首页 > 文献资料
-
藏红花素诱导人脑胶质瘤细胞U87凋亡的作用机制研究
目的 探讨藏红花素促进人脑胶质瘤细胞U87凋亡的作用及其机制.方法 培养U87细胞系,随机分为二甲基亚砜对照组(对照组)和藏红花素治疗组(藏红花素组).采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同剂量藏红花素(低浓度组、中浓度组、高浓度组)对人胶质瘤细胞U87增殖的影响;流式细胞仪观察细胞凋亡情况.Western-blot检测ERK1/2,p-ERK1/2的表达变化.结果 与对照组比较,藏红花素组U87细胞的生存率明显降低;随着藏红花素浓度增加,U87细胞的凋亡率显著上升(18.92％→51.68％→70.12％),组间差异有统计学意义(x2=14.102,P＜0.05);Western-blot结果显示,与对照组比较,藏红花素组的p-ERK1/2表达降低,而高浓度藏红花素组p-ERK1/2表达降低显著,不同组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 藏红花素可能呈剂量依赖性的通过抑制p-ERK1/2促进U87细胞凋亡,发挥重要的抗肿瘤作用.
-
U87胶质瘤细胞p53基因全场cDNA克隆及序列分析
目的 克隆U87胶质瘤细胞p53基因编码序列,并对其序列进行分析.方法 根据NCBI GenBank中p53 cDNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从U87胶质瘤细胞总RNA中对p53基因编码序列进行克隆;并通过DNA MAN软件将克隆序列与NCBI GenBank中序列进行比对,分析U87细胞中p53基因编码序列特点.结果 经测序验证,成功克隆了p53基因编码序列,通过序列比对发现U87细胞中p53基因72位密码子为精氨酸残基.结论 成功克隆了U87细胞中p53基因编码序列,分析发现U87细胞中p53基因表达产生的是72位密码子为含精氨酸残基的p53野生型蛋白,为进一步研究U87细胞中p53基因功能特性及其与胶质瘤的相关性奠定了基础.
-
miR-145在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖及侵袭的影响
目的 探讨miR-145在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖侵袭的影响.方法 用实时荧光定量PCR力方法检测39例胶质瘤组织及其对应癌旁组织miR-145的表达;利用LipofectAMINETM2000将miR-145模拟物或抑制剂及其阴性对照转染至人U87胶质瘤细胞,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测人胶质瘤U87细胞的增殖及侵袭能力.结果 胶质瘤组织中miR-145的相对表达量为17.26±6.05,癌旁组织的miR-145相对表达量为53.58±21.26,胶质瘤组织中miR-145的表达显著低于癌旁组织(P＜001).与对照组相比,miR-145模拟物能够显著抑制胶质瘤U87细胞系的增殖以及侵袭能力(P＜0.01);miR-145抑制剂则能够显著上调胶质瘤U87细胞系的增殖以及侵袭能力(P＜001).结论 miR-145在胶质瘤组织中是低表达的,在胶质瘤U87细胞中过表达miR-145能够抑制细胞的增殖及侵袭能力.
-
miR-21在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖及迁移的影响
目的 探讨miR-21在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖迁移的影响.方法 用实时荧光定量PCR方法检测39例胶质瘤组织及其对应癌旁组织miR-21的表达;利用LipofectamineTM2000将miR-21模拟物或抑制剂及其阴性对照转染至人U87胶质瘤细胞,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测人胶质瘤U87细胞的增殖及迁移能力.结果 胶质瘤组织中miR-21的相对表达量为4.58±1.55,癌旁组织的miR-21相对表达量为1.87±0.59,胶质瘤组织中miR-21的表达显著高于癌旁组织(R＜0.01).与对照组相比,miR-21模拟物能够显著上调胶质瘤U87细胞系的增殖以及迁移能力(P＜0.01);miR-21抑制剂则能够显著降低胶质瘤U87细胞系的增殖以及迁移能力(P＜0.01).结论 miR-21可能是治疗胶质瘤的潜在靶点.
