抗瘤丸对神经胶质瘤细胞抑制作用的实验研究

目的 考察中药抗瘤丸对神经胶质瘤细胞的抑制作用.方法 采用MTT法在不同时间(24、48、72 h)检测系列浓度(0.5、1.O、1.5、2.0、2.5 mg·mL-1)抗瘤丸对人神经胶质瘤细胞U87-MG和大鼠神经胶质瘤细胞C6的抑制作用,同时分别进行空白对照比较.结果 抗瘤丸与空白相比能降低两种胶质瘤细胞的增殖率,且对细胞增值的影响与给药浓度及时间成正相关.在72h药物浓度2.5 mg·mL-1时,人胶质瘤细胞U87-MG和大鼠胶质瘤细胞C6的细胞增值率均低,分别为66%、60%.结论 中药抗瘤丸对大鼠胶质瘤细胞C6和人胶质瘤细胞U87-MG的增殖有抑制作用,其机理与抑制瘤细胞的增值有关.

MTT法测定中药益气活血方KLW_1对神经胶质瘤细胞U87-MG细胞增殖的抑制作用

目的 观察中药KLW_1对神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用.方法 采用MTT法在不同时间(24、48、72h)检测系列浓度的KLW_1(2.5、5.0、10.0及20.0 mg/mL)及TMZ(50.0、100.0、200.0及400.0μmol/L)对人神经胶质瘤细胞Ug7-MC的抑制作用,同时进行空白对照比较.结果 KLW_1及TMZ与空白相比均能抑制人胶质瘤细胞U87-MG的增殖,且KLW_1对U87-MG增殖的抑制作用与给药浓度及时间成正相关.在72h药物浓度20.0 mg· mL-1时,抑制率高,为64％.结论 中药KLW_1对人胶质瘤细胞U87-MG的增殖有抑制作用,其机理与抑制瘤细胞的增殖有关,且作用强度与作用时间、浓度相关.

Aβ1-42引起神经胶质瘤细胞U251中蛋白聚集体形成活性氧含量和线粒体膜电位增高

阿尔茨海默病 (AD)主要病理特征之一是大脑内老年斑 (SP) 中大量的β-淀粉样蛋白 (Aβ) 沉积,在SP的形成过程中Aβ1-42发挥启动蛋白聚集体形成的重要作用. 而Aβ1-42是否能够激活细胞的氧化应激反应或导致线粒体膜电位的改变目前尚未清楚.因此,我们于2003年8月至2004年3月对Aβ1-42对细胞内线粒体膜电位等的影响进行了探讨,报道如下.

咖啡因对体外培养U251胶质瘤细胞活性的影响

目的:研究咖啡因对体外培养U251神经胶质瘤细胞活性的影响.方法:采用MTT法研究不同浓度和作用时间对瘤细胞的影响.结果:随着咖啡因浓度增加、作用时间延长,OD值在逐渐下降,咖啡因在4～ 10mM时,24h与48h的OD值趋同,在10mM时三个时段的OD值基本相同.结论:本实验初步证明了咖啡因在体外可以抑制U251人胶质瘤细胞的细胞活性.

Klf4基因在人神经胶质瘤细胞U251中的稳定表达

目的:建立稳定表达Klf4基因的神经胶质瘤细胞U251 ,为探讨该基因在神经胶质瘤细胞中的功能奠定基础.方法:以低表达Klf4基因的人胶质瘤细胞系U251为材料,以Klf4基因转染U251细胞系,G418筛选,获取G418抗性单克隆进行培养,扩增后分别用免疫荧光技术、免役印迹技术(Western blot)验证获得的表达细胞株.结果:经转染和G418筛选后,荧光显微镜下见有明显表达Klf4基因的细胞,Western blot检测到转染基因Klf4后细胞KLF4蛋白的表达增高,而作为对照的转空载体的细胞Klf4的表达较低.结论:该方法成功建立了稳定转染基因Klf4的人胶质瘤U251细胞系,为进一步探讨该基因在肿瘤细胞的功能奠定了一定基础.

