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三氧化二砷通过激活Caspases酶诱导髓性白血病细胞凋亡
目的:明确Caspases酶是否与三氧化二砷(As2O3)诱导的人髓性白血病细胞凋亡有关;明确蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的激活物PMA对As2O3与VP16诱导的细胞凋亡是否有不同的影响.方法:把NB4和HL60细胞株放入有或无Caspases酶抑制剂(Z-VAD.fmk或Y-VAD.Cho)的As2O3中进行培养;凋亡以细胞形态学,DNA梯带和流式细胞分析来评价.多聚的磷酸腺苷聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase,PARP)裂解被用作Caspases酶激活的标志.结果:NB4和HL60细胞株在As2O3诱导凋亡的过程中均出现了PARP裂解;Z-VAD.fmk--Caspases酶广谱抑制剂,可以阻断As2O3诱导的细胞凋亡和PARP裂解;但Y-VAD.Cho--Caspases酶的选择性抑制剂,没有此效应;在足以激活PKC的条件下用PMA预培养HL60细胞2～8 h,不论对As2O3还是VP16诱导的凋亡均无明显影响.结论:对于培养的髓性白血病细胞,As2O3诱导细胞凋亡是始自瀑布式激活Caspases酶的远端,通过PARP裂解来实现的.PKC的激活,不论对于As2O3还是VP16诱导的细胞凋亡均无影响.
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用cDNA微矩阵技术分析三硫化二砷作用于NB4细胞后的基因改变
1994年起,我所率先应用口服四硫化四砷和三硫化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)患者,迄今已达100多例,5年存活率90%以上[1].硫化砷对APL患者的治疗作用机制目前尚不清楚.正如肿瘤的发生是多因素、多步骤、多环节的过程一样,药物对肿瘤细胞的作用也是多环节的,硫化砷对NB4细胞的效应也不例外.传统的研究方法仅仅从一个基因、一个蛋白入手研究砷剂对细胞的作用,所获得的信息往往比较单一,很难对砷作用于细胞的机制全面了解.基因微矩阵技术的引入,可以多参数同时研究大量基因在不同刺激条件下的差异表达,更深入、全面了解硫化砷对NB4细胞的作用机制[2,3].为此,我们以三硫化二砷为代表,通过基因微矩阵技术检测其对NB4细胞基因表达的影响,对该药作用于NB4细胞后基因的表达谱改变进行分析,寻找硫化砷对NB4细胞效应的多个"分子靶点",阐明三硫化二砷对NB4细胞效应的分子机制.
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三氧化二砷对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞外基质代谢的影响
[目的]探讨三氧化二砷(ATO)对增生性瘢痕成纤维细胞(HSF)增殖及细胞外基质代谢的影响.[方法]0 μmol/L(对照组)、2 μmol/L、4 μmol/L、8 μmol/L的ATO作用HSF 24、48、72 h后,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,酶联免疫吸附(ELISA)法检测Ⅰ型胶原蛋白(CoLⅠ)和CoL Ⅲ含量,western blot检测基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-13及基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)表达.[结果]与对照组比较,2、4、8 μmol/L的 ATO显著降低HSF细胞活力(P<0.01),提高细胞早期凋亡率及晚期凋亡率,使细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),降低细胞中CoLⅠ、CoL Ⅲ含量(P<0.01),下调TIMP-1表达,上调MMP-1,MMP-13表达(P<0.01);与2 μmol/L 比较,4、8 μmol/L的ATO能显著显著降低HSF细胞活力(P<0.01),提高细胞早期凋亡率及晚期凋亡率,使细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),降低细胞中CoLⅠ、CoL Ⅲ含量(P<0.01),下调TIMP-1表达(P<0.01),上调MMP1及MMP13表达(P<0.01);与4 μmol/L 比较, 8 μmol/L的ATO能显著降低HSF细胞活力(P<0.01),提高细胞早期凋亡率及晚期凋亡率,使细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),降低细胞中CoLⅠ、CoLⅢ含量(P<0.01),下调TIMP-1表达(P<0.01),上调MMP1及MMP13表达(P<0.01).[结论]ATO能显著的抑制HSF增殖及细胞外基质合成,促进细胞外基质降解.
