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丙烯腈T淋巴细胞体外染毒对其脂筏Caveolin-1蛋白、MEK蛋白的影响
目的 丙烯腈染毒T淋巴细胞,分析膜脂筏及Ras/Raf/MEK/ERK信号通路中MEK蛋白变化,探讨丙烯腈免疫毒性的可能作用机制.方法 采取体外细胞培养技术,以T淋巴细胞Jurkat细胞株为研究对象,分为空白对照组、低浓度、中浓度、高浓度丙烯腈(0、20、100和500μmol/l)细胞染毒组,分析膜脂筏Caveolin-1蛋白、MEK蛋白变化.结果 随染毒浓度增加,受检细胞经处理4h后各染毒组与对照组细胞膜胆固醇含量差异有统计学意义(P＜0.05),细胞膜胆固醇的含量下降,间接表明脂筏的数量越少；Caveolin-1蛋白定位改变,变构便于信号传递；p-MEK蛋白随浓度增高条带变浅.结论 丙烯腈可能通过破坏脂筏结构,脂筏数量减少,Caveolin-1蛋白位移变构,Ras/Raf/MEK/ERK信号传导过程受到抑制而发挥免疫毒性.
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脂筏在人类疱疹病毒6型装配中的作用
为了探讨脂筏在人类疱疹病毒6型(HHV-6)装配中的作用,用HHV-6 GS株感染HSB2细胞,用非离子去污剂Triton X-100提取脂筏成分,利用Western blot分析HHV-6包膜糖蛋白与脂筏的相关性.并用免疫荧光双标记的方法,从分子共定位的角度研究HHV-6糖蛋白B(gB)与GPI(glycosyl-phosphatidyl inosital)锚固蛋白CD59分子以及神经节苷脂GMI(monosialotetrahexosyl ganglioside)分子之间的表达与分布关系.结果发现HHV-6包膜糖蛋白B、H、L、Q1和Q2(gB、gH、gL、gQ1和gQ2)分布在脂筏部位.激光共聚焦显微镜可观察到CD59分子及GM1均与HHV-6包膜糖蛋白B有着相同的分布,即脂筏提供HHV-6装配的平台.关于脂筏在人类疱疹病毒6型装配中的作用,这是第一次报道.
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脂筏与感染性疾病
脂筏是生物膜中含有特殊脂质和蛋白质的微区,不仅是跨膜信号转导等多种生命活动的重要参与者,而且在感染性疾病的发生和发展中扮演了重要的角色.脂筏是多种病原体进入宿主细胞的位点,支持病毒粒子的组装和出芽,其信号转导功能一方面可以启动宿主细胞的保护性免疫应答,另一方面也被病原体利用,以利于病原体的传播和疾病发生.此外,脂筏在朊蛋白感染、HCV基因组复制、多种细菌毒素作用以及维持疟原虫的胞内寄生生活等方面也都有重要作用.脂筏在感染性疾病中的重要作用提示,它很有可能成为扭转这些疾病发生和进程以及治疗这些疾病的重要入手点.
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少突胶质细胞的细胞骨架在髓鞘形成中作用的研究进展
少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞,其发育分化终包裹神经轴突形成髓鞘的调控机制正成为目前神经科学研究领域关注的热点之一.近年来有学者关注到少突胶质细胞的细胞骨架在这一过程中可能扮演了重要的角色.相关研究表明,少突胶质细胞内骨架蛋白在一系列细胞内外信号分子及脂筏的介导下,调节细胞一系列复杂的形态学改变,细胞突起由简单逐渐成为多重复杂的分支,而后延展出初级薄膜缠绕神经元轴突形成髓鞘层,后通过细胞骨架的重组完成对髓鞘的紧压而形成成熟的髓鞘.