以聚氰基丙烯酸正丁酯为载体长春碱纳米粒的制备和性能评价及其对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞生长的影响

背景:长春碱纳米粒不仅化学特性改善,药物利用度提高,而且具有特异的靶向性.目的:制备硫酸长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(vinblastine sulfate poly (buty 1 cyanoacrylate) NP, VBL-PBCA-NP)并进行质量评价,检测其对大鼠C6脑胶质瘤细胞的生长抑制作用.设计、时间及地点:随机对照细胞实验,于2006-10/2007-12在西北农林科技大学动物医学院细胞生物学实验室完成.材料:以右旋糖酐为稳定剂,在pH2.0的条件下,利用乳化聚合法制备VBL-PBCA-NP.方法:取对数生长期的C6大鼠胶质瘤细胞,分别加入0.5,5,50,500,5000 μg/L的VBL-PBCA-NP或硫酸长春碱,同时设阴性对照组(加入完全培养基)和空白对照组(只加入完全培养基,不含细胞)及空白纳米粒组.主要观察指标:VBL-PBCA-NP纳米粒的外观形态、粒径、包封率及载药量;C6细胞的增殖抑制率及凋亡形态.结果:VLB-PBCA-NP分布均一,稳定,平均粒径为74.4nm,粒径分布较窄,包封率为74.47%,载药量为18.62%.与硫酸长春碱原料药相比,在0.5～5000 μg/L范围内,VBL-PBCA-NP能显著提高C6细胞的增殖抑制率(P<0.05),且更容易引起C6细胞凋亡,减少细胞数量.结论:制备的VBL-PBCA-NP载药量和包封率不是很高,但对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞有较强的生长抑制作用.

真核表达载体 pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）的构建表达及对神经胶质瘤细胞U87的影响

目的：以pEGFP-N3为载体，构建融合基因M-IL-2（88 Arg，125 Ala）的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala），检测融合基因在神经胶质瘤细胞U87中的表达以及重组蛋白对U87细胞的影响，为癌症的基因治疗提供实验基础。方法：通过PCR获得实验所需要的M-IL-2（88Arg，125Ala）基因片段，酶切后克隆入载体pEGFP-N3，构建M-IL-2（88Arg，125Ala）融合基因的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）。重组质粒经PCR、限制性内切酶分析及DNA序列测定证实构建成功后，用脂质体LipofectamineTM2000转染神经胶质瘤细胞U87，使用荧光显微镜观察转染效率，RT-PCR及Western blot检测M-IL-2（88Arg，125Ala）融合蛋白在U87细胞中的表达，CCK-8方法检测融合蛋白对U87细胞的影响并观察细胞形态变化。结果：经PCR、限制性内切酶酶切分析及DNA序列测定证实，重组真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）构建成功，经RT-PCR及Western blot检测证实重组基因可在U87细胞中表达，CCK-8方法检测到融合蛋白对U87细胞增殖有一定的影响。结论：真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88Arg，125Ala）构建成功，融合基因M-IL-2（88Arg，125Ala）可在U87细胞中表达且融合蛋白对肿瘤细胞的增殖有一定影响，为融合毒素M-IL-2（88Arg，125Ala）基因的进一步研究奠定了基础。

新的肿瘤抑素对C6脑神经胶质瘤体外实验研究

神经胶质瘤是颅内常见的原发肿瘤，呈浸润性生长，且术后复发率高，严重威胁患者的生命健康。目前神经胶质瘤的发病机制尚未十分清楚，据文献报道，神经胶质瘤的发生、发展与细胞凋亡密切相关［1-3］。其传统的治疗原则是术后先放疗后化疗，或单独放疗／化疗，但都难以提高其临床疗效［4］，治愈率仍较低。近年来，研究者们通过大量的基础研究正在寻求治疗脑神经胶质瘤的新策略。目前国内外已研究出的抗肿瘤药物众多，但多数价格昂贵且不良反应大，同时也存在耐药性问题，使其临床应用受到一定限制［5-7］。为此，寻找高效、低毒、价廉的新的治疗药物成为近年来研究的热点。本实验旨在研究一种新的肿瘤抑素对 C6脑神经胶质瘤细胞作用的影响，并通过检测神经胶质瘤细胞侵袭及细胞周期蛋白 D1表达变化，初步探讨其抑制神经胶质瘤细胞的可能作用机制，为进一步研究新的肿瘤抑素在临床上治疗神经胶质瘤提供了新的理论依据。

