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柯萨奇B3病毒基因在重组痘苗病毒中的表达
将编码柯萨奇B3病毒(CVB3)衣壳蛋白VP1和VP2的基因,分别克隆到具有7.5k启动子的痘苗病毒表达载体pGJP5上;将CVB3衣壳蛋白全基因克隆到具有T7启动子的痘苗表达载体pTM1上,并筛选到相应的重组痘苗病毒VVP1、VVP2和VVP/4/2/3/1.VVP1和VVP2稳定表达产物为CVB3衣壳蛋白VP1和VP2,而VVP/4/2/3/1的产物VP4/2/3/1为一无分泌性的多聚蛋白,且这三种表达产物均属无分泌性蛋白.为了表达成熟的CVB3衣壳蛋白,将去除5′端非编码区的CVB3全基因克隆到具有T7启动子的痘苗表达载体pTM1上,利用重组痘苗病毒VT7所提供的T7RNA聚合酶,在哺乳动物细胞中进行了暂时表达研究.Western blot分析提示,VP1、VP2和VP3蛋白得到成熟表达,且发现表达产物具有分泌性.本研究将为今后研究CVB免疫性打下基础.
关键词： 柯萨奇B3病毒(CVB3) 衣壳蛋白 重组痘苗病毒 -
重叠区扩增基因拼接法拼接hIL-2信号肽基因和CVB3的VP1基因
目的:将hIL-2信号肽基因拼接到CVB3 VP1基因的5'端,以获得分泌型VP1(sVP1)基因.方法:采用重叠区扩增基因拼接法.结果:凝胶电泳见到预期大小DNA条带,经测序表明基因序列与报导的hIL-2信号肽及CVB3 VP1的基因序列一致.结论:成功获得了融合基因sVP1.
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脂筏在柯萨奇B3病毒感染心肌细胞中作用
目的 探讨脂筏在柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞中的作用,旨在为阐明CVB3致病的分子机理及寻找新的抗病毒靶点提供依据.方法 用甲基-β-环糊精(MβCD)去除细胞膜维持脂筏稳定性的胆固醇分子后感染CVB3,用Western blot法检测CVB3 VP1蛋白的表达并测定病毒的滴度,同时观察补充外源性胆固醇恢复MβCD对CVB3感染的抑制作用.结果 用MβCD去除胆固醇分子破坏细胞膜脂筏结构,可抑制CVB3感染细胞；1.2、5.5和10 mmol/L MβCD去除细胞膜胆固醇CVB3滴度分别为(4.2±0.06)、(3.5±1.05)、(3.0±0.15)和(2.0±0.15)lgPFU/mL,均低于无MβCD处理对照组的(5.7 ±0.06) lgPFU/mL(P ＜0.001)；补充外源性胆固醇可恢复MβCD对CVB3感染的抑制作用.结论 细胞膜脂筏在CVB3感染心肌细胞中起重要作用,是病毒进入细胞的关键因素.
关键词： 脂筏 甲基-β-环糊精(MβCD) 柯萨奇B3病毒(CVB3) 心肌细胞 感染 -
柯萨奇B3病毒VP1基因在原核中的表达及其临床意义
目的:研究柯萨奇B3病毒(CVB3)VP1基因在大肠杆菌中的表达及其临床意义.方法:将柯萨奇B3病毒中国分离株VP1基因克隆入PQE-30载体,转导入大肠杆菌(Ml5)中,使CVB3的VP1基因在大肠杆菌中得到稳定的表达,采用NAT亲和方法纯化,间接ELISA方法做免疫学活性鉴定.结果:表达的VP1产物与抗柯萨奇B3病毒的兔抗CVB3(多克隆抗体)血清产生较强的免疫反应,与天然的CVB3蛋白抗原(病毒组织培养抗原)的抗原性近似.应用无关兔抗体对照呈阴性反应.应用表达的VP1产物作为抗原,对临床急性病毒性心肌炎患者血清进行了特异性IgM酶联免疫吸附试验检测,其结果与组织培养的CVB3制备的细胞蛋白抗原对上述患者血清的特异性IgM检测结果基本一致.结论:采用基因工程方法制备出的CVB3-VP1蛋白抗原产量高,纯化后免疫反应原性基本没有变化.试用表达CVB3的VP1基因工程抗原代替目前实验用有感染危险的病毒培养抗原的方法,快速、特异地检出CVB3的感染,为急性心肌炎的早期诊断和及时的临床治疗提供可靠的实验室诊断指标.
关键词： 柯萨奇B3病毒(CVB3) VP1基因 基因表达 -
新型苯并咪唑类化合物的合成及抗柯萨奇B3病毒活性
3-硝基邻苯二甲酸酐经氨解、Hoffman降解、水合肼还原及闭环反应得2-芳基-1H-苯并咪唑-4-羧酸,经氯化亚砜酰氯化后与相应的胺反应,制得2-取代芳基-1H-苯并咪唑-4-酰胺类衍生物1a～1g,均为新化合物.并测定了其抑制柯萨奇B3病毒(CVB3)活性.结果显示,化合物1b、1c、1e和1g的活性优于利巴韦林.
关键词： 苯并咪唑 柯萨奇B3病毒(CVB3) 抗病毒活性 合成
