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二甲磺酸乙烷对成年大鼠睾丸间质不同时间点细胞类固醇合成酶的影响
目的 研究二甲磺酸乙烷(EDS)注射对雄性大鼠睾丸间质细胞类固醇关键合成酶表达的影响,并进一步了解EDS对大鼠睾丸间质细胞类固醇关键合成酶可能的调节机制.方法 将25只90 d雄性SD大鼠随机分为两组,对照组(0d,n-5)一次性腹腔内注射生理盐水,EDS组(n=20)一次性腹腔内注射EDS 70 mg/kg体重.EDS组注射后7、21、35、90 d后取血清和睾丸组织,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清及睾丸中的睾酮水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹方法(Western blot)分别检测睾酮合成相关基因类固醇急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类同醇脱氢酶1型(3β-HSD1)、P45017α-羟化酶1(P450c17a1)、17β-羟基类固醇脱氢酶3型(17β-HSD3)mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组比较,EDS处理7d后,睾丸内的睾丸间质细胞几乎完全被破坏,导致睾酮水平急剧下降(P＜0.01),睾酮合成相关酶StAR、3βHSD、P450scc、P450c17、17β-HSD3的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P＜0.01),而处理21、35 d后,上述相关酶mRNA及蛋白表达水平均有所回升(P＜ 0.01或P＜0.05),处理90 d后,上述相关酶基因及蛋白的表达水平已经基本上恢复到与对照组相近的水平,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EDS能够特异性地破坏雄性SD大鼠睾丸组织中的睾丸间质细胞,EDS的此种效应对研究睾丸间质细胞缺失下睾丸功能的变化进而研究精子发生的内分泌调控均有较大意义.
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硫酸镍对体外培养的大鼠睾丸间质细胞类固醇合成酶的影响
目的 探讨硫酸镍对体外培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮(T)分泌及类固醇合成酶基因表达的影响.方法 采用体外分离、纯化和培养的大鼠睾丸间质细胞,分别用0、250、500和1 000 μmol/L硫酸镍处理6、12和24 h.用酶联免疫吸附法检测培养上清液中T浓度,用实时荧光定量PCR技术检测间质细胞类固醇合成快速调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、类固醇17α-羟化酶(P450c17) mRNA的表达水平.结果 人绒毛膜促性腺激素(hCG)和硫酸镍处理24 h后,硫酸镍0μmol/L组与0h组比较,间质细胞分泌T浓度和StAR mRNA表达量均升高(P＜0.05),而硫酸镍1 000 μmol/L组T浓度和StAR mRNA表达量均降低(P＜0.05).NiSO4各浓度组与对照组比较,T浓度以及StAR、P450scc、3β-HSD和P450c17 mRNA的表达量均明显降低(P＜0.05).结论 硫酸镍引起的体外培养大鼠睾丸间质细胞T分泌量降低与类固醇合成酶基因表达下调有关.
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类固醇合成酶在亚临床库欣综合征患者中的表达及意义
目的 通过检测类固醇合成酶CYP11 B1和CYP17在亚临床库欣综合征腺瘤(SCS)、正常肾上腺皮质(NA)、肾上腺无功能瘤(NFA)及皮质醇分泌瘤(CPA)中的表达,探讨SCS的分泌状态是否与类固醇合成酶的表达相关.方法 提取20例CPA、6例SCS、15例NFA、8例NA的组织RNA,采用实时荧光定量PCR、Western印迹及免疫组织化学方法检测CYP17、CYP11B1mRNA及蛋白在不同肾上腺组织中的表达,比较不同组织中二者表达的差异,并与患者的临床资料行相关性分析.结果 CYP17、CYP11B1 mRNA及蛋白在不同组织中均有表达.二者在CPA中高表达,在SCS中表达稍高于NA和NFA (P ＜0.05).二者在CPA中的表达与血清皮质醇水平呈正相关,与ACTH水平呈负相关(P＜0.05).结论 亚临床库欣综合征腺瘤中高表达的CYP11B1和CYP17可能与患者皮质醇分泌异常相关.
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早期糖尿病小鼠睾丸中睾酮合成关键酶的变化
目的 建立小鼠1型糖尿病模型,研究糖尿病早期时睾丸中睾酮合成关键酶的变化.方法 雄性成年鼠20只,随机分为对照组10只、糖尿病模型组10只.通过ip链脲佐菌素(150 mg/kg)制备糖尿病模型,成功制备糖尿病模型后4周处死小鼠,取血清和睾丸组织备用.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测睾丸组织中促黄体生成素受体(LHR)、类固醇激素合成灵敏调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶Ⅵ型(3β-HSD6)、17a-羟基化酶/17,20-裂解酶Ⅰ型(P450c17a1)及17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅲ型(17β-HSD3)相应mRNA(Lhcgr、Star、Cyp11a1、Hsd3b6、Cyp17a1和Hsd17b3)含量,酶联免疫吸附法测定血清中睾酮和黄体生成素(LH)含量、睾丸组织中3β-HSD1、P450c17a1及17β-HSD3酶活性.结果 与对照组比较,4周糖尿病小鼠血清中睾酮和LH含量显著降低(P＜0.05);睾丸组织的Lhcgr、Star、Cyp11a1、Hsd3b6、Cyp17a1和Hsd17b3 mRNA含量显著降低(P＜0.05、0.001);3β-HSD1、P450c17及17β-HSD3酶活性显著降低(P＜0.05、0.01).结论 早期糖尿病小鼠睾丸中睾酮合成关键酶的表达显著降低.
