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miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探讨miRNA-27a靶向SPRY2调控Wnt/β-catenin信号通路对人卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量RT-PCR和Western blot法检测卵巢癌组织、癌旁正常上皮结缔组织和HO-8910细胞、正常卵巢上皮细胞的miRNA-27a和SPRY2表达水平;MTT法检测转染细胞的增殖情况;Transwell实验检测细胞侵袭情况;荧光素酶分析验证miRNA-27a对SPRY2的靶向调控能力;免疫荧光染色检测miRNA-27a与SPRY2对Wnt/β-catenin信号通路的调控能力.结果 卵巢癌组织、HO-8910细胞中miRNA-27a的表达水平分别高于癌旁正常上皮结缔组织、卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05),而SPRY2的mRNA和蛋白表达水平均低于癌旁正常组织及卵巢正常上皮细胞(P﹤0.05).与B组相比,C组和E组HO-8910细胞增殖及侵袭能力均下调(P﹤0.05).F组的荧光素酶活性明显高于G组(P﹤0.01).C组的HO-8910细胞中,β-catenin表达上升,且进入细胞核.结论 miR-NA-27a通过靶向抑制SPRY2激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进人卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力.
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白花蛇舌草的有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌通过Fas/FasL信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡
目的 研究中药白花蛇舌草的有效成分2-羟基-3-甲基蒽醌对人卵巢癌细胞HO-8910生长的抑制作用和凋亡的影响.方法 不同浓度的2-羟基-3-甲基蒽醌与人卵巢癌细胞HO-8910分别培养0、24、48、72 h,用台盼蓝染色法测定HO-8910细胞存活率;以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测HO-8910细胞的凋亡率;Western blot法检测Fas和FasL蛋白的表达;采用荧光比色法测定Caspase-3和Caspase-8蛋白酶的活性.结果 随着2-羟基-3-甲基蒽醌浓度的增加及作用时间的延长,药物对HO-8910细胞的生长有明显的抑制作用;HO-8910细胞的凋亡率亦随之增高,且呈药物浓度及时间依赖关系;2-羟基-3-甲基蒽醌作用HO-8910细胞后Fas和FasL的蛋白表达水平逐渐上升;Caspase-3和Caspase-8蛋白酶的表达亦逐渐增强;Caspase-3和Caspase-8抑制剂能够抑制2-羟基-3-甲基蒽醌诱导的HO-8910细胞凋亡.结论 2-羟基-3-甲基蒽醌可以诱导HO-8910细胞凋亡,Fas/FasL通路在2-羟基-3-甲基蒽醌诱导的HO-8910细胞凋亡过程中起重要作用.
关键词： 白花蛇舌草 2-羟基-3-甲基蒽醌 HO-8910 凋亡 -
HLA-G在卵巢癌组织中的表达及对NK细胞杀伤活性的影响
通过免疫组织化学法(IHC)检测卵巢癌组织中HLA-G的表达;克隆编码全长HLA-G1 cDNA,将该基因通过真核表达载体pVITRO2-mcs转染至HLA-G阴性的HO-8910、OVCAR-3细胞株,采用RT-PCR、流式细胞术(FACS)及Westernblot鉴定、分析转染细胞中HLA-G的mRNA及蛋白质表达;LDH释放法检测卵巢癌细胞表达HLA-G后对NK细胞杀伤功能的影响.结果显示,66.7％ (22/33)卵巢癌组织表达HLA-G分子,而正常组织未见其表达;基因转染后,HLA-G在HO-8910及OVCAR-3细胞表面获得稳定表达.细胞毒实验结果显示,HLA-G能显著抑制NK-92对卵巢癌细胞的杀伤活性(P＜0.01);HLA-G特异性抗体87G阻断后,能明显恢复NK-92细胞对HO-8910-G、OVCAR-3-G的杀伤功能.本研究结果提示,卵巢癌细胞通过表达HLA-G分子抑制NK细胞的杀伤活性,在卵巢癌细胞逃避宿主的免疫监视中起重要作用.
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细胞自噬对紫杉醇诱导人卵巢癌细胞HO-8910凋亡的影响
目的 探讨紫杉醇体外对人卵巢癌细胞株HO-8910自噬的影响.方法 体外培养人卵巢癌细胞HO-8910.不同浓度紫杉醇作用24、48、72 h后,采用MTT比色法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞自噬小体含量,Western blot测定自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达水平,并检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达变化.结果 紫杉醇可诱导HO-8910细胞发生凋亡,同时存在其他类型的死亡.紫杉醇0.1 μmol/L作用24 h,Beclin-1和LC3蛋白的表达水平均升高,p-Akt和PI3K的蛋白水平明显降低.结论 紫杉醇可诱导体外对人卵巢癌细胞株HO-8910发生自噬.其作用机制可能与上调自噬相关基因表达和抑制自噬负调控PI3K-Akt信号转导通路有关.
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顺铂、紫杉醇对人卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性表达的影响
目的探讨顺铂和紫杉醇对卵巢癌细胞端粒酶活性表达的影响.方法用TRAP-ELISA法分别检测顺铂(5μg/ml)和紫杉醇(10-6M)作用不同时间后卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性改变,并以TUNEL法同步检测细胞凋亡.结果随着药物作用时间的延长,HO-8910细胞株的凋亡率逐渐增加,而端粒酶活性逐渐降低.在紫杉醇作用60 h后,细胞凋亡达(88.30±1.00)%时,端粒酶才完全丧失活性;而顺铂作用12 h后,该细胞株的端粒酶活性完全消失时细胞凋亡率仅有(11.43±0.23)%.结论端粒酶活性抑制可能是顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡的机制之一,临床监测端粒酶活性表达有助于对抗卵巢癌化疗药物的疗效进行客观评价.