STAT3靶向RNAi腺病毒表达载体的构建与鉴定

目的 观察针对STAT3基因的RNAi腺病毒表达载体对大鼠神经胶质瘤细胞的干扰效果,为探索肿瘤基因治疗的新途径奠定基础.方法设计针对STAT3编码区的短发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,克隆到PGEM-T中,构建重组体,再对重组质粒进行酶切鉴定,DNA测序分析后再克隆到穿梭质粒PDC316中,通过Lipofectamine2000的介导和腺病毒包装质粒PBHG共转染至人胚肾HEK293细胞株中,经同源重组后获得重组腺病毒rAD-STAT3,应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒,以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度.以阴性为对照,转染到大鼠神经胶质瘤(C6)细胞,Western印迹法检测STAT3蛋白质表达量的改变,RT-PCR法观察STAT3基因表达改变.结果酶切鉴定和测序分析均提示STAT3靶向RNAi病毒表达载体构建成功,阳性病毒载体转染后C6细胞STAT3基因表达及蛋白质表达均较阴性转染的对照组显著下降.结论 STAT3靶向RNAi腺病毒表达载体成功构建,并能有效抑制C6细胞中STAT3基因表达.

嘌呤核苷酸对海洛因处理过大鼠C6神经胶质瘤细胞增殖的影响

目的 探讨海洛因及嘌呤核苷酸对大鼠C6神经胶质瘤细胞增殖的影响.方法 体外培养大鼠C6神经胶质瘤细胞,分别以不同浓度的海洛因及嘌呤核苷酸处理细胞,MTT比色法检测海洛因和嘌呤核苷酸对细胞增殖的影响.结果 MTT实验表明,海洛因对大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖有抑制作用,120 mg/L海洛因作用24 h对C6细胞的抑制率达52%,并表现为剂量依赖性;嘌呤核苷酸对C6细胞的增殖有促进作用,120 mg/L嘌呤核苷酸作用24 h,细胞增殖率为30%,并表现为剂量依赖性.结论 海洛因抑制大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖;嘌呤核苷酸促进大鼠C6神经胶质瘤细胞的增殖,并在某种程度上对抗海洛因对C6细胞增殖的抑制作用.

海葵毒素对神经胶质瘤细胞的凋亡诱导作用

目的 研究从海葵组织中提取的海葵毒素(Phyllodiscus semonii toxin,PsTX)对人神经胶质瘤细胞(U251)凋亡的诱导作用及其可能机制.方法 MTT法检测PsTX对肿瘤细胞的增殖抑制率;原位末端脱氧核糖苷肽转移酶分析法(TUNEL)及DNA Ladder法检测PsTX对肿瘤细胞的凋亡诱导作用;免疫组织化学染色显示Fas蛋白在U251细胞中的表达.结果 PsTX对人神经胶质瘤细胞具有明显的生长抑制及促凋亡作用,PsTX诱导Fas在人神经胶质瘤细胞膜上表达增高.结论 PsTX可能通过Fas途径诱导人神经胶质瘤细胞凋亡.

海洛因对C6细胞增殖细胞核抗原基因表达的影响

目的:检测海洛因对大鼠神经胶质瘤C6细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达的影响,为探索海洛因成瘾的分子生物学机制提供依据.方法:大鼠神经胶质瘤C6细胞加入浓度为0～100 mg?L-1的海洛因进行细胞培养,24 h后用MTT法检测海洛因对C6细胞存活率的影响.RT-PCR法检测海洛因作用下C6细胞PCNA mRNA的表达.结果:MTT结果显示海洛因浓度为10、20和100 mg·L-1时c6细胞存活率分别为90.62%、80.97%和62.73%,与对照组比较明显下降(P<0.05).在转录物水平,浓度为20 mg?L-1的海洛因作用于C6细胞48 h时,PCNA基因的转录产物PCNA mRNA明显减少,与对照组比值为0.297(P<0.01).结论:海洛因浓度为20 mg·L-1时对C6细胞的增殖抑制作用接近30%,可能与海洛因成瘾形成有关.

