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二甲磺酸乙烷对大鼠睾丸胚胎型Leydig细胞的作用
目的:评价细胞毒性药物二甲磺酸乙烷对新生大鼠睾丸胚胎型Leydig细胞的作用效应及安全使用剂量.方法:选取出生后3 d的雄性SD幼鼠共40只,分为对照组(二甲基亚砜溶剂组)、二甲磺酸乙烷 75 mg/kg组、二甲磺酸乙烷 100 mg/kg组和二甲磺酸乙烷 125 mg/kg组,每组10只.予腹腔内注射不同实验剂量的二甲磺酸乙烷,注射后4 d分别处死幼鼠;测量动物体重及睾丸重量,放射免疫法检测血清中睾酮水平,睾丸组织冰冻切片行3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)染色,实时荧光定量PCR技术及Western blot技术检测睾丸组织中Leydig细胞相关特异基因及蛋白的表达水平.结果:药物注射后4 d,与对照组相比较,在血清睾酮水平方面[(0.542±0.117)μg/L,(0.124±0.021)μg/L,(0.113±0.015)μg/L,vs.(0.834±0.172)μg/L,P<0.05],75 mg/kg剂量组轻度下降,而100 mg/kg剂量组和125 mg/kg剂量组则明显降低;睾丸组织3β-HSD染色显示:75 mg/kg剂量组仍可见少量的3β-HSD染色呈阳性的胚胎型Leydig细胞(fetal leydig cell,FLC),100 mg/kg剂量组和125 mg/kg剂量组无3β-HSD染色呈阳性的FLC存在,但125 mg/kg剂量组睾丸曲细精管细胞排列严重紊乱;RT-PCR及Western blot检测显示:100 mg/kg剂量组睾丸组织Hsd3b1和Cyp17a1的mRNA表达水平及其相应蛋白表达水平明显降低(P<0.001).结论:二甲磺酸乙烷能够特异性地破坏新生雄性SD大鼠睾丸组织中的胚胎型Leydig细胞,腹腔注射100 mg/kg二甲磺酸乙烷可建立起稳定、可靠的大鼠睾丸去胚胎型Leydig细胞模型.
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二甲磺酸乙烷对成年大鼠睾丸间质不同时间点细胞类固醇合成酶的影响
目的 研究二甲磺酸乙烷(EDS)注射对雄性大鼠睾丸间质细胞类固醇关键合成酶表达的影响,并进一步了解EDS对大鼠睾丸间质细胞类固醇关键合成酶可能的调节机制.方法 将25只90 d雄性SD大鼠随机分为两组,对照组(0d,n-5)一次性腹腔内注射生理盐水,EDS组(n=20)一次性腹腔内注射EDS 70 mg/kg体重.EDS组注射后7、21、35、90 d后取血清和睾丸组织,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清及睾丸中的睾酮水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹方法(Western blot)分别检测睾酮合成相关基因类固醇急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类同醇脱氢酶1型(3β-HSD1)、P45017α-羟化酶1(P450c17a1)、17β-羟基类固醇脱氢酶3型(17β-HSD3)mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组比较,EDS处理7d后,睾丸内的睾丸间质细胞几乎完全被破坏,导致睾酮水平急剧下降(P＜0.01),睾酮合成相关酶StAR、3βHSD、P450scc、P450c17、17β-HSD3的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P＜0.01),而处理21、35 d后,上述相关酶mRNA及蛋白表达水平均有所回升(P＜ 0.01或P＜0.05),处理90 d后,上述相关酶基因及蛋白的表达水平已经基本上恢复到与对照组相近的水平,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EDS能够特异性地破坏雄性SD大鼠睾丸组织中的睾丸间质细胞,EDS的此种效应对研究睾丸间质细胞缺失下睾丸功能的变化进而研究精子发生的内分泌调控均有较大意义.
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二甲磺酸乙烷致间质细胞破坏所引起的成年大鼠睾丸和附睾的组织学变化:形态定量研究
目的:定量研究睾酮分泌剧烈减少所致睾丸和附睾的组织学变化.方法:14只成年SD大鼠腹腔内注射二甲磺酸乙烷(EDS,75mg/kg),14只注射生理盐水作为对照.7天后处死各组中的一半动物,过5天后处死另一半.取睾丸和附睾组织块,甲基丙烯酸树脂包埋.用体视学的光学体视框技术估计睾丸内的细胞数,并用其它形态定量研究方法获取另外一些参数.结果:EDS注射使睾丸内的间质细胞几乎完全消失,但对支持细胞总数没有影响.EDS注射7天后,生精上皮内可见许多长形精子细胞滞留,附睾管内可见许多圆形精子细胞.EDS注射12天后,精子细胞和精母细胞的排列明显变疏松,生精细胞之间出现明显的裂隙,裂隙近似放射状朝向生精小管腔;睾丸内的非B型精原细胞总数和精母细胞总数与对照组相似,但B型精原细胞总数增加59%,而早期(圆形)、中期和晚期(长形)精子细胞总数分别减少37%、72%和52%.结论:EDS所致精子发生损害主要是(1)精子释放障碍,(2)精子细胞、精母细胞分离并伴有精子形成和成熟分裂障碍.
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二甲磺酸乙烷对成年大鼠精囊组织形态结构的影响
目的:研究二甲磺酸乙烷(EDS)注射对大鼠精囊不同组织结构体积的影响. 方法:27只约90日龄雄性SD大鼠随机分成2组,对照组(n=14)一次性腹腔内注射生理盐水,EDS组(n=13)一次性腹腔内注射EDS75 mg/kg体重;7d和12d后取一侧精囊,制作甲基丙烯酸树脂包埋切片,用体视学方法估计精囊内各种结构的总体积. 结果:EDS几乎完全破坏睾丸内的Leydig细胞,导致急剧睾酮缺乏.与7d对照组(n=7)相比,7d EDS组(n=6)精囊(包括附着在精囊上的凝固腺)的体积减少53％[(138.2±12.9) mm3vs (64.9±3.6) mm3,P＜0.05],但该体积在7 dEDS组和12 d EDS组(n=7)之间无显著差异[(64.9±3.6) mm3vs (55.4±7.7) mm3,P＞0.05].与12 d对照组(n=7)相比,12dEDS组腺腔、腺上皮、平滑肌层和外膜的总体积分别显著减少97％、80％、58％和67％. 结论:EDS处理导致大鼠精囊腺腔、腺上皮、平滑肌层和外膜结构的严重萎缩.