-
蛋白酶体抑制剂MG-132对体外人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对体外人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别以不同浓度(0、2.5、5、10和20μmoL/L)的MG-132培养U87胶质瘤细胞,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同培养时间(12、24、48、72 h)对U87胶质瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪分析MG-132对U87胶质瘤细胞凋亡的影响,HE染色观察细胞形态学变化.结果 通过与正常对照组比较,2.5～20μmoL/L浓度的MG.132在12、24、48及72 h均可抑制U87细胞增殖并诱导其凋亡,并在一定范围内呈时间和剂量依赖性;各亚组与对照组差异具有统计学意义(P<0.05);形态学检查呈现凋亡细胞的特征.结论 MG-132可抑制U87胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡,在一定范围内呈时间和剂量依赖性.
关键词： 蛋白酶体抑制剂MG-132 U87胶质瘤细胞 细胞凋亡 -
新候选肿瘤抑制基因溶质载体8号家族中的2号成员基因对胶质瘤细胞株U87的侵袭迁移能力和裸鼠致瘤性的影响
目的 探讨溶质载体8号家族中的2号成员基因(SLC8A2)对胶质瘤细胞U87的迁移侵袭能力和裸鼠移植瘤生长的影响及其机制.方法 构建稳定表达SLC8A2基因的U87-SLC8A2细胞株(实验组)和稳定表达GFP的U87-NC细胞株(阴性对照组).Transwell小室及预铺50μl Matrigel基质胶的Transwell小室检测SLC8A2对U87细胞侵袭和迁移能力的影响,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染该基因后肿瘤细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9及MT1-MMP转录水平的变化,明胶酶谱法检测分泌至细胞培养基中MMP-2酶活性的变化；裸鼠皮下移植瘤实验(5只/组)检测SLC8A2对U87细胞致瘤性的影响.结果 U87-NC和U87-SLC8A2穿过Transwell小室基膜的细胞数分别为(279.70±17.50)个及(4.30±0.58)个,而穿过预铺Matrigel基质胶的Transwell小室基膜的细胞数分别为(274.0±21.3)个和(12.7±1.2)个,差异有统计学意义(P＜0.01)；与U87-NC比较,U87-SLC8A2细胞中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MTl-MMP的转录水平分别下降了(55.4±3.2)％、(78.7±5.3)％、(79.7±4.6)％、(53.9±3.2)％及(70.9±4.4)％(P＜0.01),且U87-SLC8A2细胞分泌的MMP-2酶活性较U87-NC下降了(93.2±5.1)％(P＜0.01)；接种U87-SLC8A2细胞的裸鼠全都不致瘤,而接种对照组细胞的裸鼠全部致瘤成功.结论 SLC8A2可下调MMP的活性而抑制胶质瘤细胞U87的侵袭迁移能力,并能显著抑制U87细胞在裸鼠体内的生长及增殖.
关键词： 溶质载体8号家族中的2号成员基因 U87胶质瘤细胞 侵袭 迁移 致瘤性 -
异柠檬酸脱氢酶1基因突变增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性
目的 探讨胶质瘤细胞异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因突变对替莫唑胺(TMZ)细胞毒性的影响.方法 将培养的U87胶质瘤细胞分组转染含空载体(空载体组)、野生型IDH1基因(野生组)和R132H突变型IDH1基因(突变组;IDH1第132位的精氨酸被组氨酸所取代)质粒,利用液相色谱串联质谱法检测细胞上清液中2-羟基戊二酸(2-HG)水平、噻唑蓝法检测细胞增殖活性、实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测细胞caspase 3 mRNA和蛋白质表达;将含三种不同质粒的U87细胞接种大鼠建立荷瘤大鼠模型并观察大鼠经TMZ治疗后60 d存活率.结果 与空载体组和野生组比较,突变组细胞上清液中2-HG水平、细胞caspase 3 mRNA和蛋白质表达水平均显著升高(P＜0.05),而细胞增殖活性显著下降(P＜0.05);TMZ治疗后60 d,突变组大鼠存活率显著升高(P＜0.05);空载体组和野生组之间均无统计学差异(P＜0.05).结论 IDH1 R132H基因能够增加TMZ对神经胶质瘤细胞的细胞毒性作用并提高其治疗荷瘤大鼠的存活率.