神经胶质瘤细胞热休克蛋白抗原肽复合物的研究

神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间STAT3信号的交互作用

目的:探讨神经胶质瘤细胞(A 172/U251)与人血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cell,HBMEC)之间STAT3信号通路的交互作用.方法:建立A172、U251细胞与HBMEC的Transwell共培养体系,ELISA检测A172、U251细胞及其分泌因子VEGF对HBMEC分泌IL-6的影响,Western blotting检测HBMEC与A172/U251细胞共培养30 min时HB-MEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞STAT3蛋白及其磷酸化状态p-STAT3的影响,CCK-8、Transwell侵袭实验分别检测HBMEC及其分泌因子IL-6对A172/U251细胞增殖和侵袭的影响.结果:VEGF(50 ng/ml)组和共培养组(HBMEC分别和A172,U251细胞共培养)HBMEC的IL-6的表达量明显高于对照组(P＜0.01).共培养30 min时,A172/U251细胞的IL-6(50ng/ml)组、共培养组及(共培养+AZD1480)组的STAT3/p-STAT3蛋白的表达明显高于对照组(P＜0.01),(共培养+AZD1480)组的胶质瘤细胞STAT3/p-STAT3蛋白的表达能力显著低于共培养组(P＜0.01).IL-6 (50 ng/ml)组,共培养组及(共培养+ AZD1480)组的A172/U251细胞增殖及侵袭能力明显高于对照组(P＜0.01),(共培养+AZD1480)组的细胞增殖及侵袭能力显著低于共培养组(P＜0.01).结论:神经胶质瘤细胞与人脑微血管内皮细胞之间存在信号交互作用,且与JAK2/STAT3信号通路密切相关.

胶质细胞源性神经营养因子治疗缺血性脑血管疾病的新进展

胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)作为转化生长因子(TGF)-β超家族成员,是1993年从B19神经胶质瘤细胞的条件培养液中纯化的具有神经营养作用的蛋白质,损伤后的中枢神经元具有可塑性,在神经营养因子作用下其再生速度及质量均显著增强.GDNF作为对抗缺血性损伤的有效保护因子,其效应的发挥依赖于与受体的结合,GDNF受体系统由两部分构成:一部分为膜外糖磷脂酰肌醇(GPI),耦联的是GDNF

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2真核表达载体的构建及在SHG-44细胞的表达

目的:为探讨O-糖基化在肿瘤发生发展及转移中的作用和功能,构建pcDNA3/ppGalNAc-T2真核表达质粒并转染人神经胶质瘤细胞SHG-44.方法:采用PCR技术从pDONR201-T2得到ppGalNAc-T2全长编码序列,亚克隆至真核表达载体pcDNA-3.1,脂质体介导基因转染人神经胶质瘤细胞SHG-44细胞,采用RT-PCR法检测重组质粒的表达.结果:酶切图谱分析和基因测序证实pcDNA3.1-T2真核表达质粒构建成功.RT-PCR显示转染细胞有T2的表达.结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-T2,并成功转染入SHG-44细胞,为进一步研究ppGalNAcT2的功能奠定了基础.

新型SMO抑制剂SI-4650对人神经胶质瘤U87MG细胞增殖、凋亡和自噬能力的影响

目的 研究新型精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)小分子抑制剂SI-4650对人胶质瘤U87MG细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其分子机制.方法 MTT法检测细胞增殖情况;化学发光法检测SMO和乙酰多胺氧化酶(N1-acetyl-polyamine oxidase,APAO)的酶活性;高效液相色谱法(HPLC)检测细胞内多胺含量;Transwell法分析U87MG细胞的迁移能力;PI单染后结合流式细胞术分析细胞周期;PI/FITC-Annexin V双染后结合流式细胞术、Western blot分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜(LSCM)和Western blot分析细胞自噬.结果 SI-4650可明显抑制U87MG细胞内SMO和APAO的酶活性,干扰多胺代谢,并降低U87MG细胞内总多胺含量.用SI-4650处理能抑制U87MG细胞的增殖和迁移能力,使细胞发生G0/G1周期阻滞,并诱导U87MG细胞发生凋亡和自噬性死亡.结论 SI-4650具有杀伤神经胶质瘤U87MG细胞的药理活性,其机制可能与干扰多胺代谢和诱导细胞凋亡和自噬相关.

