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bcr/abl基因特异性小干扰 RNA 对 K562细胞增殖凋亡和 SH2肌醇磷脂酶基因表达的影响研究

刘小军;杨琳;潘玉夏;王兴哲;尚银涛;王茜;杨敬慈;罗建民

摘要: 目的:通过小干扰RNA ( siRNA)沉默K562细胞bcr/abl基因使SH2肌醇磷脂酶( SHIP)基因表达增加,探讨SHIP基因缺失对K562细胞增殖凋亡的影响及机制。方法构建bcr/abl基因的化学合成siRNA,并转染到K562细胞,分为转染特异性siRNA实验组、转染非特异性siRNA对照组、空白对照组。 Western blotting法检测转染后K562细胞p210表达量,实时荧光定量PCR ( FQ-RT-PCR)检测各组细胞中SHIP mRNA表达量; Western blotting法检测SHIP、磷酸化蛋白激酶B 308(p-Akt308)和磷酸化蛋白激酶B 473(p-Akt473)的表达量; MTT比色法检测K562细胞增殖率;流式细胞仪检测K562细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测核因子( NF)-κB活性。结果转染特异性siRNA实验组K562细胞p210表达量、 p-Akt308表达量、 p-Akt473表达量较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低, SHIP mRNA表达量、 SHIP表达量、细胞凋亡率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组升高(P<0.05);空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞p210表达量、 SHIP mRNA表达量、 SHIP表达量、 p-Akt308表达量、 p-Akt473表达量、细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。第1天、第3天、第5天转染特异性siRNA实验组K562细胞增殖率较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低(P<0.05);空白对照组与转染非特异性siRNA对照组K562细胞增殖率比较,差异无统计学意义( P>0.05)。第3天、第5天转染特异性siRNA实验组NF-κB活性较空白对照组和转染非特异性siRNA对照组降低( P<0.05);空白对照组与转染非特异性siRNA对照组NF-κB活性比较,差异无统计学意义( P>0.05)。结论 SHIP基因表达受bcr/abl基因的调控, SHIP表达缺失可能是K562细胞过度增殖和凋亡减少的重要因素。

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