-
miR-335在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖及侵袭的影响
目的 探讨miR-335在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖侵袭的影响.方法 用实时荧光定量PCR方法检测39例胶质瘤组织及其对应癌旁组织miR-335的表达;利用LipofectAMINETM2000将miR-335模拟物或抑制剂及其阴性对照转染至人U87胶质瘤细胞,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测人胶质瘤U87细胞的增殖及侵袭能力.结果 胶质瘤组织中miR-335的相对表达量为0.93±0.09,癌旁组织的miR-335相对表达量为0.33±0.02,胶质瘤组织中miR-335的表达显著低于癌旁组织(P＜0.01).与对照组相比,miR-335模拟物能够显著抑制胶质瘤U87细胞系的增殖以及侵袭能力(P＜0.01);miR-335抑制剂则能够显著上调胶质瘤U87细胞系的增殖以及侵袭能力(P＜0.01).结论 miR-335在胶质瘤组织中是低表达的,在胶质瘤U87细胞中过表达miR-335能够抑制细胞的增殖及侵袭能力.
-
槲皮素对胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响
目的 探讨黄酮类化合物槲皮素对人胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响.方法 将U87细胞分成Q0、Q50、Q100和Q1504个组,Q0组加适量二甲亚砜(槲皮素溶剂)处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100、150 μmol/L.分别通过transwell体外侵袭实验、transwell体外迁移实验、Click-iT Edu test技术和流式细胞术检测槲皮素对其侵袭迁移能力,增殖能力及其细胞周期的影响.结果 槲皮素处理36 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150组的侵袭细胞比率分别为:52.08％、24.63％和13.13％,P均＜0.05.槲皮素处理12h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150的迁移细胞比率分别为:49.46％、26.78％和14.56％,P均＜0.05.槲皮素处理24 h后,Q0、Q50、Q100和Q150组的增殖细胞百分比分别为25.21％、18.38％、16.74％和15.24％.G0/G1期C6细胞所占比例分别为71.14％、72.71％、69.29％、66.47％,S期分别为25.32％、22.48％、21.96％、23.32％,G2/M期分别为3.53％、4.80％、8.75％、10.25％;Q100、Q150组的G2/M期细胞比例与Q0组比较,P均＜0.05.结论 槲皮素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭迁移能力；并可通过阻断U87细胞的细胞周期进程来抑制其增殖.
-
131I-Anti-EGFRv Ⅲ的制备及对U87胶质瘤细胞的放射免疫效应
目的 研究放射性核素碘(131I)标记表皮生长因子受体Ⅲ型突变体单克隆抗体IgG(Anti-EGFRvⅢ)的方法及放射免疫活性,观察标记产物131I-Anti-EGFRvⅢ对U87胶质瘤细胞的生物学效应.方法 利用Iodogen法标记131I至Anti-EGFRvⅢ,测定放化纯度、标记率、比活度、稳定性.经体外细胞结合试验分析131I-Anti-EGFRvⅢ的免疫活性,通过MTT法检测放射免疫效应.结果 131I-Anti-EGFRvⅢ放射化学纯度>90%,24、48、72 h放射性化学纯度依次为91.25%、90.74%和89.88%.标记率为64.56%,比活度为0.56 MBq/μg.131I-Anti-EGFRvⅢ与U87细胞结合率为41.69%,1.110 MBq 131I-Anti-EGFRvⅢ即有大抑制细胞生长效应,随着时间延长,抑制效应更加明显.结论 Iodogen法标记131I-Anti-EGFRvⅢ具有较好的放射免疫活性,体外能够有效抑制U87胶质瘤生长.
关键词： 放射免疫治疗 U87胶质瘤细胞 表皮生长因子受体Ⅲ型突变体 131I