低浓度紫杉醇与替莫唑胺作用胶质瘤U87的机制

目的:探讨紫杉醇(PTX)、替莫唑胺(TMZ)对神经胶质瘤U87细胞的细胞周期阻滞的影响和可能机制.方法:将U87细胞分4组接种于细胞培养皿中,每孔接种103个,每组6孔,用CCK-8法绘制紫杉醇、替莫唑胺及两者不同浓度联合作用的增殖抑制曲线,测定增殖抑制率,光镜下观察增殖抑制周期.结果:PTX联合TMZ可以明显抑制U87细胞的增殖,抑制作用呈时间依赖性,较低浓度作用显著,光镜下显示细胞周期阻滞于纺锤体期.结论:PTX联合TMZ可以抑制神经胶质瘤U87细胞增殖,细胞周期阻滞于M期,从而诱导凋亡.

阿霉素联合TRAIL对人神经胶质瘤H4细胞增殖的影响

目的:探讨阿霉素联合TRAIL对人神经胶质瘤H4细胞增殖的影响.方法:应用MTT法检测200μg/LTRAIL、100 g/L、200g/L、300 g/L阿霉素及2者联合应用时H4肿瘤细胞的生长抑制率,以及联合应用MabDR5和(或)zIETD-fmk时的生长抑制率.结果:阿霉素与小剂量TRAIL联用能显著提高H4细胞的生长抑制率;应用Mab-DR5不能有效抑制TRAIL和阿霉素联用时对H4细胞的增殖抑制协同作用,而zIETD-fmk则可以.结论:小剂量阿霉素与TRAIL联合应用具有协同作用,可抑制H4细胞的增殖.

吡咯喹啉醌对胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对神经胶质瘤U87细胞的抑制作用,探讨相关作用机制.方法 培养的U87细胞进行随机分组,一组为正常培养,一组为PQQ处理.通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、Western blot、流式细胞术以及生化检测细胞周期蛋白E(Cyclin E)、细胞周期依赖性激酶2(CDK2)、p53及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的表达水平;分别通过膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)、2',7'二氯氢化荧光素已二脂(H2DCFDA)以及JC1染色,流式细胞术检测细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)水平以及线粒体膜电势(MMP);通过丙二醛(MDA)试剂盒检测MDA水平.结果 CCK-8检测结果提示PQQ能够有效抑制U87细胞的增殖.Western blot结果显示,与正常培养的U87细胞比较,PQQ处理组Cyclin E表达水平明显降低(t=6.487,P=0.001),CDK2表达水平也明显降低(t=2.830,P=0.030),而p53表达水平显著增加(t=7.949,P=0.000),此外,凋亡相关蛋白Caspase-3表达也显著增加(t=5.577,P=0.001).流式细胞术结果显示,PQQ处理组细胞凋亡百分比为(40.80±4.09)%,明显高于对照组细胞[(7.12±0.72)%],差异有统计学意义(t=6.665,P=0.000);PQQ处理组细胞ROS平均荧光强度为(2140.12±276.80),明显高于对照组细胞(605.50±57.93)%,差异有统计学意义(t=5.429,P=0.001);PQQ处理组细胞MMP水平(0.93±0.13)明显低于对照组(1.83±0.86),差异有统计学意义(t=5.900,P=0.000).MDA检测结果显示,PQQ处理组MDA水平[(3.31±0.27)nmol/mg prot]明显高于对照组[(2.18±0.34)nmol/mg prot],差异有统计学意义(t=2.566,P=0.033).结论 PQQ可以通过抑制细胞周期相关蛋白的表达,提高氧化应激水平,以及降低线MMP从而抑制U87细胞增殖,促进神经胶质瘤U87细胞凋亡.