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脂筏在阿尔茨海默病发病机制中的作用
Aβ毒性学说在阿尔茨海默病（AD）发病机制中占主导地位。由于淀粉样前体蛋白（APP）的代谢紊乱，产生了过量的Aβ42，后者迅速聚集形成寡聚物，启动了Aβ瀑流效应，造成了Aβ的沉积，形成老年斑。越来越多的实验表明，脂筏在Aβ的产生和异常沉积过程具有重要调节作用。脂筏是富含胆固醇和磷脂的细胞膜特殊区域，本文对脂筏的结构功能及其在AD发病机制中作用进行了概述。
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脂筏及其在病原生物感染中的作用概述
脂筏是细胞膜上的微结构域,参与细胞的多种生物学行为,为细胞表面发生的蛋白质-蛋白质和蛋白质-脂类分子间的相互作用提供了平台.脂筏在多种病原生物的感染过程中发挥着重要作用.本文对脂筏的结构功能及其在病原生物的感染过程中发挥的作用进行了概述.
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脂筏在肿瘤发生发展中的作用及其作为药物靶点的研究
脂筏是细胞膜上具有特殊功能的微区域,通过动态聚集、募集及靶向运输作用为蛋白分子提供功能平台,调节细胞功能,该过程受到脂筏结构、内在组分及动态定位分子的多重调节.肿瘤的发生发展与凋亡异常、侵袭转移力增强等因素密切相关,而脂筏可调节上述因素,因此成为近年来肿瘤治疗研究中的新靶点.
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顺铂通过促进死亡受体4在脂筏内聚集增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胃癌MGC803细胞凋亡的作用
目的 探讨顺铂影响胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的机制.方法 以顺铂和TRAIL单独及联合作用MGC803细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-8和caspase-3的蛋白表达,免疫荧光显微技术观察脂筏和死亡受体4(DR4)的分布.以50 mg/L的制霉菌素预处理MGC803细胞1 h,之后加入顺铂和TRAIL,观察细胞凋亡的变化.结果 100 μg/L TRAIL作用MGC803细胞24 h,增殖抑制率为(8.51±3.45)%,细胞凋亡率为(3.26±0.89)%.8.49 mg/L顺铂作用MGC803细胞24 h,增殖抑制率为(52.58±4.57)%,细胞凋亡率为(23.10±3.41)%.100 μg/L TRAIL和8.49 mg/L顺铂联合作用时,细胞增殖抑制率提高至(76.43±5.35)%,细胞凋亡率提高到(42.56±4.11)%,均高于相同浓度顺铂和TRAIL单独作用组(P＜0.05).同时检测到caspase-8和caspase-3的裂解.TRAIL未引起明显的脂筏和DR4聚集,而顺铂明显促进了DR4在聚集脂筏内的定位.50 mg/L制霉菌素处理MGC803细胞24 h,细胞凋亡率为(3.66±0.52)%.经制霉菌素预处理后,顺铂作用下MGC803细胞的凋亡率为(22.76±2.97)%,与未经制霉菌素预处理组[(25.74±3.28)%]差异无统计学意义(P=0.248);而顺铂和TRAIL联合作用下细胞凋亡率为(31.52±3.99)%,与未经制霉菌素预处理组[(43.16±4.26)%]差异有统计学意义(P＜0.001).结论 顺铂通过促进死亡受体在脂筏聚集增强了TRAIL诱导的胃癌MGC803细胞凋亡.
