRNA干扰序列）、 DOX组（加入5μg／ml DOX）、联合组（转染siRNA干扰序列并加入5μg／ml DOX），检测细胞活力、细胞凋亡率、半胱氨酸蛋白酶（ Caspase ）-3、 Caspase-9活性及细胞色素C水平。结果 siRNA干扰序列转染人子宫内膜癌RL-952细胞的转染效率为（94.6±12.5）％。3组bcl-2表达水平比较，差异有统计学意义（F＝8.75， P＜0.05）。 bcl-2 siRNA干扰组bcl-2表达水平低于空白对照组和阴性对照组（q＝3.99、2.87， P＜0.01）。5组细胞活力比较，差异有统计学意义（F＝42.52， P＜0.05）。干扰组、DOX组、联合组细胞活力低于空白对照组（ q ＝7.66、8.64、6.89， P＜0.05）；联合组细胞活力低于DOX 组（ q＝6.76， P＜0.01）。5组细胞凋亡率比较，差异有统计学意义（F＝112.34， P＜0.05）。干扰组、 DOX组、联合组细胞凋亡率高于空白对照组（q＝5.78、4.99、6.21， P＜0.05）；联合组细胞凋亡率高于DOX组（q＝4.89， P＜0.01）。5组Caspase-3、 Caspase-9活性及细胞色素C水平比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）。干扰组、 DOX组、联合组Caspase-3、 Caspase-9活性及细胞色素C水平高于空白对照组（P＜0.05）； DOX组、联合组Caspase-3活性高于阴性对照组，干扰组、 DOX组、联合组Caspase-9活性高于阴性对照组（ P＜0.05）；联合组Caspase-3活性高于干扰组， DOX组、联合组Caspase-9活性高于干扰组（ P＜0.05）；联合组Caspase-3、 Caspase-9活性及细胞色素C水平高于DOX组（ P＜0.05）。结论靶向bcl-2 siRNA干扰序列可以增强人子宫内膜癌RL-952细胞的DOX敏感性， bcl-2可作为人子宫内膜癌基因治疗的候选靶点。
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siRNA 干扰雄激素受体相互作用蛋白 HSPBAP1对人前列腺癌 PC3细胞恶性表型的影响
目的：探讨siRNA干扰雄激素受体相互作用蛋白HSPBAP1对前列腺癌PC3恶性表型的影响。方法 siRNA干扰PC3细胞HSPBAP1的表达，检测细胞增殖、克隆形成、细胞周期及迁移和侵袭的变化。结果 siHSPBAP1组与对照组相比，增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力显著减弱（ P ＜0．05）， G0／G1期细胞数增多，S期和G2／M期细胞数显著减少（ P ＜0．05）。结论干扰HSPBAP1能够抑制前列腺癌PC3细胞的恶性表型。
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α-胞衬蛋白siRNA对人涎腺导管细胞的影响
目的：观察α‐胞衬（α‐Fodrin）蛋白小干扰RNA（siRNA）对人涎腺导管（HSG）细胞的影响，探讨α‐Fodrin siRNA治疗干燥综合征（SS）的作用。方法实验分对照组、空载体组、α‐Fodrin siRNA1组及α‐Fodrin siRNA2组，将成功构建的10μg α‐Fodrin siRNA1和α‐Fodrin siRNA2表达载体分别采用脂质体法转染 HSG细胞，空载体组 HSG细胞转染等剂量的pGFP‐V‐RS空载体。转染后24、48、72和96 h观察细胞转染效率，实时荧光定量（RT ）‐PCR法检测4组HSG细胞中α‐Fodrin mRNA的表达水平；细胞荧光免疫法检测4组细胞中α‐Fodrin蛋白的表达水平；ELISA法检测4组细胞上清液中IFN‐γ、IL‐10的表达水平。结果转染后48 h HSG细胞转染效率高；转染后48 hα‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组 HSG细胞中α‐Fodrin mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组和空载体组（P＜0．05），且α‐Fodrin siRNA2组中α‐Fodrin mRNA的表达水平低于α‐Fodrin siRNA1组的表达水平（P＜0．05）；α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组细胞上清液中IL‐10的水平明显升高，较对照组和空载体组差异有统计学意义（P＜0．05），α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组比较差异无统计学意义（P＞0．05）；α‐Fodrin siRNA1组和α‐Fodrin siRNA2组细胞上清中 IFN‐γ的水平低于对照组和空载体组，但4组之间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 HSG细胞转染α‐Fodrin siRNA载体后，α‐Fodrin mRNA和蛋白的表达水平下降，同时细胞上清中IL‐10的水平升高、IFN‐γ水平下降，提示α‐Fodrin siRNA可以减轻炎性反应，为SS的治疗提供实验依据。
