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Siah2在肿瘤发生、发展过程中的作用
肿瘤已经成为制约人类健康的第二大疾病,新研究表明Siah2在肿瘤发生发展中起着至关重要的作用.本篇文章重点论述Siah2诱发肿瘤的机制,通过siah2/PHD/HIF-1α通路及siah2/SPRY2/Ras两条通路.除介绍各环节结构及生物特性,更阐明其间的相互作用及信号通路,为肿瘤治疗提供参考依据.
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多发性骨髓瘤中miR-21与SPRY2基因表达的相关性研究
目的：检测多发性骨髓瘤（MM）患者外周血miR-21的表达水平，研究MM中miR-21与SPRY2基因表达的相关性。方法选择30例MM患者、15例意义未明单克隆丙种球蛋白病（MGUS）患者及20例正常对照（NC）的门诊患者，用实时荧光PCR定量检测miR-21和SPRY2表达水平；Western blot检测miR-21和SPRY2在MM细胞系中表达；在荧光显微镜下观察：U266用脂质体转染荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor后miR-21的表达。结果 MM组血清循环miR-21的表达水平较MGUS组和NC组显著增高，差异有统计学意义（P＜0.01）；在miR-21内源性高表达的MM细胞株中，SPRY2明显低表达；反之，明显高表达；荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor，转染效率90%以上，转染mimics细胞miR-21表达量（98.6±14.2）较未处理的U266细胞miR-21表达量（0.82±0.13）升高了120.2倍（差异有显著的统计学意义，P＜0.001），转染inhibitor细胞miR-21表达量（0.37±0.06）较未处理细胞降低了61.9%（差异有明显的统计学意义，P＜0.05）。结论 miR-21可能是导致SPRY2在MM中表达下调的一个负性调控因子。miR-21与MM 的发生发展和疾病预后有密切关系，可作为判断MM 患者预后不良指标之一。
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miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.
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微小核糖核酸-21调控spry2影响Jurkat细胞炎症反应的研究
目的:探讨微小核糖核酸(miRNA)-21通过调控spry2进而对Jurkat细胞炎症反应的影响.方法:将人T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞分为miRNA-21模拟物组、miRNA-21模拟物阴性对照组、miRNA-21抑制物组和miRNA-21抑制物组阴性对照组,每组例数为8,进行细胞转染,使用荧光定量PCR检测各组细胞的miRNA-21和spry2 mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹技术检测各组spry2蛋白表达情况,同时用酶联免疫法检测细胞上清液IL-10、IL-2和TNF-α的分泌水平.结果:与其阴性对照组比较,模拟物组miRNA-21的相对表达量和IL-10的分泌水平明显增加(P＜0.05),spry2 mRNA的相对表达量和spry2的相对蛋白含量显著减少(P＜0.05)；抑制物组miRNA-21的相对表达量和细胞上清液IL-10的分泌水平明显减少(P＜0.05),spry2 mRNA相对表达量和spry2的相对蛋白含量显著增加(P＜0.05)；两组细胞上清液TNF-α和IL-2的分泌水平均无明显变化(P＞0.05).结论:在Jurkat细胞中,miRNA-21可能通过抑制其靶基因spry2的表达而促进抗炎细胞因子IL-10的分泌,表明miRNA-21可能通过影响IL-10的分泌而作为血管的一种保护因子.
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SPRY2正向调节TNF-α诱导的成纤维细胞瘤L929细胞毒作用
目的 探索SPRY2分子在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的L929细胞毒作用中的调节作用.方法 应用RT-PCR方法观察SPRY2基因在不同质量浓度TNF-α刺激作用下表达水平的变化;应用重组腺病毒介导SPRY2基因过表达方法观察其对TNF-α细胞毒活性的调解效应.结果 L929细胞中存在SPRY2基因的天然表达,并且其表达水平随TNF-α刺激质量浓度的升高而升高,过表达SPRY2基因促进TNF-α诱导的L929细胞死亡.结论 SPRY2分子在TNF-α介导的肿瘤细胞杀伤效应中发挥正向调节作用.
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MiR-21下调SPRY2表达对多发性骨髓瘤细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究
目的:探讨miR-21下调SPRY2基因表达在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)发生发展以及转移过程中的作用.方法:构建miR-21表达载体LV-anti-miR-21及脂质体转染法筛选稳定沉默SPRY2的MM细胞系.应用实时定量PCR和Western blot检测miR-21表达和SPRY2蛋白表达水平.四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力.结果:实时定量PCR及Western blot检测结果表明:转染U266细胞后,U266/LV-anti-miR-21慢病毒MOI 20组和MOI 40组miR-21表达量较U266/un组差异明显下降(P＜0.05);转染miR-21 mimics组的U266细胞SPRY2的蛋白表达量较无转染组(untreated)和阴性对照组(siRNA)明显降低,差异均具有统计学意义(P＜0.01).与无转染组、阴性对照组相比:MTT法显示转染组48、72、96h细胞的生长速度明显减慢,增殖率明显下降(P＜0.01);流式细胞术表明miR-21 mimics转染U266细胞48、72h后,细胞凋亡率分别为U266组[(24.7±1.97)％、(38.6±1.56)％]、siRNA组[(27.3±1.72)％、(37.3±1.59)％]和U266/miR-21组[(12.7±1.27)％、(22.1±1.63)％],与两对照组比较,U266/miR-21组细胞凋亡率明显降低,G0/G1期细胞明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).划痕实验显示转染组24、48h细胞迁移的能力明显减弱(P＜ 0.05);Transwell实验证实转染组48、72h细胞穿过聚磷酸酯膜的U266细胞数明显减少,细胞穿膜能力明显降低(P＜0.05).结论:MiR-21下调SPRY2基因表达能够在体外条件下促进MM细胞的增殖和侵袭作用,揭示其在MM的发生、发展及转移过程中的作用及可能的机制,为确立新分子靶向治疗提供可靠的研究依据.