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N-花生四烯酸氨基乙醇通过CB1受体及脂筏介导抑制结肠癌细胞的生长
目的 研究内源性大麻素N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)对结肠癌细胞系CaCo-2增殖及凋亡的影响,阐明CB1受体和脂筏所起的作用,进一步明确大麻素系统在结肠癌发生、发展中的作用及其分子机制.方法 分别以不同浓度的AEA、AEA+SR141716A(CB1受体拮抗剂)、AEA+AM630(CB2受体拈抗剂)和AEA甲基-β-环糊精(MCD,脂筏的耗竭剂)孵育结肠癌细胞CaCo-2.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,annexin V PE-7AAD双染流式细胞术检测细胞的凋亡,利用Westernblot方法检测CB1、CB2、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和caspase-3蛋白的表达.结果 AEA呈剂量依赖性地抑制结肠癌细胞CaCo-2的增殖,5、10、20、40 μmol/L AEA的抑制率分别为(21.52±0.45)%、(42.16±0.21)%、(73.64±0.73)%和(83.28±0.71)%.SR141716A和MCD均能拮抗AEA所导致的增殖抑制效应.20 μmol/L AEA、20 μmol/L AEA+10 μmol/L SR141716A及20μmol/L AEA+1 mmol/L MCD的细胞增殖抑制率分别为(73.64±0.73)%、(16.15±0.75)%和(12.58±0.63)%.流式细胞术检测结果显示,AEA可致CaCo-2细胞凋亡,且只有MCD能有效地拮抗AEA所致的CaCo-2细胞凋亡.对照组、20 μmol/L AEA组和20 μmol/L AEA+1 mmol/L MCD组的细胞凋亡率分别为(2.95±0.73)%、(39.61±0.73)%和(14.10±0.64)%.Western blot检测结果显示,CB1、CB2、p-AKT及caspase-3蛋白在CaCo-2细胞中均有表达.AEA可抑制p-AKT的表达,促进caspase-3蛋白的表达,这两种效应均能被MCD拮抗.SR141716A能拮抗AEA对p-AKT蛋白表达的抑制作用.结论 内源性大麻素AEA可以有效地抑制结肠癌细胞CaCo-2的增殖并促进其凋亡,其抑制增殖的效应通过CB1受体和脂筏介导,促凋亡效应通过脂筏介导.大麻素系统在结肠癌的发生、发展中起重要作用,其中脂筏尤为关键.
关键词： N-花生四烯酸氨基乙醇 结肠肿瘤 Caco-2细胞 脂筏 CB1 -
脂筏对子宫颈癌细胞生长的影响
目的 探讨脂筏对子宫颈癌细胞生长的影响并初步探讨其作用机制.方法 将HeLa细胞系分为不处理对照组、脂筏干扰剂组及NADPH氧化酶抑制剂组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组培养24h后的细胞存活率,Western blot法检测各组细胞内缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白相对含量.结果 与对照组相比脂筏干扰剂组细胞的生长速度明显减慢(0.612±0.051与0.984±0.034),NADPH氧化酶抑制剂组显示了类似的效应(0.591±0.074与0.984±0.034),差异有统计学意义(t=4.062,P＜ 0.05).与对照组相比脂筏干扰剂组及NADPH氧化酶抑制剂组HIF-1α的表达量也明显降低(1.79±0.14与2.56±0.22; 1.54±0.12与2.56±0.22),差异有统计学意义(t=2.423,P＜ 0.05).结论 脂筏可能通过NADPH氧化酶激活途径激活HIF-1α及其下游原癌基因促进子宫颈癌细胞的生长,脂筏干扰剂及NADPH氧化酶抑制剂可能成为子宫颈癌药物治疗新的研究方向.
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阿萨希毛孢子菌脂筏的观察
目的 了解阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)菌丝生长脂筏(rapid lifts)的关系.方法 用荧光染剂Filipin对YPD液体培养基培养后的T.asahii进行荧光染色,在荧光显微镜下观察染色结果；在菌悬液中分别加入不同浓度的两性霉素B (0.2、0.5、1、2μg/L)进行干预并荧光染色,对比观察干预前后菌丝的生长变化.结果 T.asahii芽管、假菌丝以及菌丝顶端和分隔部位可见到Filipin荧光聚集；经不同浓度两性霉素B干预后,T.asahii生长受到不同程度的抑制,随着两性霉素B浓度的增加T.asahii的生长抑制越明显,顶端和隔膜部位荧光消失,而菌体内见散在荧光.结论 脂筏在调控T.asahii菌丝生长、分枝以及假菌丝继续出芽生长等方面起着重要的作用.
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抑制阿萨希毛孢子菌脂筏形成后对其致病性的影响研究
目的：观察阿萨希毛孢子菌（Trichosporon asahii, T. asahii）脂筏形成被抑制后对其致病性的影响。方法建立小鼠免疫抑制模型，将50只小鼠随机分为5组，每组10只。实验组分别接种经0.2、0.5、1.0、2.0μg/ml两性霉素B处理的菌悬液，对照组接种正常生长的菌悬液。连续观察3周，统计不同组别小鼠致死率，同时将内脏进行组织真菌培养及组织病理检查，计算感染率。结果对照组致死率为80%，内脏感染率为90%。接种经浓度为1.0μg/ml、2.0μg/ml两性霉素B处理而破坏T. asahii脂筏的菌悬液后，致死率和感染率分别为37.5%、20%以及50%、40%，与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）；接种经浓度为0.2μg/ml、0.5μg/ml两性霉素B破坏脂筏的菌悬液后，其致死率和感染率亦有不同程度的降低，但与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。感染小鼠的各脏器组织病理改变主要为急性化脓性炎症及肉芽肿性炎症，组织中可见关节孢子和菌丝。结论 T. asahii脂筏形成受到两性霉素B抑制后，其致死率和感染率明显降低，并随着药物浓度的增加而梯度减弱，即致病性相应降低。提示脂筏有可能成为抗真菌药物研究的新的靶位。
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脂筏的结构与功能及在眼科学领域的研究进展
生物膜与细胞的功能息息相关.脂筏是一种特殊的膜结构微区,具有参与胞吞胞饮、信号转导、运输胆固醇等重要功能.一些传染性疾病、心血管疾病、肿瘤、肌营养不良和阮病毒病可能与脂筏的功能紊乱有关.小窝是脂筏的一种,以小窝蛋白为标记蛋白;后者有三种亚型,存在于不同的细胞.晶状体、视网膜和角膜上均发现有小窝的存在及小窝蛋白-1的表达.小窝蛋白-1不仅参与晶状体上皮细胞间的信号转导,还与细胞缝隙连接蛋白相互作用,参与细胞间的通讯.小窝还参与角膜伤口愈合修复及视网膜杆细胞外节突触发送器的释放过程.
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神经细胞膜NMDA受体蛋白单分子胶体金标记扫描电镜定位研究
目的探讨神经元膜NMDA受体蛋白分子在神经元膜表面的分布规律,对单个膜NMDA受体蛋白进行定位.方法应用免疫胶体金技术、场发射枪扫描电镜方法,对原代培养大鼠皮层神经元膜表面NMDA受体进行定位标记、观测.结果NMDA受体蛋白分子标记的胶体金颗粒主要分布于神经元胞体两端近树突起始部分的胞膜脂筏小窝内,呈明显的颗粒点状分布.结论NMDA受体蛋白在细胞膜上主要与突触后膜分布一致,位于树突起始部及树突干膜脂筏微区内,免疫胶体金标记、场发射枪扫描电镜技术可以精确地定位标记后单个NMDA受体膜蛋白分子.
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脂筏与病毒感染的相关性研究进展
脂筏(lipid raft)是细胞膜上的微结构域,参与细胞的多种生物学行为.脂筏在病毒感染中也具有重要作用,脂筏与病毒感染的相关性研究为阐明病毒与宿主细胞的相互作用机制和病毒感染的防治提供了新思路.本文综述了脂筏与病毒感染相关性研究的方法和进展.
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植物固醇在脂质体中的应用研究进展
脂质体作为药物载体,由于其具有靶向性、可降低药物毒性等优点而备受关注.本文在阐述固醇分子在脂质体中的作用、脂质体液态有序相的特征、脂筏定义的基础上综述了植物细胞中脂筏的发现及植物固醇代替胆固醇作为脂质体膜材的必要性和可行性等相关问题的研究进展.
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脂筏在肿瘤坏死因子受体超家族信号传导途径中的作用
肿瘤坏死因子受体超家族在细胞信号传导通路中的作用是目前生物学研究的热点之一,细胞膜上的亚结构域-脂筏在这一过程中起着重要作用.本文对这一领域的研究进展作一简要介绍.
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细胞膜脂筏结构蛋白质组与血管内皮细胞功能调控
动脉粥样硬化发病起始于内皮细胞功能紊乱，在动脉粥样硬化病因学方面的工作集中在脂质代谢和炎症反应两个方面。内皮细胞膜表面脂筏结构参与到内皮细胞许多重要的生理功能中：感受细胞内胆固醇水平并参与胆固醇代谢，感受并传导血流剪切力信号，为许多信号分子相互作用提供平台。本文主要针对细胞膜脂筏结构蛋白质组与血管内皮细胞功能调控进行综述。
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系统性红斑狼疮患者外周血B细胞脂筏及细胞骨架蛋白的表达初探
目的 了解系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B细胞脂筏及细胞骨架蛋白的表达及分布.方法 密度梯度离心法分离SLE和健康对照者外周血单个核细胞,磁珠分选纯化B细胞.用异硫氰酸荧光素(FITC)标志的霍乱毒素B亚单位(CTB)对B细胞脂筏染色,流式细胞仪及激光共聚焦显微镜分析；用罗丹明标志的鬼笔环肽对B细胞骨架蛋白染色,激光共聚焦显微镜观察.并设空白对照组、来氟米特组干预培养活动期SLE患者B细胞4h,流式细胞术检测B细胞脂筏的改变.同时记录受试患者的临床资料SLE疾病活动指数(SLEDAI).计量资料进行方差分析或配对t检验,相关性分析采用Pearson法分析.结果 SLE活动组、治疗缓解组CTB-FITC与外周血B细胞脂筏结合率较健康对照组明显增高[(59±4)％,(51±5)％,(33±4)％,F=9.21,P=0.001].共聚焦显微镜观察B细胞脂筏及骨架蛋白的分布及表达时发现,在健康对照组中,脂筏主要均匀分布于B细胞膜中,散在出现小范围聚集；骨架蛋白主要分布于B细胞的外层.而在SLE组中,B细胞脂筏可出现表达和分布的异常,呈现细胞膜荧光染色厚度的增加、聚集范围扩大及荧光强度的增强；同时伴随着B细胞膜骨架蛋白染色荧光强度的减弱.在SLE活动组中,患者外周血B细胞脂筏表达水平与其SLEDAI呈正相关(r=0.632,P=0.028).并且,与空白对照相比,干预培养后来氟米特能降低CTB与活动期SLE患者B细胞脂筏结合率[(48±5)％和(39±5)％,t=2.29,P=0.048)].结论 SLE患者外周血B细胞脂筏和骨架蛋白的表达和分布存在异常,B细胞脂筏和骨架蛋白表达的调节可能在治疗SLE中具有一定的作用.
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脂筏在柯萨奇B3病毒感染心肌细胞中作用
目的 探讨脂筏在柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞中的作用,旨在为阐明CVB3致病的分子机理及寻找新的抗病毒靶点提供依据.方法 用甲基-β-环糊精(MβCD)去除细胞膜维持脂筏稳定性的胆固醇分子后感染CVB3,用Western blot法检测CVB3 VP1蛋白的表达并测定病毒的滴度,同时观察补充外源性胆固醇恢复MβCD对CVB3感染的抑制作用.结果 用MβCD去除胆固醇分子破坏细胞膜脂筏结构,可抑制CVB3感染细胞；1.2、5.5和10 mmol/L MβCD去除细胞膜胆固醇CVB3滴度分别为(4.2±0.06)、(3.5±1.05)、(3.0±0.15)和(2.0±0.15)lgPFU/mL,均低于无MβCD处理对照组的(5.7 ±0.06) lgPFU/mL(P ＜0.001)；补充外源性胆固醇可恢复MβCD对CVB3感染的抑制作用.结论 细胞膜脂筏在CVB3感染心肌细胞中起重要作用,是病毒进入细胞的关键因素.
关键词： 脂筏 甲基-β-环糊精(MβCD) 柯萨奇B3病毒(CVB3) 心肌细胞 感染
